Valfrihet och No-val analyser för att testa Resistance A. thaliana att tugga Insekter

Biology
 

Summary

Plantera motstånd mot tuggar insekt växtätare kan testas på flera sätt. Här visar vi hur man sätter upp ett val och en nej-val experimentera med den modell växten backtrav att identifiera motstånd mot skadedjur Pieris rapae.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Larver av de små vitkål fjäril är ett skadedjur i jordbruket inställningar. Denna larv art-flöden från växter i kål familjen, vilket inkluderar många grödor som kål, tar broccoli, brysselkål mm Uppfödning av insekter plats på kål växter i växthus. Minst två burar behövs för uppfödning av Pieris rapae. En för larverna och den andra innehåller de vuxna fjärilarna. För att undersöka betydelsen av växt-hormoner och giftiga kemikalier fabrik i motståndet mot denna insekt skadedjur, visar vi två experiment. Först, fastställande av roll jasmonic syra (JA - en växt hormon som ofta anges i motståndskraft mot insekter) i motståndet mot tugga insekten Pieris rapae. Caterpillar tillväxt kan jämföras på vildtyp och muterade växter nedsatt i produktionen av JA. Detta experiment anses vara "No Choice", eftersom larver tvingas livnära sig på en enda anläggning som syntetiserar eller är bristfällig i JA. För det andra visar vi ett experiment som undersöker rollen av glukosinolater, som används som äggläggning (äggläggande) signaler. Här använder vi WT och muterade Arabidopsis försämras i glukosinolat produktion i ett "val" experiment där kvinnliga fjärilar får välja att lägga sina ägg på växter av någon genotyp. Denna video visar experimentuppställning för både analyser samt resultat representant.

Protocol

Inget val Experiment:

  1. Försiktigt bifoga Arabidopsis växter av intresse i en plastmugg. I det här fallet: Col-0 (WT) och en mutant nedsatt i produktionen av JA. Se till att du begränsa skador på bladen. För att jag använder baksidan av denna pensel.
  2. Använd en fin pensel för att ta en nyligen kläckts larver från kolonin på kål.
  3. Placera försiktigt larv på den Arabidopsis växter.
  4. Vikt larv på dag 4, 7, 10. TIPS: odla dina växter i kort dag förhållanden (8 tim ljus) för att öka vegetativ tillväxt (1 larv kan uppfylla sin fulla livscykel på en anläggning).

Val Experiment:

  1. Två anläggningar är utvalda, en av varje genotyp. Bäst är att odla växter i samma kruka, för att begränsa andra faktorer, såsom fack effekter etc.
  2. Placera växterna i en fjäril bur.
  3. Välj en fertil kvinna. Jag fångar brukar en hona som aktivt lägger ägg i uppfödning kolonin.
  4. Släpp det kvinnliga i buren med valet av två fabriker i 24 timmar.

Tips 1: För att eliminera en inverkan på lärande, inte återanvända honor för senare val tester.

Tips 2: Man kan bara jämföra växter som har en liknande tillväxt fenotyp. Alternativt kan du montera ett blad från varje genotyp på toppen av en E-kolv och jämföra deras förmåga att attrahera en hona.

Besök de årliga översynerna av växtbiologi för mer information om detta protokoll och anläggning immunitet mot insekter herbivori.

Comments

6 Comments

  1. I thought you did an excellent job, nice and clear explainations, good transitions and summary.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 14, 2008 - 3:06 PM
  2. 1. perhaps you could explain why you use  arabidopsis instead of cabbage. My assumption is that much work, including sequencing of the genome, had been done on the arabidopsis so you were able to add-remove genetic components you wanted to test for. ². how long is a generation of the cabbage butterfly? 3. Choice experiment. Why did you not use multiple larvae released into cage with the two types of arabidopsis? Some what confusing because there were two different growth stages and two different stimuli tested for in the same testing 4. Excellent job of editing and presenting. It fit nicely on the video   Jay

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 6, 2008 - 8:00 AM
  3. Dear Jay, Thank you for your comments. Let me answer your questions and give you some additional information on the life cycle of Pieris rapae. 1. Larvae of the small white butterfly will feed from almost all cruciferous plants. We use Arabidopsis thaliana because of its short generation time, small size and above all its sequenced genome and vast number of available mutants. These mutants allow us to unravel the defense responses during the host-insect interaction. As demonstrated in the video, we show that jasmonic acid plays a major role in the plant's defensive capacities towards Pieris rapae. Interestingly, we also show that glucosinolates, whose breakdown products are toxic to many generalist caterpillars, are used as by Pieris rapae female butterflies (specialist on cruciferous plants) as oviposition cues. We have recently published a paper in Plant Physiology (March ²008) on this topic. ². Pieris rapae life cycle. The development of Pieris rapae strongly depends on the temperature and ranges from 5-7 weeks. We rear our insects at ²3C. Eggs hatch in 3-7 days; Larvae have 5 larval stages (L1-L5; ~ 10-14 day); Pupae (7-14 days); Adults (~14-²0 days). Under our rearing conditions eggs hatch in 5 days, complete larval development until pupation takes 1² days, pupa take ~7 days to eclosion, adult life is ~² weeks. 3. Using the video we wanted to show different experimental set-ups for testing plant-insect interaction. A choice test (preference) will give you additional insights that are not necessarily displayed in a no-choice test (edibility). There are other possibilities for choice tests, including the one you mentioned. The results obtained with this approach, e.g. leaf area eaten, are hard to quantify and rather subjective. Therefore, we mostly use the no-choice set-up to determine the effect on caterpillar performance. Martin 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 7, 2008 - 11:05 AM
  4. The demo was very clear to me, but the music was .........
    Maybe you should point out in the video, that these experiments have to repeated.

    Reply
    Posted by: Birgid B. S.
    July 7, 2009 - 2:13 AM
  5. I had a question regarding the increase of weight of the Caterpillar.well the readings are taken on 4,7,10 day.The coi1 plants if are consumed earlier ,how come the weight is increased,if no plant material is left till 10th day?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 14, 2012 - 11:19 PM
  6. I love this vedio and may you tag this vedio to me

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 16, 2012 - 11:44 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics