Séparation électrophorétique de protéines

Biology

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Summary

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode pour la séparation électrophorétique des protéines par électrophorèse sur gel de poly-acrylimide (PAGE).

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Chakavarti, B., Chakavarti, D. Electrophoretic Separation of Proteins. J. Vis. Exp. (16), e758, doi:10.3791/758 (2008).

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Abstract

L'électrophorèse est utilisée pour séparer des mélanges complexes de protéines (par exemple, à partir des cellules, fractions subcellulaires, fractions de colonne, ou immunoprécipités), pour enquêter sur des compositions sous-unité, et de vérifier l'homogénéité des échantillons de protéines. Il peut également servir à purifier des protéines pour des applications supplémentaires. En électrophorèse sur gel de polyacrylamide, les protéines migrent en réponse à un champ électrique à travers les pores dans une matrice de gel de polyacrylamide, la taille des pores décroît avec la concentration d'acrylamide augmente. La combinaison de la taille des pores et chargé en protéines, la taille et la forme détermine le taux de migration de la protéine. Dans cette unité, la méthode standard Laemmli est décrite pour l'électrophorèse sur gel discontinu dans des conditions dénaturantes, c'est à dire, en présence de dodécylsulfate de sodium (SDS).

Protocol

Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en Current Protocols in Molecular Biology .

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Comments

10 Comments

  1. Hi nice demo but I did not understand why the presenters kept on showing an agarose gel electrophoresed DNA gel in between as a representation instead of a protein gel.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 15, 2008 - 1:11 PM
  2. SYPROorange and SYPROruby staining - two fluorescent-based protein detection methods - can appear like ethidium bromide stained DNA gels.  So those gels you are speaking of may actually be protein gels. 

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2008 - 9:34 AM
  3. Yeah possible,  but then why do we see only a single band.I guess SYPRO detection methods would detect the entire protein panel and not specific bands. unless otherwise they are detecting some specific enzyme activity using flourescent detection methods.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 16, 2008 - 9:52 AM
  4. We loaded BSA.

    Thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2008 - 2:12 AM
  5. Please not that we showed polyacrylamide gel electrophoresis and not agarose gel electrophoresis.

    Thanks.

    Bulbul Chakravarti

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 17, 2008 - 2:08 AM
  6. why cannot i see the video...? pls help me..

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 10, 2008 - 3:35 AM
  7. i can see it now..thanks...

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 10, 2008 - 4:50 AM
  8. my network is poor, I can not enjoy the video

    Reply
    Posted by: Huang C.
    March 15, 2009 - 6:30 AM
  9. Hello, Please shoot me an email at nikitab@jove.com and we'll figure something out for you. Cheers, Nikita

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 22, 2009 - 10:26 PM
  10. Hi, thanks what can I download your video ? please help me

    Reply
    Posted by: violet s.
    January 14, 2012 - 10:35 AM

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