जैल में प्रोटीन धुंधला

Biology
 

Summary

Electrophoretic विधियों द्वारा जुदाई के बाद, एक जेल में प्रोटीन कई धुंधला विधियों द्वारा पता लगाया जा सकता है. , रजत धुंधला Coomassie ब्लू, SYPRO ऑरेंज, SYPRO रूबी के साथ प्रोटीन की धुंधला इस वीडियो में प्रदर्शन कर रहे हैं.

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Gallagher, S., Chakavarti, D. Staining Proteins in Gels. J. Vis. Exp. (17), e760, doi:10.3791/760 (2008).

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Abstract

Electrophoretic विधियों द्वारा जुदाई के बाद, एक जेल में प्रोटीन कई धुंधला विधियों द्वारा पता लगाया जा सकता है. यह इकाई चार लोकप्रिय तरीकों में से प्रोटीन का पता लगाने के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन करता है. Coomassie नीले रंग धुंधला हो जाना एक आसान और तेजी से विधि है. रजत धुंधला हो जाना, जबकि अधिक समय लगता है, काफी अधिक संवेदनशील है और इस तरह प्रोटीन की छोटी मात्रा का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. प्रतिदीप्त धुंधला पारंपरिक धुंधला प्रक्रियाओं के लिए एक लोकप्रिय विकल्प है, मुख्य रूप से, क्योंकि यह अधिक Coomassie धुंधला से अधिक संवेदनशील है, और अक्सर के रूप में चांदी धुंधला के रूप में संवेदनशील है. SYPRO ऑरेंज और SYPRO रूबी के साथ प्रोटीन की धुंधला भी यहां प्रदर्शन कर रहे हैं.

Protocol

इस प्रयोगात्मक दृष्टिकोण के लिए पूर्ण पाठ प्रोटोकॉल में उपलब्ध है आण्विक जीवविज्ञान में वर्तमान प्रोटोकॉल .

Comments

8 Comments

  1. WHICH REACTION EQUATION OF CONVERT Cu+² TO Cu+1 in the protein test

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 3, 2008 - 7:45 AM
  2. thank you!very good!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 6, 2008 - 8:51 PM
  3. It is very good, thanks

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 12, 2008 - 6:43 AM
  4. A good and cheap alternative to SYPRO Rubi is RuBPS staining. Here are some protocols. More information can be found on www.ruthenium.ag.vu   RuBPS staining protocol I (quality) 1. Fix the gel in 30% EtOH, 10% acetic acid overnight ². Rinse the gel in ²0% EtOH for 30 min and repeat 3 times 3. Incubate the gel in 1 mM RuBPS solution for 6 h 4. Equilibrate the gel in water for 10 min and repeat once 5. Destain the gel with 40% EtOH/10% acetic acid for 15 h 6. Equilibrate the gel in water for 10 min repeat once and scan   all% are in V/V   Procedure as published in Proteomics ²004, 4, 599–608.     RuBPS staining protocol II (fast)   1. Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid containing    1 mM RuBPS for 1 h. ². Destain the gel for ²0 min in 40% Ethanol/10% acetic acid 3. Wash the gel for 10 min in water and scan   all% are in V/V   Procedure as published in PLoSONE. ²007 Feb ²8;²(²)e²63.       RuBPS staining protocol III (co-electrophoretical)   1. Add 1 ml of ²0 mM stock solution to one pocket of your SDS gel. Run     the gel according to your standard procedure. ². Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid for ²0 min 3. Incubate the gel in 50 ml water for 10 min and scan       RuBPS staining protocol IV (loading buffer)   1. Add 1 ml of ²0 mM stock solution to your loading buffer (omit all other     dyes like bromophenol blue). Run the gel according to your standard     procedure. ². Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid for ²0 min 3. Incubate the gel in 50 ml water for 10 min and scan  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 16, 2009 - 1:20 PM
  5. Itz realy ² gud!

    Reply
    Posted by: sathya r.
    May 18, 2009 - 11:01 AM
  6. Thank yoy

    Reply
    Posted by: JASSIM A.
    May 20, 2009 - 9:39 AM
  7. thank you

    Reply
    Posted by: ibrahim b.
    August 27, 2010 - 12:31 AM
  8. thanks! This is very useful for my job!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 31, 2010 - 4:33 AM

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