Die Färbung Proteine ​​in Gelen

Published 7/08/2008
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Biology
 

Summary

Nach der Trennung durch elektrophoretische Methoden können Proteine ​​in einem Gel durch mehrere Färbemethoden nachgewiesen werden. Die Färbung von Proteinen mit Coomassie Blue, Silver Färbung, SYPRO Orange, SYPRO Ruby sind in diesem Video demonstriert.

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Gallagher, S., Chakavarti, D. Staining Proteins in Gels. J. Vis. Exp. (17), e760, doi:10.3791/760 (2008).

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Abstract

Nach der Trennung durch elektrophoretische Methoden können Proteine ​​in einem Gel durch mehrere Färbemethoden nachgewiesen werden. Diese Einheit beschreibt Protokollen zum Nachweis von Proteinen durch vier beliebtesten Methoden. Coomassie Blau-Färbung ist eine einfache und schnelle Methode. Silberfärbung, während mehr Zeit in Anspruch, ist wesentlich empfindlicher und können daher verwendet werden, um kleinere Mengen an Protein zu detektieren. Fluoreszenzfärbung ist eine beliebte Alternative zu den herkömmlichen Färbeverfahren, vor allem weil es empfindlicher als Coomassie-Färbung ist, und ist oft so empfindlich wie Silberfärbung. Die Färbung von Proteinen mit SYPRO Orange und SYPRO Ruby sind auch hier gezeigt.

Protocol

Der vollständige Text Protokoll für diesen experimentellen Ansatz ist in Current Protocols in Molecular Biology .

Comments

8 Comments

  1. WHICH REACTION EQUATION OF CONVERT Cu+² TO Cu+1 in the protein test

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    Posted by: Anonymous
    August 3, 2008 - 7:45 AM
  2. thank you!very good!

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    Posted by: Anonymous
    September 6, 2008 - 8:51 PM
  3. It is very good, thanks

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 12, 2008 - 6:43 AM
  4. A good and cheap alternative to SYPRO Rubi is RuBPS staining. Here are some protocols. More information can be found on www.ruthenium.ag.vu   RuBPS staining protocol I (quality) 1. Fix the gel in 30% EtOH, 10% acetic acid overnight ². Rinse the gel in ²0% EtOH for 30 min and repeat 3 times 3. Incubate the gel in 1 mM RuBPS solution for 6 h 4. Equilibrate the gel in water for 10 min and repeat once 5. Destain the gel with 40% EtOH/10% acetic acid for 15 h 6. Equilibrate the gel in water for 10 min repeat once and scan   all% are in V/V   Procedure as published in Proteomics ²004, 4, 599–608.     RuBPS staining protocol II (fast)   1. Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid containing    1 mM RuBPS for 1 h. ². Destain the gel for ²0 min in 40% Ethanol/10% acetic acid 3. Wash the gel for 10 min in water and scan   all% are in V/V   Procedure as published in PLoSONE. ²007 Feb ²8;²(²)e²63.       RuBPS staining protocol III (co-electrophoretical)   1. Add 1 ml of ²0 mM stock solution to one pocket of your SDS gel. Run     the gel according to your standard procedure. ². Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid for ²0 min 3. Incubate the gel in 50 ml water for 10 min and scan       RuBPS staining protocol IV (loading buffer)   1. Add 1 ml of ²0 mM stock solution to your loading buffer (omit all other     dyes like bromophenol blue). Run the gel according to your standard     procedure. ². Incubate the gel in 50 ml of 40% Ethanol/10% acetic acid for ²0 min 3. Incubate the gel in 50 ml water for 10 min and scan  

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    Posted by: Anonymous
    February 16, 2009 - 1:20 PM
  5. Itz realy ² gud!

    Reply
    Posted by: sathya r.
    May 18, 2009 - 11:01 AM
  6. Thank yoy

    Reply
    Posted by: JASSIM A.
    May 20, 2009 - 9:39 AM
  7. thank you

    Reply
    Posted by: ibrahim b.
    August 27, 2010 - 12:31 AM
  8. thanks! This is very useful for my job!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 31, 2010 - 4:33 AM

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