Entrevista: HIV-1 DNA proviral Excisão Usando um Recombinase Evolved

Biology

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Summary

Atuais estratégias de HIV-1 agem para suprimir o ciclo de vida viral, mas não efetivamente erradicar a infecção. Aqui, demonstramos que uma recombinase engenharia podem eficientemente consumo DNA integrado HIV-1 proviral do genoma das células infectadas.

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Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

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Abstract

HIV-1 se integra ao cromossomo anfitrião de células infectadas e persiste como um provírus flanqueada por repetições terminais longas. Estratégias de tratamento atuais visam principalmente as enzimas do vírus ou vírus de células-fusion, suprimindo o ciclo de vida viral sem erradicar a infecção. Desde o provírus integrado não é visado por essas abordagens, novas cepas resistentes de HIV-1 podem surgir. Aqui, nós relatamos que a engenharia recombinase Tre (ver a evolução molecular do recombinase Tre, Buchholz, F., Instituto Max Planck de Biologia Celular e Genética, Dresden) eficientemente excises integrada DNA proviral do HIV-1 a partir do genoma de células infectadas. Produzimos loxLTR contendo pseudotipos viral e células HeLa infectadas examinar se Tre recombinase pode extirpar o provírus do genoma do HIV-1 células humanas infectadas. Um vírus de linha de células de partículas de liberação foi clonado e transfectadas com um plasmídeo expressando Tre ou com um vector de controlo parental. Atividade recombinase e produção de vírus foram monitorados. Todos os ensaios demonstraram a eliminação eficiente do provírus das células infectadas sem visíveis efeitos citotóxicos. Estes resultados servem como prova de princípio de que é possível evoluir um recombinase visar especificamente uma LTR do HIV-1 e que esta recombinase é capaz de extirpar o provírus HIV-1 a partir do genoma do HIV-1-infected células humanas.

Antes de uma recombinase engenharia poderia entrar na arena terapêutica, no entanto, obstáculos significativos precisam ser superados. Entre as questões mais críticas, que enfrentamos, são uma entrega eficiente e segura para células-alvo ea ausência de efeitos colaterais.

Protocol

Por favor, veja vídeos relacionados intitulado Princípios do site-specific Recombinase Tecnologia (SSR) e Evolução Molecular do Recombinase Tre para obter mais informações sobre recombinação sítio-específico e de engenharia do site-especificidade de enzimas recombinase.

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Comments

10 Comments

  1. Please this must be in clinical trials asap..  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 24, 2008 - 7:26 PM
  2. Moving faster with recombinase. To tell the truth i don' t trust completely in the results of the research, any kind of research, humans trial included. Kp-1461 has been halted almost at the end of phase ² humans trial.. and now seems that kp-1461 can not work in vitro too.. The koronispharma managers have to pay for this.. A LOT OF MONEY.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 25, 2008 - 8:56 AM
  3. how can I download a video protocol in my flash disc?  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 20, 2008 - 4:36 PM
  4. Dear Anonymous, please feel free to contact us at support@jove.com and we could discuss your problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 6, 2008 - 6:34 PM
  5. How can I get in touch with doctor Joachim Hauber? I am HIV positive, there isn´t a single day ever since I was diagnosed this disease that I don´t feel like my life just ended. I would do anything to get cured.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2008 - 1:37 PM
  6. Reply
    Posted by: Anonymous
    November 3, 2008 - 8:41 AM
  7. Interesting presentation on remarkable research. Worthy of further discussion

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 23, 2009 - 1:48 PM
  8. Have you sequenced the host cell genome in the wild type control vs. the HIV-1 infected vs Tre recombinase cells to
    definitively show where the HIV-1 genome is inserting, and that it is removed?

    Reply
    Posted by: Douglas C.
    October 21, 2009 - 9:41 AM
  9. why can't i get an update on this work?? i have looked everywhere. it has gotten so little publicity..i dont get it

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 25, 2010 - 1:04 AM
  10. hi
    i need full text this article
    plz
    tanx

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 10, 2010 - 4:23 PM

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