تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

Published 11/09/2006
1 Comment
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

تقنية سريعة للتصور المتزايد يجمد خلايا الخميرة ، وتطبق هنا للصحفيين في فلوري HML التزاوج مواضع الصمت وHMR

Cite this Article

Copy Citation

Zawadzki, K., Broach, J. A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells. J. Vis. Exp. (1), e84, doi:10.3791/84 (2006).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

نقدم هنا تقنية بسيطة وسريعة ومرنة للغاية بالنسبة للتجميد والتصور من خلايا الخميرة تنمو بنسبة epifluorescence المجهري. هي مناسبة أيضا لرؤية هذه التقنية للسكان الخميرة ثابت ، أو الوقت تجارب دورات تصل إلى عشر ساعات في الطول. المجهري بلدي يحقق الميراث اللاجينية في مواضع التزاوج صامتة في البيرة س. هناك نوعان من التزاوج مواضع الصمت ، وHML HMR ، والتي عادة لا يعبر عنه وتغليفها في المغاير. في إسكات sir1 خلفية متحولة يضعف بحيث كل مكان يمكن أن يكون إما في الدولة أو إسكاته وأعرب اللاجينية ، وذلك في عدد السكان ككل هناك مزيج من خلايا جينية مختلفة من الدول على حد سواء وHML HMR. أظهر الفحص المجهري أرى أن هناك أي علاقة بين الدولة واللا جينية للHML HMR في زنزانة منفردة. sir1 خلايا جينية تبديل عشوائيا الدول ، ووضع في مكان إسكات أعرب سابقا ، أو تعبر عن موضع إسكات سابقا. مجنزرة المجهري بلدي دوام الفردية sir1 الخلايا وذريتهم ليسجل وتيرة كل من مفاتيح four اللاجينية ممكن ، وبالتالي على استقرار كل دولة من الدول جينية في خلايا sir1. انظر أيضا شو وآخرون ، مول. خلية 2006.

Protocol

  1. يجمد الخلايا للدوام epifluorescence المجهري. يرجى ملاحظة أن هذا البروتوكول هو الوحيد المفيد إذا كان الهدف من عدسات المجهر الخاص يقعون تحت المجهر المرحلة.

  2. خلايا في مكان التركيز المطلوب في وسائل الإعلام السائلة على ساترة طويلة (24x50mm تقريبا)

  3. خفض كتلة آغار من الحجم المطلوب من وسائل الإعلام لوحة الاصطناعية (وهذه أقل وتألق ذاتي) ووضع على الخلايا. مكان جانب كتلة آغار لم يتم التعامل معها بواسطة الملقط في اتصال مع الخلايا.

  4. لدورات زمنية أقصر (حتى 3 ساعات) ، وهذا هو ما يصل مجموعة كافية. إذا الخلايا تتحرك عندما تصور على المجهر ، وانخفاض حجم الخلايا أو زيادة مساحة كتلة آغار.

  5. لدورات زمنية أطول ، ضع قطرة من وسائل الاعلام السائل الطازج على رأس كتلة آغار ، ووضع شريحة زجاجية على رأس كتلة آغار. هذه الشريحة من خلال يقلل تبخر الجزء العلوي من كتلة آغار. إذا رغبت في ذلك ، يمكن أن تكون مختومة حواف كتلة أغار على اتصال مع انزلاق الغطاء مع الفازلين لخفض مزيد من الرطوبة. ولقد استخدمت هذا إعداد للأفلام يصل إلى 9 ساعات طويلة ، مع تقسيم الخلايا بمعدلات نوع البرية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

هذا هو الأسلوب السريع الذي يشل خلايا الخميرة في حين لا يزال يسمح النمو. لقد تابعنا نمو الخميرة لمدة تصل إلى عشر ساعات ، مع عرض الخميرة البرية معدلات تقسيم النوع في كافة مراحل التجربة. علما بأن هذا الإعداد يتطلب أن يكون الهدف عدسة تحت المجهر المرحلة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

نود أن نشكر بيت هيوستن وشو يوجينيا لما قدموه من مساعدة الجميع.

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 13, 2009 - 8:40 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Video Stats