טכניקה מהירה עבור ויזואליזציה של תאים חיים שמרים ללא יכולת לזוז

Published 11/09/2006
1 Comment
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

טכניקה מהירה להדמיה של גידול בתאי שמרים משותקת, מיושם כאן לכתבים פלורסנט בבית לוקוסים שקט ההזדווגות HML ו HMR

Cite this Article

Copy Citation

Zawadzki, K., Broach, J. A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells. J. Vis. Exp. (1), e84, doi:10.3791/84 (2006).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

אנו מציגים כאן טכניקה פשוטה, מהירה, גמישה מאוד עבור immobilization ויזואליזציה של תאים שמרים גדל מיקרוסקופיה epifluorescence. השיטה מתאימה במידה שווה עבור להדמיה של אוכלוסיות שמרים סטטי, או קורסים ניסויים זמן עד עשר שעות אורך. מיקרוסקופיה שלי חוקר ירושה epigenetic ב לוקוסים ההזדווגות שקטה cerevisiae ס. ישנם שני לוקוסים ההזדווגות שקט, HML ו HMR, אשר בדרך כלל לא הביע כפי שהם ארוזים heterochromatin. ב השתקה sir1 רקע מוטנטים הוא נחלש כל כך מוקד יכול להיות במדינה epigenetic הביע או מושתקים, כך באוכלוסייה כולה יש ערבוב של תאים של מדינות שונות הן epigenetic HML ו HMR. מיקרוסקופיה שלי הראו כי אין קשר בין המדינה epigenetic של HML ו HMR בתא בודד. sir1 תאים stochastically הבורר מדינות epigenetic, הקמת ההשתקה על מוקד הביע בעבר או להביע מוקד השתיק בעבר. במהלך הזמן שלי מיקרוסקופיה מעקב אישי sir1 תאים וצאצאיהם להבקיע את התדירות של כל אחד מארבעת מתגים epigenetic אפשרי, ולכן יציבותה של כל אחת מהמדינות epigenetic ב sir1 תאים. ראה גם שו et al. מול. תא 2006.

Protocol

  1. תאים משותקת עבור מיקרוסקופיה כמובן זמן epifluorescence. שים לב כי פרוטוקול זה שימושי רק אם המטרה של עדשות המיקרוסקופ שלך נמצאות מתחת למיקרוסקופ הבמה.

  2. המקום התאים בריכוז הרצוי בתקשורת נוזלי על coverslip ארוכה (24x50mm בערך)

  3. גזור לחסום אגר בגודל הרצוי מהצלחת מדיה סינתטיים (אלה autofluorescence התחתון) ואת המקום על התאים. הנח את הצד של גוש אגר לא מטופלים על ידי פינצטה במגע עם התאים.

  4. לקורסים זמן קצר (עד 3 שעות), להגדיר את זה מספיק. אם התאים עוברים כאשר דמיינו על המיקרוסקופ, להקטין נפח של תאים או אזור גידול של לחסום את אגר.

  5. לקורסים זמן רב יותר, במקום ירידה של התקשורת נוזלי טרי על גבי לחסום את אגר, ומקום שקופיות הזכוכית על גבי לחסום את אגר. שקופיות זה מפחית התאדות דרך החלק העליון של לחסום את אגר. אם תרצה, בקצוות של גוש אגר במגע עם להחליק את מכסה יכול להיות חתום עם וזלין כדי לצמצם עוד יותר לחות. השתמשתי להגדיר עבור סרטים עד 9 שעות ארוכות, עם חלוקת תאים בשיעורים סוג בר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

זוהי טכניקה מהירה שמגביל תאים שמרים תוך מתן צמיחה. יש לנו בעקבות גידול השמרים עד עשר שעות, עם השמרים הצגת בר חלוקה שיעורי ברחבי סוג הניסוי. שים לב התקנה זו מחייבת את העדשה המטרה להיות מתחת לבמה מיקרוסקופ.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

ברצוננו להודות פיט יוסטון יבגניה שו על כל העזרה שלהם.

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 13, 2009 - 8:40 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Video Stats