라이브 고정화 효모 세포의 시각화에 대한 신속한 기술

Published 11/09/2006
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Biology

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Summary

여기에 침묵 교미 loci HML과 HMR에서 형광등 기자 적용 성장 고정화 효모 세포의 시각화에 대한 신속한 기술,

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Zawadzki, K., Broach, J. A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells. J. Vis. Exp. (1), e84, doi:10.3791/84 (2006).

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Abstract

우리는 여기서 epifluorescence 현미경으로 성장 효모 세포의 고정과 시각화를위한 단순하고 빠른, 그리고 매우 유연한 기법을 제시한다. 기술은 동일 길이가 한 열 시간까지 정적 효모 집단 또는 시간 과정 실험의 시각화에 적합합니다. 내 현미경은 S. cerevisiae의에서 무성 짝짓기 loci에서 epigenetic 상속을 조사. 그들이 heterochromatin에서 포장 그대로 정상적으로 표현되지 두 무성 짝짓기 loci, HML과 HMR이 있습니다. sir1 돌연변이 배경 입을 각 로커스 역시 표현하거나 침묵 epigenetic 상태에있을 수있는 등 약화되므로 전체 인구의 HML과 HMR 모두 다른 epigenetic 상태의 세포의 혼합이 있습니다. 내 현미경은 각 세포에 HML과 HMR의 epigenetic 주 사이에 관계가 없다는 것을 보여주었다. sir1 세포는 stochastically 이전에 표현 로커스에서 입을를 설립하거나 이전에 침묵 로커스을 표현, epigenetic 상태를 전환합니다. 내 시간 코스 현미경은 네 가지 epigenetic 스위치의 각각의 주파수 때문에 sir1 세포의 epigenetic 상태의 각각의 안정성을 점수로 개별 sir1 세포와 그 자손을 추적. 또한 쑤 외를 참조하십시오., 몰. 세포 2006.

Protocol

  1. 시간 코스 epifluorescence 현미경을위한 고정화 세포. 당신의 현미경의 목적 렌즈 아래 현미경 무대 경우에는이 프로토콜은 유용하게된다는 점에 유의하시기 바랍니다.

  2. 긴 coverslip에 액체 매체에서 원하는 농도에 플레이스 세포 (약 24x50mm)

  3. 합성 미디어 플레이트 (이들은 낮은 autofluorescence을 가지고)과 세포 이상의 장소에서 원하는 크기의 한천 블록 컷. 세포와 접촉 핀셋으로 처​​리되지 한천 블록의 측면을 놓으십시오.

  4. 짧은 시간 코스 (최대 3 시간)의 경우이 설정가 충분합니다. 현미경에 대한 시각 때 세포가 이동하는 경우, 세포 또는 한천 블록의 증가 영역의 볼륨을 줄이십시오.

  5. 더 이상 시간 코스, 한천 블록 위에 신선한 액체 매체의 한 방울을 배치하고, 한천 블록 위에 유리 슬라이드를 놓으십시오. 이 슬라이드는 한천 블록의 상단을 통해 증발을 줄여줍니다. 원하는 경우, 커버 슬립 접촉 한천 블록의 가장자리가 더 이상 수분을 줄이기 위해 바셀린과 함께 봉인 수 있습니다. 전 와일드 타입 속도로 나누어 세포와 장기 9시간하는 영화이 설정을 최대 사용하고 있습니다.

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Discussion

이것은 아직도 성장을 허용하면서 효모 세포를 움직이게 빠른 방법입니다. 우리는 효모의 실험을하는 동안 야생 유형 부문 속도를 표시와 함께 십 시간을위한 효모의 성장을 따라있다. 이 설정은 현미경의 무대 아래로 객관적 렌즈를 필요로합니다.

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Acknowledgements

우리 모두는 그들의 도움 피트 휴스턴과 유제 니아 쑤 감사하고 싶습니다.

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. This is interesting. Is it possible somehow in this setup to apply a chemical and watch in real time the response? Is there a way to wash away the chamical and monitor the live cells without altering their positions?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    June 13, 2009 - 8:40 AM

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