Препарирование личинок ЦНС у дрозофилы

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

В этой статье мы показали, как рассекают центральной нервной системы с третьего возраста личинок дрозофилы.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Hafer, N., Schedl, P. Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster. J. Vis. Exp. (1), e85, doi:10.3791/85 (2006).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Центральной нервной системы (ЦНС), личинок дрозофилы является сложным и плохо изучены. Один из способов исследовать ЦНС является использование иммуногистохимии для изучения экспрессии различных романа и маркеров белков. Окрашивание целом личинки нецелесообразно, так как жесткие кутикулы предотвращает антител от проникновения внутрь полости тела. Для того, чтобы пятно этих тканей необходимо препарировать животное до фиксации и окрашивания. В этой статье мы показали, как рассекают дрозофилы личинки без повреждения ЦНС. Начните с разрывая личинки пополам с парой тонких щипцов, а затем включите кутикулы "наизнанку", чтобы разоблачить ЦНС. Если вскрытие производится тщательно ЦНС будет оставаться прикрепленной к кутикуле. Мы обычно держат ЦНС придается кутикулы всей фиксации и окрашивания шагов, и только полностью удалить ЦНС от кутикулы незадолго до монтажа образцов на предметных стеклах. Мы также покажем некоторые характерные образы личиночной ЦНС витражи с Евой, транскрипционный фактор выражается в подмножество нейронов в ЦНС. Статья завершается обсуждением некоторых практических применений этой техники и возможные трудности, которые могут возникнуть.

Protocol

  1. Рассеките 3-го возраста личинки, оставляя ЦНС придается кутикулы. Место в 1,5 мл трубки.
  2. Зафиксируем в PBS (1x), содержащий 2% формальдегида в течение 40 мин с качалки. ; Использование 250ul за каждые 5-10 расчлененный ЦНС.
  3. Удалить формальдегида и кратко промыть 3 раза PBS + 0,1% Тритон Х-100 (PBST). Используйте мелко вытащил пипетки Пастера, чтобы избежать потери ткани.
  4. Блок неспецифический белок сайты связывания и permeabilize клеточных мембран путем инкубации ткани 1-8 часов в PBST + 5% BSA, покачиваясь при 4 ° C.
  5. Инкубируйте в первичных антител разводят в PBST + 5% BSA качалке при температуре 4 ° С в течение ночи. Оптимальное разведения антител будет варьироваться для разных антител.
  6. Промыть 3 раза в PBST с последующими двумя 30 минут моет при температуре 4 ° C.
  7. Инкубируйте в вторичными антителами разводят в PBST + 5% БСА в течение 1-3 часов качания при 4 ° C. Промыть 3 раза в PBST с последующими двумя 30 минут моет при температуре 4 ° C. Если вторичный сопряжена с светочувствительных соединений, оберните трубу в алюминиевую фольгу.
  8. Рассеките ткани в дальнейшем (при необходимости) и установите на слайдах.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Это видео демонстрирует, как вскрыть ЦНС из третьих личинки дрозофилы возраста. После вскрытия, ЦНС могут быть окрашены с использованием стандартного протокола иммуногистохимии. В настоящее время, многое до сих пор неизвестно о том, как взрослые нервной системы создается, а также как он хранит и передает информацию. Исследования развивающихся дрозофилы ЦНС личиночной должны расширить наши знания о нервная система электропроводки и функции.

Личинки дрозофилы обладают рядом stereotpyed поведения, таких как ответ на сигналами окружающей среды. Как такое поведение уроки и хранится в нервной системе? Исследования нервной системы во время развития личинок поможет ответить на этот вопрос.

На данном этапе развития у дрозофилы, организм готовится пройти огромные морфологические изменения, которые происходят во время окукливания. За это время, массивные реконструкции нервно-мышечной системы происходит как organsim переходы из ползком личинки во взрослую особь летать. Это будет интересно, чтобы определить, как нейроны меняться в течение этой стадии развития, и если тот же тип поведения можно наблюдать в нейронах высших животных.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Forceps fine tipped
9-well Watch glass
Plastic Petri dish

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. The justification/ultimate goals are poorly explained. How dŒs the presence of a protein show function?

    Reply
    Posted by: jacqui s.
    December 12, 2009 - 6:36 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics