Cerrahi Yaralar Nosiseptif ve İnflamatuar Arabulucular Toplama ve Ölçüm

Biology

ERRATUM NOTICE

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Carvalho, B., Clark, D. J., Yeomans, D., Angst, M. S. Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds . J. Vis. Exp. (20), e962, doi:10.3791/962 (2008).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Bu çalışmanın amacı, cerrahi yerinde inflamatuar ve nosiseptif biyokimyasal mediyatörler toplama ve ölçme fizibilite test etmek için; yara ve serum düzeyleri arasındaki ilişkiyi değerlendirmek için; ve mediatör salınımı, ağrı ve analjezik tüketimi sonrası sezaryen arasında herhangi bir ilişkiyi belirlemek için teslim. Spinal anestezi ile elektif sezaryen geçiren Yirmi sağlıklı kadın alındı. Yara eksuda ve serum arabulucular, ağrı skorları ve analjezikler tüketimi, 1, 6, 24, ve 48 saat sonrası sezaryen ölçüldü. Yara eksuda, 20 mediatörlerin 19 güvenilir IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL dahil tespit edildi -17, TNF, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 ve MIP-1β, sinir büyüme faktörü (NGF), prostaglandin E2 (PG-E2) ve madde P. Yara PG-E2 ve çeşitli sitokinlerin erken zirve yaptı ise NGF daha gecikmeli bir sürümü gösterdi. Konsantrasyon karşı yara ve serum sitokinleri zaman profili arasında herhangi bir korelasyon vardı. Bu çalışma, belirli zaman noktalarında, cerrahi yaralar nosiseptif ve inflamatuvar mediatörlerin toplama ve ölçme fizibilite göstermektedir. Yara ve serum düzeyleri arasında anlamlı bir ilişki olmaması, lokalize patolojilerin incelenmesi gereken siteye özgü bir sürüm belirlenmesi önemini vurgulamaktadır.

Protocol

Nosiseptif ve inflamatuar biyokimyasal arabulucu koleksiyonu

  1. On-Q ® PainBuster ® Ağrı Kesici Sistem kapatma yara hemen önce cerrahi ekip tarafından subkutan tabaka eklenir. Sistemi sürekli subkutan 2 ml / saat hızında yara normal tuzlu su (veya lokal anestezi) sunar
  2. Üç yollu stopcock belirtilen zaman noktalarında yara eksuda aspirasyonu sağlamak için bu sistem içine dahil edilmiştir.
  3. Protokolü (örneğin, 1, 6, 24, ve 48 saat sonra sezaryen) tarafından belirlenen zaman noktalarında, yara eksuda 1 ml 30 ul proteinaz inhibitörü içeren bir polietilen kap içine geri çekilir.
  4. Aynı zamanda aralıklarla 10 ml kan lityum heparin içeren yeşil bir üst kan toplama tüpüne toplanır. 300 ul proteinaz inhibitörü sonra kan örnekleri eklenir.
  5. 1 saat içinde toplama örnekleri buz üzerinde konur ve 10 dakika 3000 rpm'de santrifüj.
  6. Serum ve yara supranate kaldırıldı ve yerini, standart bir mikrosantrifüj tüp içinde ve -20 ° C'de saklanan

Testi analizi

  1. Tüm örnekleri sonra, çözülmüş ve aynı zamanda analiz edilir.
  2. Sitokinler sonra A17 multipleks boncuk dizisi immunoassay plaka ile ölçülür. Multiplex immüno-assay teknolojisi 50 ul ve ELISA yöntemi ile elde edilen karşılaştırılabilir sonuçlar üretmek olarak hacim olarak küçük vücut sıvısı örneklerinde 100 analitler kadar assaying sağlar. Bu plaka interlökin 1SS (IL-1SS), interlökin 2 (IL-2), interlökin 4 (IL-4), interlökin 5 (IL-5), interlökin 6 (IL-6) 7, interlökin (IL ölçme yeteneğine -7), interlökin 8 (IL-8), interlökin (IL-10), interlökin-12 (IL-12), interlökin 13 (IL-13), interlökin 17 (IL-17), tümör nekroz faktörü α (TNF) , interferon α (INFα), granülosit koloni uyarıcı faktör (G-CSF), granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF), monosit kemoatraktan protein 1 (MCP-1) ve makrofaj inflamatuar protein 1 (MIP-1β).
  3. Sinir büyüme faktörü, Bio-Plex amin bağlantı kiti yardımı ile 17-karmaşık plaka ekleyerek NGF antikor DY256 ile ölçülür.
  4. Her ölçüm çiftleri ve üreticinin özelliklerine göre. Her analit için standart eğrileri 0.20 konsantrasyonları, 0.78, 3.13, 12.5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml artı sıfır standart (normal salin) üreticileri tarafından verilen referans analitler kullanarak oluşturulur. Standart eğrileri her çalışmaya dahil edilmiştir ve örnek konsantrasyonları Bio-Plex Manager yazılımı ile hesaplandı.
  5. Her tahlil üretici spesifikasyonuna göre iki nüsha halinde yapılır son derece hassasiyet ELISA Kitleri prostaglandin E2 ve P maddesi kullanılarak ölçülür.

    Şekil 1
    Şekil 1

    Şekil 1: Eksuda ve serum düzeyleri, çeşitli pro-ve anti-inflamatuar sitokinler (interlökin (IL-1SS) 1SS, interlökin 2 (IL-2), interlökin 4 (IL-4), interlökin 5 (IL-5), interlökin 6 (IL-6) 7, interlökin (IL-7), interlökin 8 (IL-8), interlökin (IL-10), interlökin 12 (IL-12), interlökin 13 (IL-13), interlökin 17 (IL -17), tümör nekroz faktörü α (TNF-α), interferon-γ (INFγ), granülosit koloni uyarıcı faktör (G-CSF), granülosit makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF), monosit kemoatraktan protein 1 (MCP-1 6 ve 24 saat) ve makrofaj inflamatuar protein 1 (MIP 1SS), sinir büyüme faktörü (NGF), prostaglandin E2 (PG-E2) ve P maddesi (SP) düzeyleri (pg / mL) başlangıçta ölçülen sonrası sezaryen .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

On-Q ® PainBuster ® Ağrı Kesici Sistem kapatma yara hemen önce subkutan tabaka tüm kesi boyunca takılmalıdır. Bu belirtilen zaman aralıklarında üç yollu stopcock yoluyla aspirasyon kolaylaştırır. On-Q ® sistemi yara içine 2 ml / saat hızında sürekli subkutan normal tuzlu su sağlar Bu kateter pıhtılaşmasını önler ve eksuda örnekleri üretmek için sistem güvenilirliğini artırır. Eksudasyonların aspirasyonu (vakaların yaklaşık% 5) zor ise, (örneğin, hasta kadar oturma veya onları düz yalan) öznenin konumunu değiştirmeden yaranın üzerine hafifçe iterek, bir 0.5-1ml, normal tuzlu floş kullanılarak veya kateter çekilme dikkate 1-2 cm.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgements

Bina Disiplinlerarası Kadın Sağlığı Kadın Sağlığı ve Ulusal, Ulusal Sağlık Enstitüleri (5K12 HD043452) Çocuk Sağlığı ve İnsani Gelişme Enstitüsü Araştırma Ofisi araştırma bursu Kariyer Dr. Carvalho çalışmaları desteklenmektedir. Dr Angst temini (On-Q ® PainBuster ® Post-Op Ağrı Kesici Sistemi) ve fon aldı I-Flow (Lake Forest, CA) biyokimyasal testlerin yapılması.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
On-Q® PainBuster® Post-Op Pain Relief System I-Flow, Lake Forest, CA
Complete proteinase inhibitor Roche Group
17-multiplex bead immunoassay Bio-PlexTM plate Bio-Rad
Bio-Plex amine coupling kit Bio-Rad
The NGF antibody DY256 R&D Systems
Prostaglandin E2 and substance P ELISA Kits Assay Designs

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
  2. Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
  3. Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
  4. Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).

Erratum

Formal Correction: Erratum: Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds
Posted by JoVE Editors on 03/07/2012. Citeable Link.

A correction was made to: Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds. A key reference was excluded.

A fifth reference:

5. Carvalho, B., Clark, D. J. & Angst, M. S. Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. The Journal of Pain : official journal of the American Pain Society 9 (7), 650-657 (2008).

was added. The abstract was updated to :

We describe a methodology by which we are able to collect and measure inflammatory and nociceptive biochemical mediators at the surgical wound site. Collecting site-specific biochemical markers allows us to evaluate the relationship between surgical wound and serum levels; determine any associations between mediator release, pain and analgesic consumption; and evaluate the effect of systemic and peripheral drug administration on surgical wound biochemistry.

This methodology has been applied to healthy women undergoing elective cesarean delivery with spinal anesthesia. Wound exudate and serum mediators, in conjunction with pain scores and analgesics consumption were measured at 1, 6, 24, and 48 hours post-cesarean delivery. Biochemical mediators that were detected included IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNFα, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 and MIP-1β, nerve growth factor (NGF), prostaglandin E2 (PG-E2) and substance P. We found no correlations between wound and serum cytokines concentrations or time-release profiles (J Pain. 2008 Jul 9(7):650-7). This article describes and demonstrates the feasibility of collecting and assaying nociceptive and inflammatory mediators in surgical wounds at specific time points. The lack of significant correlations between serum and wound levels shows the importance of determining site-specific release if surgical wounds and localized pathologies are to be studied.

from

The objectives of this study were to test the feasibility of collecting and measuring inflammatory and nociceptive biochemical mediators at the surgical site; to evaluate the relationship between wound and serum levels; and to determine any associations between mediator release, pain and analgesic consumption post-cesarean delivery. Twenty healthy women undergoing elective cesarean delivery with spinal anesthesia were enrolled. Wound exudate and serum mediators, pain scores and analgesics consumption were measured at 1, 6, 24, and 48 hours post-cesarean. In wound exudate, 19 out of 20 mediators were reliably detected including IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNFα, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 and MIP-1β, nerve growth factor (NGF), prostaglandin E2 (PG-E2) and substance P. Wound PG-E2 and various cytokines peaked early, whereas NGF showed a more delayed release. There were no correlations between the concentration versus time profile of wound and serum cytokines. This study demonstrates the feasibility of collecting and measuring nociceptive and inflammatory mediators in surgical wounds at specific time points. The lack of significant correlations between wound and serum levels emphasizes the importance of determining site-specific release if localized pathologies are to be studied.

Comments

1 Comment

  1. The technique appears robust, even if intuitive. However, as shown in the video paper, the data are collected in the presence of superfusion with local anaesthetic solution (in this case bupivacaine) which is very likely to modify the response and the local concentrations of mediators both as a direct pharmacological action of the local anaesthetic as well as through the fluid diluent effect. Moreover, adsoprtion of the various substances by the medical plastics would need evaluation. Hence a lot of control work needs to be done so that the numerical results obtained can be interpreted correctly. Perhaps the data are semiquantitative at best.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 4, 2009 - 6:37 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics