Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

نانومولسيون تريبيبتيدي استقرت حمض الأولييك

Published: February 27, 2019 doi: 10.3791/59034
Automatic Translation
1, 1,2, 1,3, 4,5,6, 1,2,3
1Department of Chemistry, Brooklyn College, The City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 3Ph.D. Program in Biochemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 4Department of Genetics and Genomic Sciences, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 5Women's Health Research Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 6Laboratory for Translational Research, Western Connecticut Health Network

Summary

ويصف هذا البروتوكول طريقة فعالة لتجميع نانومولسيون من المتقارن الاوليك acids-platinum(II) استقرت مع تريبيبتيدي يسين-تيروزين-فينيلالاناين (الكيف). أشكال نانومولسيون في ظروف معتدلة الاصطناعية عن طريق التجميع الذاتي الكيف والمتقارن.

Abstract

يصف لنا طريقة لإنتاج نانومولسيون تتألف من أساسية acids-Pt(II) الاوليك وطلاء (كيف) يسين-تيروزين-فينيلالاناين (الكيف-Pt-شمال شرق). الكيف-Pt-ني تغليف Pt(II) على 10% بالوزن، والتي يبلغ قطرها 107 ± 27 نانومتر وتهمة سطحية سلبية. الكيف-Pt-ني مستقرة في الماء وفي مصل الدم، وهو النشطة بيولوجيا. تصريف فلوروفوري على الكيف يسمح توليف نانومولسيون الفلورسنت مناسب لتصوير البيولوجية. يتم توليف نانومولسيون في بيئة مائية، والكيف-Pt-ني أشكال عن طريق التجميع الذاتي من ببتيد كيف قصيرة والمتقارن acids-platinum(II) الاوليك. عملية التجميع الذاتي يعتمد على درجة حرارة الحل، ونسبة المولى ركائز، ومعدل التدفق لإضافة الركازة. وتشمل الخطوات الحاسمة الحفاظ على معدل التحريك الأمثل من خلال التوليف والسماح بوقت كاف للتجميع الذاتي، وقبل التركيز نانومولسيون تدريجيا في مركز الطرد مركزي.

Introduction

في السنوات الأخيرة، كان هناك اهتمام متزايد في الهندسة لجسيمات نانوية للتطبيقات الطبية الحيوية مثل إيصال الأدوية وبيويماجينج1،2،،من34. وكثيراً ما يتطلب التعدد الوظيفي للأنظمة المستندة إلى نانوحبيبات إدماج مكونات متعددة ضمن صياغة واحدة. اللبنات الأساسية التي تعتمد على الدهون أو البوليمرات غالباً ما تختلف من حيث خصائصها الفيزيائية، فضلا عن توافق مع الحياة وتحلل الأحيائي، التي قد تؤثر في نهاية المطاف وظيفة نانوستروكتوري1، 5،6. وقد اعترف منذ وقت طويل المواد المشتقة بيولوجيا، مثل البروتينات والببتيدات، كعناصر واعدة للنانو متعددة الوظائف بسبب هم تسلسل المرونة7،8. الببتيدات تجميع ذاتي في مرتبة عالية من أبنية supramolecular تشكيل حلزوني شرائط السقالات الليفي11،12،9،10واكبر بكثير، مما يمهد السبيل لبناء النانو الهجين على أساس بيوموليكولي من أسفل إلى أعلى باستخدام نهج13.

تم استكشاف الببتيدات للتطبيقات في مجال الطب والتكنولوجيا الحيوية، خاصة بالنسبة لعلاج السرطان14 و أمراض القلب والأوعية الدموية15 ، وكذلك فيما يتعلق بتطوير المضادات الحيوية16،17، الأيضية اضطرابات18، و19من الإصابات. وهناك أكثر من 100 من المداواة الببتيد الصغيرة تمر بالتجارب السريرية20. الببتيدات من السهل تعديل وسريعة لتجميع تكلفة منخفضة. وباﻹضافة إلى ذلك، فالقابلة للتحلل، مما يسهل إلى حد كبير على التطبيقات البيولوجية والمستحضرات الصيدلانية21،22. يتضمن استخدام الببتيدات كالمكونات الهيكلية الهندسية جسيمات نانوية قادرة على الاستجابة وعلى أساس الببتيد والمستودعات المائية للإفراج التي تسيطر عليها24،23،،من2526 , 27، وأجهزة استشعار العوامل البيولوجية على أساس الببتيد،من2829،،من3031، أو الأجهزة الإلكترونية الحيوية32،،من3334. الأهم من ذلك، تم العثور على الببتيدات قصيرة حتى مع اثنين أو ثلاثة من مخلفات الأحماض الأمينية التي تحتوي فينيلألانين دليل التجميع الذاتي العمليات35،،من3637 وخلق استقرار المستحلبات38 .

المخدرات على أساس البلاتين، نظراً لفعاليتها العالية، تستخدم في كثير من نظم المعالجة السرطان، وحدها سواء في تركيبة مع سائر وكلاء39،40. حمل مركبات البلاتين تلف الحمض النووي عن طريق تشكيل متقاطعة مونوادوكتس وإينتراستراند أو إينتيرستراند. الآفات Pt-الحمض النووي يتم الاعتراف بها أجهزة الهاتف الخلوي، وإذا لم يتم إصلاح، تؤدي إلى المبرمج الخلوي. هو الآلية الأكثر أهمية، الذي يساهم Pt(II) موت الخلايا السرطان، تثبيط الحمض النووي النسخ41،42. ومع ذلك، هي تقلص فوائد العلاج البلاتين بالسمية الشاملة من Pt(II) الذي يقوم بتشغيل تأثيرات جانبية شديدة. وهذا يؤدي إلى انخفاض الجرعات السريرية Pt(II)43، التي غالباً ما تسفر عن التركيزات العلاجية الفرعية من البلاتين التوصل إلى الحمض النووي. نتيجة لذلك، يسهم إصلاح الحمض النووي الذي يلي سرطان الخلية البقاء على قيد الحياة والحصول على المقاومة Pt(II). العلاج الكيماوي-مقاومة البلاتين مشكلة رئيسية في علاج السرطان والسبب الرئيسي لفشل العلاج44،45.

وقد وضعنا نانوسيستيم مستقرة تقوم بتغليف الوكيل Pt(II) بغية توفير تأثير التدريع في الدوران الجهازي ويقلل من الآثار الجانبية التي يسببها Pt الثاني. النظام يستند إلى acids-Pt(II) الاوليك أساسية استقرت مع تريبيبتيدي كيف لتشكيل نانومولسيون (الكيف-Pt-شمال شرق)46. اللبنات الأساسية للكيف-Pt-ني، الأحماض الأمينية تريبيبتيدي، فضلا عن حمض الأولييك، بمركز عموما المعترف بها كآمنة (غرا) مع الغذاء والدواء (FDA). الكيف-Pt-ني مستعدة باستخدام أسلوب نانوبريسيبيتيشن47. باختصار، هو المتقارن الاوليك acids-Pt(II) المذاب في مذيب عضوي وثم إضافة دروبويسي إلى حل كيف مائي (الشكل 1) عند 37 درجة مئوية. الحل هو آثار لعدة ساعات للسماح للتجميع الذاتي للكيف-Pt-كرسبوندنس نانومولسيون تتركز في 10 مركزات الطرد المركزي كاتشين وغسلها ثلاث مرات بالماء. تعديل الكيف مع فلوروفوري الكيميائية يسمح توليف الفلورسنت فيتك-الكيف-Pt-ني مناسبة للتصوير الطبي الحيوي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1-تجميع المتقارن الاوليك Acids–Platinum(II)

  1. تفعيل سيسبلاتين
    1. تعليق 50 ملغ (0.167 ملمول) من سيسبلاتين في 4 مل من الماء (مثلاً، نانوبوري) عند 60 درجة مئوية.
    2. إضافة مغ 55.2 dropwise (0.325 ملمول) إنيو3 في 0.5 مل من الماء لحل سيسبلاتين وآثاره رد فعل على الأقل 2 ح عند 60 درجة مئوية. وسوف تشكل ترسبات بيضاء من AgCl تشير إلى التقدم المحرز في رد فعل.
    3. لتحديد إذا كان رد فعل التنشيط اكتمال، إجراء الاختبار مع 10% HCl لوجود أيون Ag+ الحرة في الحل. ينبغي أن يكون الاختبار السلبي (وينبغي أن تشكل لا ترسبات AgCl إضافية).
    4. الطرد المركزي خليط رد فعل في س 3,220 ز لمدة 10 دقائق وإزالة ترسبات بيضاء من AgCl.
    5. جمع المادة طافية وتصفيته عن طريق عامل تصفية حقنه 0.2 مم. اختبار المادة طافية لوجود البلاتين بتطبيق 2-3 قطرات الحل عن طريق ماصة باستور سنكل2 بلورات. الاختبار إيجابي إذا كان لون تنسيق معقدة من القصدير مع البلاتين الأصفر/البرتقالي الداكن.
    6. استخدام المادة طافية مع Pt(II) المنشط للخطوة الثانية.
  2. تفاعل حمض الأولييك مع Pt(II) المنشط
    1. تعليق 94.2 مغ حمض الأولييك (0.333 ملمول) في 3 مل من الماء عند 60 درجة مئوية.
    2. إضافة مغ 13.3 (0.333 ملمول) من هيدروكسيد الصوديوم في 1 مل من الماء، وتخلط مع حل Pt(II) المنشط من الخطوة 1، 1
    3. إثارة رد فعل ح 2 عند 60 درجة مئوية والتالي في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. النفط الخام المنتج متسرعا براون/أصفر زيتي.
    4. الطرد المركزي خليط رد فعل في س 3,220 ز لمدة 10 دقائق وإزالة المادة طافية. الجاف المنتج الخام عند 25 درجة مئوية باستخدام مبخر دوراني. تنقية المنتج من يغسل متعددة مع الاسيتو الانيتريل. لون نقي acids–Pt(II) الاوليك المتقارن النهائي أصفر باهت.

2-تجميع الكيف-Pt-ني، والمسمى فيتك نانومولسيون فيتك-الكيف-Pt-شمال شرق

  1. توليف تريبيبتيدي الكيف وتريبيبتيدي المسمى فلوريسسينتلي فيتك-الكيف
    1. توليف الكيف استخدام الكيمياء الببتيد الحالة الصلبة القياسية. استخدام المعيار التالي اقتران الشروط إرفاق كل من الأحماض الأمينية: وانغ الراتنج (2.19 ملمول)، الأحماض الأمينية معتدلاً المحمية (4.38 ملمول)، 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium رباعي فلوروبورات (تبتو) (4.38 ملمول) ودييسوبروبيليثيلاميني (ديبا) (8.76 مليمول). حل الأحماض الأمينية مع تبتو في dimethylformamide (DMF) وديبا.
    2. نقع ز 5.7 معتدلاً-L-Phe 4-الكوكسيبينزيل الكحول راتنج (0.382 meq/g) في 25 مل DMF ل 1 ح قبل الاستخدام.
    3. ديبروتيكت مجموعة أمين من الحمض الأميني L-فينيلالاناين مع 15 مل محلول piperidine/DMF 20% لمدة 5 دقائق وتجاهل المذيب وتكرار الغسيل بدوره 20 دقيقة.
    4. أغسل الراتنج لمدة 1 دقيقة مع المذيبات التالية: DMF، الكحول الأيزوبروبيل (IPA)، DMF، معهد الإدارة العامة، DMF، معهد الإدارة العامة، DMF، DMF. تجاهل المذيب بعد كل غسل.
    5. إجراء اختبار كايزر لتحديد وجود المجموعة2 NH الحرة في الراتنج (انظر سوبستيبس) وإذا الإيجابية (وبذرة الراتنج الأرجواني)، بإضافة الأحماض الأمينية معتدلاً-لتيروزين إجراء الاقتران بين عشية وضحاها.
      1. إعداد كايزر اختبار حلول في زجاجات منفصلة.
      2. حل 5 غ نينهيدرين في 100 مل إيثانول.
      3. حل ز 80 من الفينول في 20 مل إيثانول.
      4. خلط 2 مل محلول مائي 0.001 M سيانيد البوتاسيوم مع
        98 مل بيريدين.
      5. إضافة 2-3 قطرات من كل كايزر اختبار حلول للعينة والحرارة في الماء المغلي لمدة 5 دقائق.
    6. عند نجاح اقتران من الأحماض الأمينية الثانية، إجراء اختبار كايزر، وإذا كانت سلبية المضي قدما في البروتوكول deprotection (الخطوات من 2.1.3 إلى 2.1.5). كرر هذه العملية مع الحمض الأميني معتدلاً-فينيلالاناين.
      1. عند اقتران من جميع الأحماض الأمينية، غسل الراتنج لمدة 1 دقيقة مع 5 مل من DMF، معهد الإدارة العامة، و DMF، الميثانول، الميثان والأثير ثنائي إثيل، بعد تجاهل كل غسل المذيبات. حفظ الراتنج لمزيد من المعالجة.
      2. استخدام نصف من الراتنج للخطوات التالية (2.1.7-2.1.9) لتعديل الببتيد مع فيتك. للحصول على تريبيبتيدي الكيف غير معدلة، اتبع الإجراء بدءاً من 2.1.10.
    7. تعديل الحمض الأميني الطرفي ن للكيف على الكيف-ن3 مع حمض 6-أزيدوهيكسانويك. وتحقيقا لهذه الغاية، مزيج ز 1 (0.382 ملمول) راتنج "وانغ الكيف" وملغ 120.1 (0.764 ملمول) حمض أزيدوهيكسانويك 6 مع ملغ 245.2 (0.764 ملمول) تبتو وملغ 197.1 (1.528 ملمول) من ديبا في 30 مل DMF. إثارة رد فعل بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.
    8. الحصول على الكيف-فيتك من توليف الكيف-ن3 مع فلوريسسين بروبارجيل عن طريق فعل انقر فوق. وتحقيقا لهذه الغاية، مزيج مغ 253 (0.097 ملمول) الكيف-ن3 راتنج وانغ مع مغ 3.78 (0.019 ملمول) لكوي الصلبة وملغ 71.9 (0.193 ملمول) fluorescein بروبارجيل 2.24 مغ (0.017 ملمول) من ديبيا. رد الفعل يجب أن يتغير لون من الأخضر إلى البنى.
    9. بعد 24 ساعة، تغسل الراتنج لمدة 1 دقيقة بالتناوب مع 5 مل من DMF وأصد خمس مرات، والميثانول والماء ثلاث مرات و DMF والمياه ثلاث مرات، والميثان والأثير ثنائي إثيل ثلاث مرات. تجاهل المذيب بعد كل غسل.
    10. تنشق بالكيف-فيتك أو الببتيد الكيف من الراتنج بمحلول حامض trifluoroacetic (تفا)/ترييسوبروبيلسيلاني (نصائح)/H2س في نسبة 95/2.5/2.5 أكثر من 3 ساعات.
    11. يعجل الببتيد الخام في البرد إثيل أثير، يغسل ثلاث مرات مع الاثير الباردة والجافة ثم تحت الفراغ.
  2. توليف نانومولسيون فيتك-الكيف-استقرت مع Pt(II) (فيتك-الكيف-Pt-شمال شرق) والكيف-Pt-ني
    1. حل 10 ملغ (0.0126 ملمول) المتقارن الاوليك acids–Pt(II) في 1.5 مل الكحول ومكان في حقنه 5 مل.
    2. ضع المحاقن مع المتقارن الاوليك acids–Pt(II) في مضخة الحقن وضبط التدفق إلى 0.1 مل/دقيقة.
    3. من أجل توليف فيتك-الكيف-Pt-ني، حل 1 ملغ (0.00105 ملمول) فيتك-الكيف والكيف 1 ملغ (0.00219 ملمول) (نسبة 1:2 المولى فيتك-KYF:KYF) في 20 مل الماء، وضبط درجة الحرارة للحل إلى 37 درجة مئوية. وتغطي جدران الحاوية مع رقائق الألومنيوم لتجنب فوتوبليتشينج fluorophore فيتك. لتوليف الكيف-Pt-ني، حل 2 مغ (0.0044 ملمول) من تريبيبتيدي الكيف في 20 مل الماء وضبط درجة الحرارة للحل إلى 37 درجة مئوية.
    4. إضافة المتقارن الاوليك acids–Pt(II) دروبويسي لحل تريبيبتيدي فيتك-الكيف/الكيف أو الكيف. تنفيذ هذه الخطوة تحت غطاء محرك السيارة.
    5. إثارة الحل بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة تتبخر المذيبات العضوية والسماح التجميع الذاتي فيتك-الكيف-Pt-ني أو الكيف-Pt-كرسبوندنس
    6. تركز فيتك-الكيف-Pt-ني أو الكيف-Pt-ني في مركز الطرد مركزي (ك 10 موكو)، وغسل ثلاث مرات مع 4 مل الماء نانوبوري.
    7. تخزين المحاليل الكيف-Pt-ني وفيتك-الكيف-Pt-ني في 4 درجات مئوية.
    8. تحليل لمحتوى البلاتين باستخدام مطيافية الامتصاص الذري (العاص)، عقب الصانع دليل48.
      1. إعداد معايير البلاتين في 10% من محلول HCl لمنحنى المعايرة (المدى الفعال لأنصار السنة ما بين 100 إلى 1,200 جزء في البليون (أجزاء من البليون)).
      2. حل 50 ميليلتر من حل الكيف-Pt-ني من الخطوة 2، 2 في 100 ميليلتر من ريجيا أكوا (خليط 3:1 تركيز حمض الهيدروكلوريك وحمض النيتريك) وترك في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. إضافة 850 ميليلتر من الماء لتصل إلى حجم عينة نهائي 1 مل. تحليل العينة باستخدام العاص. وينبغي تركيز حامض النهائية 10% في جميع العينات التي تم تحليلها.
      3. تسجيل القراءة من نقطة التركيز في جزء في البليون، وحساب المحتوى النهائي البلاتين في العينة (حساب لتمييع عينة والتخزين الأولية من نانومولسيون).

3-[كنفوكل] تصوير لاستيعاب الخلوية فيتك-الكيف-Pt-ني

  1. البذور 6 خطوط خلايا سرطان المبيض (A2780، CP70، SKOV3، OV90، TOV21G، و ES2)، إلى 4 أطباق [كنفوكل] الدائرة جيدا في كثافة 4.7 × 104 خلايا كل دائرة، وقبل الثقافة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.
  2. بعد 24 ساعة، تغسل الخلايا ثلاث مرات مع الفوسفات المالحة المخزن المؤقت (PBS) واحتضان مع فيتك-الكيف-Pt-ني في خلية الثقافة المتوسطة (راجع الخطوة 6.1 للخلية خط تفاصيل محددة) لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
  3. وبعد الحضانة، قم بإزالة الوسائط وتغسل الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني.
  4. إصلاح الخلايا مع الميثانول البارد لمدة 5 دقائق في-20 درجة مئوية، وتغسل ثلاث مرات مع 1 مل من برنامج تلفزيوني.
  5. بيرميبيليزي الخلايا مع 1 مل 0.1% تريتون-X لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ويغسل ثلاث مرات مع 1 مل من برنامج تلفزيوني.
  6. احتضان الخلايا لمدة 90 دقيقة مع جسم LAMP1 مترافق مع أليكسا فلور 647 (1 مل) في 01:50 تمييع في برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة. وبعد ذلك، غسل الخلايا 3 مرات مع برنامج تلفزيوني.
  7. تمييع الحل DAPI الأسهم (1 ملغ/مل) إلى 1 مغ/مل في برنامج تلفزيوني. ثم أضف 1 مل الحل المخفف لكل دائرة، واحتضان لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. تغسل الخلايا 3 مرات مع برنامج تلفزيوني.
  8. جبل كوفيرسليبس على شريحة باستخدام المتوسط المتصاعدة.
  9. صورة الخلايا باستخدام مجهر [كنفوكل] خلية حية في الطول الموجي الإثارة من 405 نانومتر، 488 نانومتر و 633 نانومتر. تعيين معلمات الكشف كما يلي: قوة الليزر من 0.2% ولا يزيد عن 1%، وحدة "بينولي 1 جيدة التهوية"، الحصول على ماجستير 650-750، الرقمية الإزاحة 0.
  10. فتح الصورة في برامج التصوير. تحت الصورة المعروضة، حدد الرسومات وتحديد، إدراج شريط مقياسلإدراج شريط مقياس للصورة.

4-المخدرات الإفراج عن الدراسات

  1. القيام بدراسات الإفراج عن المخدرات في برنامج تلفزيوني. ضبط قيم الأس الهيدروجيني ثلاثة مخازن برنامج تلفزيوني إلى 7.4، 6.8 و 5.0 على التوالي.
  2. تمييع 5 ميكروليتر من الكيف-Pt-ني في ميكروليتر 180 درجة الحموضة المناسبة برنامج تلفزيوني المخزن المؤقت، ونقل إلى 3.5 كاتشين موكو الغسيل الكلوي ميني كوب واحتضانها في 37 درجة مئوية في برنامج تلفزيوني.
  3. إزالة المخزن المؤقت من كل ثلاثة أنابيب الغسيل الكلوي مصغرة في 2، 4، 6، 24، 48 وح 140، وقياس تركيزات البلاتين من العاص. إعداد جميع العينات وفقا للخطوة 2.2.8 ولكن ضبط الحجم النهائي للعينة إلى 500 ميليلتر.

5-خلية الثقافة أساليب

  1. خلية ثقافة خطوط A2780، CP70، سكوف-3، OV-90، طوف-21 ز، دإط-2 في الخلية الثقافة المتوسطة (دميم) تستكمل مع 10% (A2780، CP70، سكوف-3، دإط-2) أو مصل الدم البقري الجنين 15% (طوف-21 ز، OV-90) (FBS)، مع لام الجلوتامين والبنسلين/ستربتوميسين. تنمو جميع الخلايا في شركة 5%2، وجو الماء المشبعة عند 37 درجة مئوية.
  2. البذور 3 × 105 خلايا في كل لوحة 96-جيدا وثقافة ما قبل بين عشية وضحاها لتجارب الاحتضان في المختبر. إعداد الحلول الكيف-Pt-ني، سيسبلاتين، وكاربوبلاتين في المياه. ضبط تركيز Pt(II) في الكيف-Pt-ني لتتناسب مع تركيز كاربوبلاتين وسيسبلاتين لكل خط الخلية. احتضان لمدة 72 ساعة عند 37 درجة مئوية.
  3. بعد الحضانة، تقييم جدوى الخلوية تستخدم مقايسة اللونية (مقايسة تكاثر الخلايا MTT). بإيجاز، إزالة المتوسطة وإضافة ميكروليتر 110% 10 MTT في المتوسط لكل خير واحتضانها ح 2 في 37 درجة مئوية. ثم إضافة 100 ميكروليتر المنظفات لكل بئر واحتضانها ح 5 في 37 درجة مئوية.
  4. تحقق من امتصاص في 570 نانومتر باستخدام قارئ لوحة. تحليل النتائج باستخدام التحليل الإحصائي مع اختبار Z واختبار ف.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

صورة الممثل تيم الكيف-Pt-ني المعدة باستخدام هذا البروتوكول يرد في الشكل 2 ألف. الكيف-Pt-الدائرة الوطنية للتوظيف كروية في التشكل، مشتتة، وموحدة في الحجم. قطر الأساسية الكيف-Pt-الدائرة الوطنية للتوظيف، يقاس مباشرة من ثلاث صور تيم مع الحد أدنى من 200 القياسات القيام به، 107 ± 27 نانومتر. قطر هيدرودينامية الكيف-Pt-ني، تحليلها باستخدام التحليل الطيفي الخفيفة الديناميكية (DLS)، وجد أن 240 نيوتن متر مع مؤشر polydispersity 0.156. تم تحديد إمكانات زيتا الكيف-Pt-ني في المياه لثلاث خلاصات مستقلة مع متوسط قيمة-60.1 أم. حجم الإمكانات عالية تشير إلى استقرار الغروية جيدة الصياغة، وتهمة السطحية السلبية هو يعزى إلى المتأين المجموعات السطحية سجع– من الأحماض الأولييك. 8.59 نقطة isoelectric للكيف، ولذلك فإنه يتوجب إيجابيا في الأس الهيدروجيني المحايدة.

تم فحص قدرة نانومولسيونس على عبور الغشاء الخلوي استخدام خطوط خلايا السرطان المسمى فلوريسسينتلي فيتك-الكيف-Pt-ني والمبيض. وترد النتائج في الشكل 2. فإنه يمكن رؤيتها بوضوح أن فيتك-الكيف-Pt-الدائرة الوطنية للتوظيف (الأخضر) وتوزع داخل سيتوسول لكن لم تقترن lysosomes (أحمر). هذه النتيجة تبين أن الكيف-Pt-نس إدخال الخلايا، ويمكن أن تخدم كوسيلة إيصال المخدرات داخل الخلايا.

وجرى تقييم استقرار الكيف-Pt-الدائرة الوطنية للتوظيف وفيتك-الكيف-Pt-نس مع دائرة الأراضي والمساحة. وتم قياس قطر نانومولسيونس في المياه على مدى عدة أشهر، ويتم عرض النتائج في الشكل 3. قطر هيدرودينامية كلا الصياغتين زاد ببطء خلال 4 أشهر في التخزين، إلى 320 نانومتر (الكيف-Pt-شمال شرق) و 240 نانومتر (فيتك-الكيف-Pt-شمال شرق)، ولكن أبعاد النانو تم الحفاظ عليها. هذه النتيجة تشير إلى أن فعالية تريبيبتيدي الكيف تستقر في نانومولسيونس على مدى فترات طويلة من الزمن.

تم قياس كفاءة تغليف Pt(II) والإصدار من نانومولسيون مع العاص. أن تركيز Pt(II) في الكيف-Pt-ني أنشئت لتكون 10 wt.%. Pt(II) الإفراج عن الكيف-Pt-ني على درجة الحموضة 7.4 6.8 (الفسيولوجية)، (إينتيرستيتيوم للورم)49، و 5.0 (اندوسومال) ويرد في الشكل 4A50 . الإفراج عن Pt(II) هو الأبطأ في درجة الحموضة 7.4 بنسبة 20.8 في المائة فقط من Pt(II) صدر بعد ح 4، بينما في الأس الهيدروجيني 6.8 و 5.0 الإفراج عن كان 32.8 في المائة من و 47.5 في المائة، على التوالي. واستمر الاتجاه نفسه بعد 24 ساعة وبعد 6 أيام. هذه النتيجة تشير إلى أن الإصدار Pt(II) من الكيف-Pt-ني هو الأس الهيدروجيني يعتمد، وأنه يمكن تأخير في الدورة الدموية الجهازية، وتسارع بمجرد نانومولسيونس ترانسلوكاتي إلى الورم.

النشاط البيولوجي للكيف-Pt-ني أنشئت في المختبر باستخدام خطوط خلايا سرطان المبيض نفسه كما هو الحال في دراسات التصوير. كانت المحتضنة الخلايا مع الكيف-Pt-ني عن ح 72، بتركيزات الكيف-Pt-ني تناظر IC50 لكل خط الخلية. تم تقييم الجدوى استخدام فحص MTT وقورنت النتائج للخلايا فقط والكيف-ني، المتقارن acids-Pt(II) الاوليك، كاربوبلاتين وسيسبلاتين. وترد نتائج النشاط البيولوجي للكيف-Pt-ني في الشكل 4B. الكيف-Pt-ني تخفيض صلاحية خطوط الخلايا اسوي A2780 (Pt الحساسة) و CP70 (Pt مقاومة) من 44.3 في المائة و 46.2 في المائة على التوالي. كاربوبلاتين، التناظرية ذات الصلة سريرياً، انخفضت قدرة 18.5% (A2780) و 9.6 ٪ (CP70) فقط. ولوحظ في نفس الاتجاه لزيادة تأثير الكيف-Pt-ني على موت الخلية عبر خطوط الخلايا الأخرى، وكذلك. تم تخفيض صلاحية Pt(II) الحساسة طوف-21 ز الخلايا 55.9 في المائة بعد الحضانة مع الكيف-Pt-ني، بينما كاربوبلاتين أسفرت عن تخفيض صلاحية بنسبة 16.5 في المائة فقط. في الخلايا OV-90 مع وسيطة Pt(II) المقاومة، تم تخفيض صلاحية 55.3 في المائة (الكيف-Pt-شمال شرق) و 23.9 في المائة (كاربوبلاتين). هذين الخطين الخلية مقاومة السرطان، دإط-2 وسكوف-3، أظهرت الحد في جدوى من 45.9 في المائة و 54.3 في المائة، على التوالي، للكيف-Pt-ني، و 10.3 في المائة (ES-2) و 16.8 في المائة (سكوف-3) كاربوبلاتين.

كما تمت مقارنة النشاط البيولوجي للكيف-Pt-ني مقابل سيسبلاتين. سيسبلاتين هو عامل على أساس Pt الثاني من الجيل الأول الذي لم يعد هو يفضل في العيادة بسبب لها الشخصية سمية51. في السطرين الخلية، سكوف-3 وطوف-ز 21، الحد من صلاحية كان أكبر بنسبة 15 في المائة و 40 في المائة، على التوالي، للكيف-Pt-ني من سيسبلاتين. في خطوط الخلايا المتبقية، نشاط الكيف-Pt-ني كان مماثلاً سيسبلاتين (A2780، CP70، OV-90)، أو انخفاض طفيف (ES-2). كما تم العثور على المتقارن الاوليك acids-Pt(II) أن تكون نشطة بيولوجيا. ومع ذلك، أظهرت الكيف-Pt-ني الحد الأعلى في الجدوى من المرافق في غالبية خطوط الخلية اختبار، مشيراً إلى أهمية نانوفورموليشن في النشاط Pt(II).

تتطلب التطبيقات البيولوجية للنظم نانوبارتيكولاتي الاستقرار في وسائل الإعلام ذات الصلة بيولوجيا، وبالتالي تم تقييم استقرار الكيف-Pt-ني في 20% مصل بقرى الجنين (FBS) ويتم عرض النتائج في الشكل 4. نحن الكشف عن أي دليل على الكيف-Pt-ني أوبسونيزيشن في المصل بعد يوم واحد من الحضانة.

Figure 1
رقم 1. مكونات نانومولسيونس (أعلى) والتخطيطي لإعداد نانومولسيون (أسفل)- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
رقم 2. صورة تيم الكيف-Pt-ني (A) وصور المجهر [كنفوكل] لامتصاص فيتك-الكيف-Pt-ني (الأخضر) بخلايا سرطان المبيض (نويات الأزرق و lysosomes الأحمر) (ب). أشرطة مقياس 10 ميكرومترات. تم تكييف هذا الرقم مع إذن من الكيمياء بيوكونجوجاتي 2018، 29، 2514-2519. 46 جمعية حقوق التأليف والنشر 2018 أمريكا الكيميائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3. الاستقرار الكيف-Pt-ني وفيتك-الكيف-Pt-ني في المياه. تمثل كل نقطة في المتوسط والانحراف المعياري من N = 3 وف <0.005. تم تكييف هذا الرقم مع إذن من الكيمياء بيوكونجوجاتي 2018، 29، 2514-2519. 46 جمعية حقوق التأليف والنشر 2018 أمريكا الكيميائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4. الكيف-Pt-ني الاستقرار والنشاط البيولوجي- Pt(II) (أ) الإفراج عن الكيف-Pt-ني في المخزن المؤقت لبرنامج تلفزيوني في pHs مختلفة (PBS، 37 درجة مئوية). الهاتف الخلوي صلاحية خطوط خلايا سرطان المبيض مختلفة بعد 72 ح الحاضنات مع الكيف-Pt-ني (ب). يمثل كل عمود في المتوسط والانحراف المعياري من N = 3 و ف <0.005. وتركيزات ثابتة في كل خط الخلية وهي كما يلي: 4.92 مم (A2780)، 8.80 مم (CP70)، 2.46 مم (طوف-21G)، 9.84 مم (SKOV3)، 7.38 مم (د أ ط-2)، مم 19.7 (OV-90). تم تعديل تركيز المتقارن acids–Pt(II) الكيف-Pt-ني والاوليك فيما يتعلق بمحتوى Pt(II) تقاس العاص. المختصرات: "كارببت"-كاربوبلاتين؛ "الكيف--NE" – الكيف المغلفة تريبيبتيدي نانومولسيون؛ "الكيف-Pt-NE" – الكيف المغلفة تريبيبتيدي نانومولسيون التي تحتوي على Pt(II)؛ سيسبت--سيسبلاتين؛ Pt-الاوليك – المتقارن acids–Pt(II) الاوليك. (ج) الاستقرار الكيف-Pt-ني في مصل الدم. تم تكييف هذا الرقم مع إذن من الكيمياء بيوكونجوجاتي 2018، 29، 2514-2519. 46 جمعية حقوق التأليف والنشر 2018 أمريكا الكيميائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وتشمل الخطوات الحاسمة في التوليف نانومولسيون ضبط نسبة المولى ركائز والحفاظ على مراقبة معدل درجة الحرارة والتدفق أثناء إضافة acids–Pt(II) الاوليك، وتوفير الوقت الكافي للتجميع الذاتي وتنقية المنتج باستخدام عمود مركزات الطرد المركزي. هذه المعلمات تؤثر على حجم ومورفولوجية الكيف-Pt-ني؛ وبالتالي، من المهم خاصة الحفاظ على نسبة المولى السليم وضبط الظروف الاصطناعية بشكل صحيح.

نسبة ركائز خلال التوليف نانومولسيون (الخطوة 3) حاسمة بالنسبة لعملية التجميع الذاتي ويحدد الحجم النهائي للمنتج. الكيف لنسبة المولى acid-Pt(II) الاوليك هو 1:3، وتركيز الأمثل تريبيبيدي الكيف في المياه 0.2 مم. وبالإضافة إلى ذلك، قد المذيبات العضوية المستخدمة لإذابة المتقارن الاوليك acid-Pt(II) في الخطوة 3، 1 الامتزاج مع الماء، متوافقة مع نظام الترشيح، والتبخر بسهولة في درجة حرارة الغرفة.

واحدة من الخطوات الحاسمة هو إضافة dropwise المتقارن الاوليك acid-Pt(II) في حل الكيف (الخطوة 3، 4). التدفق لا ينبغي أبطأ من 0.1 مل/دقيقة ولا أسرع من 0.2 مل/دقيقة، لأنه يمكن حمل بسرعة دون المستوى أمثل في هطول الأمطار نانومولسيون. أيضا، تضاف المتقارن الاوليك acids–Pt(II) في حل الكيف في 37 درجة مئوية بينما إثارة الخليط في صفيحة ضجة 600 لفة في الدقيقة. مرة واحدة وقد تم إضافة كل من acid-Pt(II) الاوليك، ينبغي أن يظل الحل في درجة حرارة الغرفة وسرعة إثارة انخفض إلى 150 دورة في الدقيقة. وينبغي أن تنفذ خطوة 3.5 في درجة حرارة الغرفة. الوقت الأمثل للتجميع الذاتي للكيف-Pt-ني (الخطوة 3، 5) 24 ساعة.

هناك خطر أن المنتج قد يعجل بينما تتركز نانومولسيون يجري مسبقاً. لذلك، من المستحسن أن نانومولسيون المخفف بكميات إضافية من الماء قبل يجري فصل في مركز الطرد مركزي ونسج لا أسرع من 2,465 س ز. نانومولسيونس المخفف ينبغي أن تضاف إلى مركزات الطرد المركزي في مختبرين بين يدور، وينبغي أن تكون مختلطة في نانومولسيون في عامل التصفية قبل إضافة الجزء القادم.

لم يتم اختبار قدرة على نانومولسيونس النموذج مع مشتقات الأحماض الدهنية عدا حمض الأولييك ولم يتم بعد تحديد. التطبيقات المستقبلية قد تشمل استخدام الببتيدات مختلفة لتيسير الجمعية المشارك مع حمض الأولييك. أيضا، يمكن استخدام حمض الأولييك يصرف مع المخدرات غير المستندة إلى البلاتين النوى المحتملة من نانومولسيونس.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

لم يكن لديك المؤلفين تضارب في الكشف.

Acknowledgments

نعترف مع الامتنان بالدعم المالي المقدم من المعهد الوطني للسرطان، منح SC2CA206194. يتم تعريف لا تضارب المصالح المالية.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2-(1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium
tetrafluoroborate (TBTU)		 ANASPEC INC.: AS-20376 SPPS
4-well chamber confocal dish Lab-Tek II, Thermo Fisher Scientific 154526 For imaging
6-bromohexanoic acid Chem-Impex INT’L INC. 24477 Click modification for peptide
A2780 Generously doanted by professor John Martignetti from The Mount Sinai Hospital Ovarian cancer cell line
Barnstead Nanopure Thermo Fisher D11901 water filtration system
BUCHI rotavapor R-3 Buchi Z568090 For solvent removal and sample drying
Centrifuge 5810 R eppendorf 5811F For platinum complex separation
Cis-dichlorodiamineplatinum (II) 99% Acros Organics 19376-0050 in vitro tests
CP70 Generously doanted by professor John Martignetti from The Mount Sinai Hospital Ovarian cancer cell line
Digital water bath VWR 97025-134 For warming up media for cell culture
Dynamic Light Scattering (DLS) Brookhaven Instrument Corporation For nanoparticle size measurments
ES-2 ATCC CRL-1978 ovarian cancer cell line
Fmoc-L-Lys(Boc)-OH 99.79% Chem-Impex INT’L INC. 00493 SPPS
Fmoc-L-Phe 4-alkoxybenzyl alcohol resin (0.382 meq/g), Chem-Impex INT’L INC. 01914 SPPS
Fmoc-LTyr(tBu)-OH 98% Alfa Aesar H59730 SPPS
HERACELL 150i CO2 incubator Thermo Scientific Fisher incubator
High pressure syringe pump New Era 1010-US For platinum complex addition in nanoparticle synthesis
Hotplate/stirrer VWR 12365-382 For sample stirring and heating
LAMP-1 Antibody(cojugated with Alexa Fluor 647) Santa Cruz Biotechnology sc-18821 AF647 For imaging
N,N-diisopropylethylamine (DIPEA) Oakwood Chemical 005027 SPPS
Ninhydrin 99% Alfa Aesar A10409 Kaiser test
Oleic acid Chem-Impex INT’L INC. 01421 For platinum complex synthesis
OV90 ATCC CRL-11732 Ovarian cancer cell line
PBS Corning 21-031-CV For cell wash
Permount mounting medium Fisher Chemical SP15-100 For imaging
Phenol Fisher Chemical A92500 Kaiser test
Phosphotungstic acid Fisher Chemical A248-25 negative stain for TEM
Piperidine 99% BTC 219260-2.5L SPPS
Platinum AAS standard soultion Alfa Aesar 88086 1000ug/ml for calibration curve
Propargyl bromide 97% Alfa Aesar L10595 For alkyne modification of fluoresceine
Scientific biological cabinet Thermo Scientific Fisher 1385 Bio-hood for cell culture
Self-Cleaning Vacuum System Welch 2028 Vacuum pump for rotavapor
Silver nitrate Acros Organics 19768-0250 Cisplatin activation
SKOV3 ATCC HTB-77 Ovarian cancer cell line
Sodium hydroxide Fisher Scientific S313-1 For platinum complex synthesis
Tin (II) chloride Sigma Aldrich 208256 Test for Platinum presence
TOV21G ATCC CRL-11730 Ovarian cancer cell line
Trifluoroacetic acid 99% (TFA) Alfa Aesar L06374 SPPS
Triisopropylsilane (TIPS) Chem-Impex INT’L INC. 01966 SPPS
Triton-X Sigma Aldrich T8787-100ML For imaging
Uranine powder 40% Fisher Scientific S25328A For alkyne modification of fluoresceine
Vivaspin 20 (10000 MWCO) Sartorious VS2001 For Nanoparticle wash and condensation
VWR Inverted Microscope VWR 89404-462 For cell culture monitoring

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Agrahari, V., Agrahari, V., Mitra, A. K. Nanocarrier fabrication and macromolecule drug delivery: challenges and opportunities. Therapeutic Delivery. 7 (4), 257-278 (2016).
  2. Anselmo, A. C., Mitragotri, S. Nanoparticles in the clinic. Bioengineering & Translational Medicine. 1 (1), 10-29 (2016).
  3. Peer, D., Karp, J. M., Hong, S., Farokhzad, O. C., Margalit, R., Langer, R. Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy. Nature Nanotechnology. 2 (12), 751-760 (2007).
  4. Roy Chowdhury, M., Schumann, C., Bhakta-Guha, D., Guha, G. Cancer nanotheranostics: Strategies, promises and impediments. Biomedicine & Pharmacotherapy. 84, 291-304 (2016).
  5. Jeevanandam, J., Chan, Y. S., Danquah, M. K. Nano-formulations of drugs: Recent developments, impact and challenges. Biochimie. , 99-112 (2016).
  6. Meerum Terwogt, J. M., Groenewegen, G., Pluim, D., Maliepaard, M., Tibben, M. M., Huisman, A., ten Bokkel Huinink, W. W., Schot, M., Welbank, H., Voest, E. E., Beijnen, J. H., Schellens, J. M. Phase I and pharmacokinetic study of SPI-77, a liposomal encapsulated dosage form of cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 49 (3), 201-210 (2002).
  7. Fan, Z., Sun, L., Huang, Y., Wang, Y., Zhang, M. Bioinspired fluorescent dipeptide nanoparticles for targeted cancer cell imaging and real-time monitoring of drug release. Nature Nanotechnology. 11 (4), 388-394 (2016).
  8. Jeong, Y., et al. Enzymatically degradable temperature-sensitive polypeptide as a new in-situ gelling biomaterial. Journal of Controlled Release. 137 (1), 25-30 (2009).
  9. Uesaka, A., et al. Morphology control between twisted ribbon, helical ribbon, and nanotube self-assemblies with his-containing helical peptides in response to pH change. Langmuir. 30 (4), 1022-1028 (2014).
  10. Hwang, W., Marini, D. M., Kamm, R. D., Zhang, S. Supramolecular structure of helical ribbons self-assembled from a B-sheet peptide. Journal of Chemical Physics. 118 (1), 389-397 (2003).
  11. Svobodova, J., et al. Poly(amino acid)-based fibrous scaffolds modified with surface-pendant peptides for cartilage tissue engineering. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (3), 831-842 (2017).
  12. Kumar, V. A., et al. Highly angiogenic peptide nanofibers. ACS Nano. 9 (1), 860-868 (2015).
  13. Romera, D., Couleaud, P., Mejias, S. H., Aires, A., Cortajarena, A. L. Biomolecular templating of functional hybrid nanostructures using repeat protein scaffolds. Biochemical Society Transactions. 43 (5), 825-831 (2015).
  14. Medina, S. H., Schneider, J. P. Cancer cell surface induced peptide folding allows intracellular translocation of drug. Journal of Controlled Release. 209, 317-326 (2015).
  15. Recio, C., Maione, F., Iqbal, A. J., Mascolo, N., De Feo, V. The Potential Therapeutic Application of Peptides and Peptidomimetics in Cardiovascular Disease. Frontiers in Pharmacology. 7, 526 (2016).
  16. McCarthy, K. A., et al. Phage Display of Dynamic Covalent Binding Motifs Enables Facile Development of Targeted Antibiotics. Journal of the American Chemical Society. 140 (19), 6137-6145 (2018).
  17. Lazar, V., et al. Antibiotic-resistant bacteria show widespread collateral sensitivity to antimicrobial peptides. Nature Microbiology. 3 (6), 718-731 (2018).
  18. Czeczor, J. K., McGee, S. L. Emerging roles for the amyloid precursor protein and derived peptides in the regulation of cellular and systemic metabolism. Journal of Neuroendocrinology. 29 (5), (2017).
  19. Branco, M. C., Sigano, D. M., Schneider, J. P. Materials from peptide assembly: towards the treatment of cancer and transmittable disease. Current Opinion in Chemical Biology. 15 (3), 427-434 (2011).
  20. Cheetham, A. G., et al. Targeting Tumors with Small Molecule Peptides. Current Cancer Drug Targets. 16 (6), 489-508 (2016).
  21. Ndinguri, M. W., Solipuram, R., Gambrell, R. P., Aggarwal, S., Hammer, R. P. Peptide targeting of platinum anti-cancer drugs. Bioconjugate Chemistry. 20 (10), 1869-1878 (2009).
  22. Eskandari, S., Guerin, T., Toth, I., Stephenson, R. J. Recent advances in self-assembled peptides: Implications for targeted drug delivery and vaccine engineering. Advanced Drug Delivery Reviews. 110, 169-187 (2017).
  23. Zhou, J., Du, X., Yamagata, N., Xu, B. Enzyme-Instructed Self-Assembly of Small D-Peptides as a Multiple-Step Process for Selectively Killing Cancer Cells. Journal of the American Chemical Society. 138 (11), 3813-3823 (2016).
  24. Sun, J. E., et al. Sustained release of active chemotherapeutics from injectable-solid beta-hairpin peptide hydrogel. Biomaterials Science. 4 (5), 839-848 (2016).
  25. Lock, L. L., Reyes, C. D., Zhang, P., Cui, H. Tuning Cellular Uptake of Molecular Probes by Rational Design of Their Assembly into Supramolecular Nanoprobes. Journal of the American Chemical Society. 138 (10), 3533-3540 (2016).
  26. Kalafatovic, D., Nobis, M., Son, J., Anderson, K. I., Ulijn, R. V. MMP-9 triggered self-assembly of doxorubicin nanofiber depots halts tumor growth. Biomaterials. 98, 192-202 (2016).
  27. Frederix, P. W., et al. Exploring the sequence space for (tri-)peptide self-assembly to design and discover new hydrogels. Nature Chemistry. 7 (1), 30-37 (2015).
  28. Horsley, J. R., et al. Photoswitchable peptide-based 'on-off' biosensor for electrochemical detection and control of protein-protein interactions. Biosensors and Bioelectronics. 118, 188-194 (2018).
  29. Hoyos-Nogues, M., Gil, F. J., Mas-Moruno, C. Antimicrobial Peptides: Powerful Biorecognition Elements to Detect Bacteria in Biosensing Technologies. Molecules. 23 (7), 1683 (2018).
  30. Xiao, X., et al. Advancing Peptide-Based Biorecognition Elements for Biosensors Using in-Silico Evolution. ACS Sensors. 3 (5), 1024-1031 (2018).
  31. Puiu, M., Bala, C. Peptide-based biosensors: From self-assembled interfaces to molecular probes in electrochemical assays. Bioelectrochemistry. 120, 66-75 (2018).
  32. Wang, J., et al. Developing a capillary electrophoresis based method for dynamically monitoring enzyme cleavage activity using quantum dots-peptide assembly. Electrophoresis. 38 (19), 2530-2535 (2017).
  33. Etayash, H., Thundat, T., Kaur, K. Bacterial Detection Using Peptide-Based Platform and Impedance Spectroscopy. Methods in Molecular Biology. 1572, 113-124 (2017).
  34. Handelman, A., Apter, B., Shostak, T., Rosenman, G. Peptide Optical waveguides. Journal of Peptide Science. 23 (2), 95-103 (2017).
  35. Chen, C., Liu, K., Li, J., Yan, X. Functional architectures based on self-assembly of bio-inspired dipeptides: Structure modulation and its photoelectronic applications. Advances in Colloid and Interface Science. 225, 177-193 (2015).
  36. Reddy, S. M., Shanmugam, G. Role of Intramolecular Aromatic pi-pi Interactions in the Self-Assembly of Di-l-Phenylalanine Dipeptide Driven by Intermolecular Interactions: Effect of Alanine Substitution. Chemphyschem. 17 (18), 2897-2907 (2016).
  37. Marchesan, S., et al. Unzipping the role of chirality in nanoscale self-assembly of tripeptide hydrogels. Nanoscale. 4 (21), 6752-6760 (2012).
  38. Scott, G. G., McKnight, P. J., Tuttle, T., Ulijn, R. V. Tripeptide Emulsifiers. Advanced Materials. 28 (7), 1381-1386 (2016).
  39. Galanski, M., Jakupec, M. A., Keppler, B. K. Update of the preclinical situation of anticancer platinum complexes: novel design strategies and innovative analytical approaches. Current Medicinal Chemistry. 12 (18), 2075-2094 (2005).
  40. Wheate, N. J., Walker, S., Craig, G. E., Oun, R. The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials. Dalton Transactions. 39 (35), 8113-8127 (2010).
  41. Oberoi, H. S., Nukolova, N. V., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. Nanocarriers for delivery of platinum anticancer drugs. Advanced Drug Delivery Reviews. 65 (13-14), 1667-1685 (2013).
  42. Fichtinger-Schepman, A. M., van Oosterom, A. T., Lohman, P. H., Berends, F. cis-Diamminedichloroplatinum(II)-induced DNA adducts in peripheral leukocytes from seven cancer patients: quantitative immunochemical detection of the adduct induction and removal after a single dose of cis-diamminedichloroplatinum(II). Cancer Research. 47 (11), 3000-3004 (1987).
  43. Englander, E. W. DNA damage response in peripheral nervous system: coping with cancer therapy-induced DNA lesions. DNA Repair. 12 (8), 685-690 (2013).
  44. Galluzzi, L., et al. Molecular mechanisms of cisplatin resistance. Oncogene. 31 (15), 1869-1883 (2012).
  45. Boeckman, H. J., Trego, K. S., Turchi, J. J. Cisplatin sensitizes cancer cells to ionizing radiation via inhibition of nonhomologous end joining. Molecular Cancer Research. 3 (5), 277-285 (2005).
  46. Dragulska, S. A., et al. Tripeptide-Stabilized Oil-in-Water Nanoemulsion of an Oleic Acids-Platinum(II) Conjugate as an Anticancer Nanomedicine. Bioconjugate Chemistry. 29 (8), 2514-2519 (2018).
  47. Martinez Rivas,, J, C., et al. Nanoprecipitation process: From encapsulation to drug delivery. International Journal of Pharmaceutics. 532 (1), 66-81 (2017).
  48. Agilent Technologies. Analytical Methods for Graphite Tube Atomizers, User's Guide Manual, 8th edition. , (2012).
  49. Park, S. Y., et al. A smart polysaccharide/drug conjugate for photodynamic therapy. Angewandte Chemie. 50 (7), 1644-1647 (2011).
  50. Canton, I., Battaglia, G. Endocytosis at the nanoscale. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2718-2739 (2012).
  51. Lokich, J., Anderson, N. Carboplatin versus cisplatin in solid tumors: an analysis of the literature. Annals of Oncology. 9 (1), 13-21 (1998).

Tags

الهندسة الحيوية، 144 قضية، نانومولسيون، وحمض الأولييك، تريبيبتيدي، علاج السرطان، تصوير البيولوجية، وإيصال الأدوية
نانومولسيون تريبيبتيدي استقرت حمض الأولييك
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Dragulska, S. A., Wlodarczyk, M. T., … More

Dragulska, S. A., Wlodarczyk, M. T., Poursharifi, M., Martignetti, J. A., Mieszawska, A. J. A Tripeptide-Stabilized Nanoemulsion of Oleic Acid. J. Vis. Exp. (144), e59034, doi:10.3791/59034 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter