Name: אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-21T18:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: למד את שיטת צמצום העורקים הרוחבי בעכברים לחקר היפרטרופיה לבבית ואי-ספיקת לב. פרוטוקול זה מספק הדרכה מפורטת לניתוח, הערכה פוסט-אופרטיבית ומדידת זרימת דם בקרוטיד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

XHTW הוא WM Keck קרן מלומד נכבד צעירים למחקר רפואי, והוא נתמך גם על ידי NIH / NHLBI מענקים R01-R01 HL089598 ו-R01HL091947, ניוון שרירים ו האגודה להעניק # 69238. RJvO הוא מקבל המלגה האגודה האמריקאית 2008-2010 פיזיולוגיים דוקטורט Genomics פיזיולוגיים. עבודה זו נתמכת גם על ידי בנות הברית מגט Leducq עבור CaMKII איתות בלב בחלקו.

חלק 1: הכנת שדה הפעלה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השדה ההפעלה ולחטא עם אלכוהול איזופרופילי 75%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא את כרית החימום פועל בטמפרטורה הנכונה. המערכת המומלצת היא משאבת מים Gaymar במחזור מחובר כרית טיפול זה נשמר ב 37 ° C ± 1 ° C. חשוב לשמור על חום גוף תקין במהלך הניתוח כדי למנוע ירידה מהירה בקצב הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כלים כירורגיים הם מעוקרים מעקר חרוז חם לפני הניתוח. עבור הליך זה, תזדקק מכשירי ניתוח הבאים: מספריים קהים, מעוקל כמובן מלקחיים X 2, קנס 45 ° מלקחיים זווית X 2, מספריים באביב זוויתי, מפשק החזה, בעל מחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Applicators כותנה צריך להיות על היד במקרה של דימום. </li></ol> חלק 2: הכנה אינטובציה של עכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים מורדמים בתא אינדוקציה עם 2% isoflurane מעורבב עם 0.5 -1.0 L / min 100% O 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קוצץ שיער משמשים לגלח את הפרווה מן הצוואר עד גובה החזה באמצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר ממוקם בתנוחה אופקית על גבי כרית חימום על מנת לשמור על טמפרטורת הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גומייה מונחת על השיניים הקדמיות של החיה להאריך את הצוואר. בעזרת מלקחיים מעוקל ביד אחת, הלשון היא מניפולציה בעדינות הצידה. עם זאת, אינטובציה endotracheal מבוצע באמצעות צינורות PE 90. הצינורית מחוברת endotracheal מכן אופניים נפח באופניים מכרסם הרווארד ההנשמה ב 125-150 נשימות / דקה נפח אדיר של 0.1-0.3ml. במהלך ההליך הכירורגי, הרדמה נשמר 1.5-2% isoflurane עם 0.5-1.0 L / min 100% O 2. נכון ברמה של הרדמה מאומת על ידי הפעלת לחץ על המיטה עכבר מסמר (הבוהן קמצוץ רפלקס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתחום כירורגית ולחטא עם פתרון בבטאדין ואחריו אלכוהול 70%. הליך זה חוזר על עצמו שלוש פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למנוע זיהום של שדה כירורגי במהלך המבצע, לעטוף סטרילית מושם על העכבר ומשאיר רק את שדה הניתוח נחשף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סט של כפפות סטריליות משמש עכבר בנפרד. </li></ol> חלק 3: קשירת של האאורטה רוחבי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתיחת בית החזה חלקי הצלע השנייה מבוצעת תחת מיקרוסקופ ניתוחי עצם החזה חזר בו באמצעות מפשק החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיפ פיין 45 ° זווית מלקחיים המשמשים בעדינות להפריד את רקמת בלוטת התימוס ושומן מן קשת אבי העורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות זיהוי של האאורטה רוחבי, חתיכה קטנה של תפר 6.0 משי ממוקם בין עורקי הראש innominate ושמאל (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני קשרים רופפים קשורות סביב האאורטה רוחבי פיסה קטנה של 27 ½ מחט קהה מד ממוקם במקביל האאורטה רוחבי. הקשר הראשון קשור במהירות נגד מחט, ואחריו השני המחט להסיר מיד כדי להניב צמצום של 0.4mm קוטר. בעכברים דמה השליטה, ההליך כולו הוא זהה, למעט קשירת של האאורטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מפשק חזה מוסר לבין יצוא של מהמנשים צבט למשך 2 שניות מחדש לנפח את הריאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כלוב הצלעות נסגר באמצעות תפרים 6.0 prolene עם דפוס תפר קטע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העור הוא נסגר באמצעות תפרים 6.0 prolene עם דפוס תפר מתמשך. </li></ol> חלק 4: לאחר ניתוח שחזור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור כאבים שלאחר הניתוח, העכבר מוזרק עם עצירות (0.1 מ"ג / ק"ג) intraperitoneally. אם יש סימנים של התייבשות לאחר הניתוח, תמיסת מלח סטרילית ניתנת intraperitoneally. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה היא הורידה בהדרגה למצב כבוי ואת הצינור endotracheal מוסר כאשר סימנים של נשימה ספונטנית להתרחש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העכבר הוא עבר לתפקיד המועדים ואיפשר להתאושש על כרית חימום. </li></ol> חלק 5: אישור של קשירת מוצלח של האאורטה רוחבי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבוע לאחר TAC, העכבר מחדש מרדים כדי לקבוע את מידת עומס יתר לחץ המושרה על ידי קשירת של האאורטה רוחבי. כפי שתואר לעיל, הרדמה נשמר 1.5-2% isoflurane עם 0.5-1.0 L / min 100% O 2 ו - טמפרטורת הגוף נשמר על 37 ° C ± 1 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 20 MHz דופלר בדיקה מושם על הצדדים על ימין ועל שמאל של הצוואר ב 45 ° זווית לזהות מהירויות הזרימה. מחשב מבוסס מעבד אות דופלר (האינדוס מכשירים, ביוסטון, טקסס) שימש כדי להציג ולאחסן אותות דופלר. 5 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם למידת העומס הלחץ הנדרש עבור פרוטוקול הניסוי, עכברים רק עם הראש ימינה (RC) / שמאל התרדמה (LC) יחס תזרים בטווח מסוים נכללות לניתוח נוסף. לדוגמה, מידה מתונה של עומס יתר לחץ מוביל ביחס של 5-8, בעוד ההתכווצות הדוקה וכתוצאה מכך עומס יתר לחץ חמור מוביל toa יחס של 10/08 (איור 5.3A). חיה דמה (אך לא פעלה ligated), לעומת זאת, צפויה להיות יחס של ~ 1 (איור 5.3B). </li></ol> 6: תוצאות נציג הישרדות כירורגית טיפוסי הבאים TAC ב wild-type עכברים הוא כ 80-90%. קשירת כירורגי מוצלח של האאורטה רוחבי תוביל יחס מהירות זרימת דופלר בין העורק הראשי על ימין ועל שמאל (RC / LC) של 50-10 (איור 1). בהשוואה דמה פעולה עכברים (איור 2 א), בעכברים עם עומס הלחץ צפויים לפתח היפרטרופיה לב בתוך 1-2 שבועות, התרחבות הלב אחרי שבוע 6-8, בהתאם אטימות של התכווצות (איור 2B). התמותה בחודש הראשון לאחר TAC היא נמוכה בדרך כלל (&lt;20%) ב wild-type עכברים, אם כי שונה גנטית עכברים עשוי להפגין שיעורי ההישרדות שונים. 6,7 <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig1tmb.jpg" alt="איור 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. אישור של קשירת העורקים רוחבי באמצעות מדידת מהירות דופלר. הנציג אותות דופלר מהירות של הימין (RC) והשאיר התרדמה (LC) בעורקים 6 ימים שלאחר TAC. הקלטות אלה להפגין קשירת מוצלח עם יחס RC / LC זרימה של ~ 6.8. אנא <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1729/1729fig1.jpg">לחץ כאן</a> כדי לראות גרסה גדולה יותר של דמות 1. <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. נציג Heart תמונות שלמות בעקבות TAC. ב. שאם המופעלים לב פראי סוג העכבר.. לב פראי עכבר מסוג 16 שבועות לאחר TAC. כל שורה = 1mm.

<ol><li>Rockman, H. A., Ross, R. S., Harris, A. N., Knowlton, K. U., Steinhelper, M. E., Field, L. J., Ross, J. Jr, Chein, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, 8277-8281 (1991).</li>
<li>Heineke, J., Molkentin, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cardiac+hypertrophy+by+intracellular+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cardiac hypertrophy by intracellular signaling pathways.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 7, 589-600 (2006).</li>
<li>Hartley, C. J., Reddy, A. K., Madala, S., Michael, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doppler+estimation+of+reduced+coronary+flow+reserve+in+mice+with+pressure+overload+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy.</a> Ultrasound Med. Biol. 34, 892-901 (2008).</li>
<li>Reddy, A. K., Taffett, G. E., Li, Y. -H., Lim, S. -W., Pham, T. T., Pocius, J. S., Entman, M. L., Michael, L. H., Hartley, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doppler+signal+processing+for+use+in+mice%3A+applications%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Doppler signal processing for use in mice: applications.</a> IEEE Trans. Biomed. Eng. 52, 1771-1783 (2005).</li>
<li>Li, Y. -H., Reddy, A. K., Ochoa, L. N., Pham, T. T., Hartley, C. J., Micheal, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+age+on+peripheral+vascular+response+to+transverse+aortic+banding+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Effect of age on peripheral vascular response to transverse aortic banding in mice.</a> J. Gerontol. 58A, 895-899 (2003).</li>
<li>Bourajjaj, M., Armand, A. S., Martins, daC. osta, Weijts, P. A., Nagel, B. V. ander, Heeneman, R., Wehrens, S., Windt, X. H. D. e, J, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NFATc2+is+a+necessary+mediator+of+calcineurin-dependent+cardiac+hypertrophy+and+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">NFATc2 is a necessary mediator of calcineurin-dependent cardiac hypertrophy and heart failure.</a> J. Biol. Chem. 28, 22295-22303 (2008).</li>
<li>Oort, R. J. van, Respress, J. L., Li, N., Reynolds, C., Almeida, A. C. D. e, Skapura, D. G., Windt, L. J. D. e, Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+development+of+pressure+overload+induced+cardiac+hypertrophy+and+dysfunction+in+an+RyR2-R176Q+knockin+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Accelerated development of pressure overload induced cardiac hypertrophy and dysfunction in an RyR2-R176Q knockin mouse model.</a> Hypertension. 55, (2010).</li>
<li>Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+cardiac+surgery%3A+comprehensive+techniques+for+the+generation+of+mouse+models+of+human+diseases+and+their+application+for+genomic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies.</a> Physiol Genomics. 16, 349-360 (2004).</li>
</ol>

TAC, אשר מחקה היצרות מסתם אאורטלי האדם, היא שיטה נפוצה כדי לגרום היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב בעכברים. אתרים חלופיים התכווצות העורקים כוללים את אבי העורקים העולה ואת הבטן. עולה התכווצות העורקים מהווה עומס יתר קיצונית ומהירה יותר על החדר השמאלי (LV). לעומת זאת, התכווצות אבי העורקים הבטני משאיר חלק שלם גדול יותר של מחזור כאמצעי פיצוי אפשרי. 8 לפיכך, היא לעתים קרובות TAC המודל המועדף כפי שהיא מספקת עבור עומס LV נאותה באופן תלוי זמן נוח יותר לחקירה. אמנם הליך זה יכול להיות מא...

<table><tbody><tr><td>משאבת Gaymar T/pump</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Model TP-500</td><td>משאבת מים במעגל סגור</td></tr><tr><td>רפידות לטיפול טמפרטורלי</td><td>Harvard Apparatus</td><td>60-3414</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר עיקור בחרוזים חמים</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קהים</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5980</td><td></td></tr><tr><td>מספרי קפיץ זוויתיים</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5668</td><td></td></tr><tr><td>מפריח בית חזה</td><td>Fine Science Tools</td><td>17002-02</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה עקומה גסה</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5138</td><td></td></tr><tr><td>פינצטה עדינה Dumont בזווית &amp;#x00B0; 45</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק מחט</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>מכונת גילוח חשמלית</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td>לגילוח פרוות עכבר</td></tr><tr><td>צינור PE 90</td><td>BD Biosciences</td><td>427420</td><td>לאינטובציה</td></tr><tr><td>MiniVent (מנשם)</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Type 845</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>ניתן לרכישה בחנויות לציוד רפואי</td></tr><tr><td>כפפות סטריליות</td><td>Mckesson</td><td>20-1565</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סטריאו</td><td>Unico</td><td>ZM186</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפר משי 6-0</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>מחט במידה &amp;frac12; 27 gauge</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפר prolene 6-0</td><td>Mckesson</td><td>3286</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>Institutional Animal Facility</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

Transverse Aortic Constriction in Mice

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללחץ עומס יתר הנגרמת היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב.<sup&gt; 1</sup&gt; TAC בתחילה מוביל היפרטרופיה פיצוי של הלב, אשר לעיתים קרובות קשורה עם שיפור זמני של contractility לב. במשך הזמן, עם זאת, בתגובה עומס hemodynamic כרוני הופך הסתגלותי, וכתוצאה מכך התרחבות הלב ואי ספיקת לב.<sup&gt; 2</sup&gt; המודל Murine TAC היה תוקף לראשונה על ידי רוקמן<em&gt; ואח&#39;</em&gt;.<sup&gt; 1</sup&gt;, ומאז נעשה שימוש נרחב ככלי בעל ערך לחקות מחלות לב וכלי דם האדם להבהיר תהליכי איתות יסודי מעורב התגובה hypertrophic לב ואי ספיקת לב הפיתוח. כאשר לעומת דגמים ניסיוניים אחרים של אי ספיקת לב, כגון חסימה מלאה של הקדמי השמאלי היורד (LAD) לב כלילית, TAC מספקת מודל לשחזור יותר של היפרטרופיה לב קורס זמן הדרגתי יותר בפיתוח של אי ספיקת לב. כאן אנו מתארים הליך צעד אחר צעד לביצוע TAC כירורגית בעכברים. כדי לקבוע את רמת עומס הלחץ המיוצר על ידי קשירת אבי העורקים, בתדירות גבוהה בדיקה דופלר מודד את היחס בין מהירויות זרימת הדם עורקי הראש ימינה ושמאלה.<sup&gt; 3, 4</sup&gt; עם שיעורי ההישרדות כירורגית של 80-90%, אבי העורקים רוחבי banding היא טכניקה יעילה של גרימת היפרטרופיה של החדר השמאלי ואי ספיקת לב בעכברים.

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללמוד המנגנונים היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב הפיתוח. כאן אנו מתארים נהלים להתכווץ אבי העורקים כדי ליצור תואר לשחזור של היפרטרופיה לב בעכברים.

היצרות אורטלית רוחבית (TAC) בעכבר היא מודל ניסויי נפוץ להיפרטרופיה של הלב ותסמונת לב שנגרמו כתוצאה מעומס לחץ...

הליך זה מתחיל בהרדמת עכבר, הכנתו לניתוח אספטי והנחתו בתנוחת גב (supine) על פד חימום. אינטובציה אנדוטראכאלית מבוצעת באמצעות צינור PE 90, המחובר לאחר מכן למנשם למכרסמים. לאחר מכן, מבוצעת תורקוטומיה חלקית עד לצלע השנייה והסטרנום מודחק.מזהים את האורטה הרוחבית (transverse aorta) ולאחר מכן קושרים אותה בין העורק הבלתי-שמי (innominate artery) לעורק התרדמה השמאלי. סוגרים את כלוב הצלעות, ולאחר מכן את העור באמצעות תפר רציף. לבסוף, מוציאים את צינור ההנשמה ומאפשרים לעכבר להתאושש.שלום, אני אנגלה דאל מדה מהמעבדה של ד"ר זנדר וורס במחלקה לפיזיולוגיה מולקולרית וביופיזיקה ב-Baylor College of Medicine. היום נראה לכם את ההליך לביצוע היצרה של אבי העורקים (transverse aortic constriction) בעכברים. אנו משתמשים בהליך זה במעבדתנו כדי לחקור את המנגנונים העומדים בבסיס היפרטרופיה של הלב והתפתחות אי-ספיקת לב.בואו נתחיל. לפני תחילת הניתוח לחסימה רוחבית של אבי העורקים (transverse aortic constriction או TAC), חטאו את שטח הניתוח באמצעות 75% isopropyl alcohol. הדליקו את משטח החימום וכוון אותו לטמפרטורה הנכונה.המערכת שאנו ממליצים עליה היא משאבת מים מחזרת המחוברת לרפידה לטיפול בחום הנשמרת בטמפרטורה של 37 פלוס או מינוס מעלה אחת Celsius. עקרו את הכלים הכירורגיים במכשיר עיקור בעגול חם (hot bead sterilizer) לפני הניתוח. עבור ההליך הכירורגי ב-tax, דרושים המכשירים הכירורגיים הבאים.זוג מספריים קהים, שתי פינצטות עקומות גסות או פינצטות בזווית של 45 מעלות, זוג מספרי קפיץ זוויתיים, רטרקטור לחזה ומחזיק מחט. יש להכין גם מקלוני צמרון למקרה של דימום. לאחר הכנת שדה הניתוח, ניתן להמשיך לאינטובציה של העכבר.כהכנה לאינטובציה, העכבר הרדמה בתא השראה ובעזרת מכונת גילוח מסירה את הפרווה מקו הצוואר ועד למרכז החזה. הנח את העכבר במצב שכיבה על הגב (supine) מעל למשטח החום. חשוב לשמור על טמפרטורת גוף רגילה במהלך הניתוח כדי למנוע ירידה מהירה בקצב הלב ומוות פתאומי אפשרי.הפעילו לחץ על מיטת הציפורן של העכבר כדי לוודא שהעכבר נמצא תחת הרדמה מלאה. הצמידו גומייה מעל שיניו הקדמיות של בעל החיים כדי למתוח את הצוואר. בעזרת פינצטה קמורה ביד אחת, הזיזו בעדינות את הלשון הצידה בעזרת היד השנייה. הכניסו צינור PE 90 אל תוך הקנה.בשלב הבא, חברו את הפחית האינטראטוראלי למנשם מכרסמים של Harvard הפועל במחזור נפח. המנשם צריך לפעול בקצב של 125 עד 150 נשימות לדקה ובנפח נשימה של 0.1 עד 0.3 milliliters, בהתאם למשקל הגוף של העכבר. חטאו את העור בתוך השדה הכירורגי באמצעות תמיסת Betadine ולאחריה אלכוהול 70%. חזרו על הליך זה שלוש פעמים כדי למנוע זיהום של השדה הכירורגי במהלך הניתוח. הניחו סדין סטרילי מעל העכבר, כך שרק שדה הניתוח יישאר חשוף.אנו מוכנים כעת לבצע ליגציה של האורטה הרוחבית במהלך הליך כירורגי זה. ההרדמה מתוחזקת בריכוז של 1.5% עד 2% isof fluorine עם 0.5 עד ליטר אחד לדקה של 100% oxygen. יש לוודא את רמת ההרדמה הנכונה על ידי הפעלת לחץ על מיטת הציפורן של העכבר.כדי לאשר את היעדרו של רפלקס הטוקן. התחילו את הניתוח בביצוע תורקוטומיה חלקית. חתכו את עצם החזה החל מהקצה הקרנייה ומטה עד לרמה של הצלע השנייה.באמצעות מיקרוסקופ כירורגי, הרחיבו את גרם העצם (sternum) באמצעות מקרב חזה (chest retractor). לאחר מכן, השתמשו בפינצטה בעלת קצה דק בזווית של 45 מעלות כדי להפריד בעדינות את התימוס ורקמת השומן מקשת האאורטה. לאחר זיהוי האאורטה הרוחבית, מקמו פיסת חוט תפר משי 6.0 קטנה בין העורקים ה-denominate והקרטידי השמאלי.קשרו שני קשרים רופפים סביב האורטה הרוחבית והניחו קטע קטן של מחט קהה במידה 27.5 במקביל לאורטה הרוחבית. הדקו במהירות את הקשר הראשון כנגד המחט, ולאחריו את הקשר השני, ולאחר מכן הוציאו מיד את המחט כדי להשיג היconstriction בקוטר של 0.4 millimeters.לאחר שביצעו ליגציה של האאורטה הרוחבית (transverse aorta), הסיר את מפיש החזה וסגור את מוצא המנשם למשך שתי שניות. כדי לנפח מחדש את הריאות בזהירות, סגור את כלוב הצלעות באמצעות תפר proline 6.0 בתבנית תפרים נפרדים. לבסוף, סגור את העור באמצעות תפר proline 6.0 בתבנית תפר רציף.עבור אלגזיה לאחר ניתוח. יש להזריק לעכבר בופרנורפין באופן תוך-פערי (intraperitoneal). אם מופיעים סימנים להתייבשות לאחר הניתוח, יש להזריק 0.3 עד 1 מיליליטר של תמיסת סליין סטרילית באופן תוך-פערי.הפחיתו בהדרגה את ההרדמה עד למצב כבוי (off). כאשר יופיעו סימנים של נשימה ספונטנית, הוציאו את הפחית התת-קולטראי, לאחר מכן העבירו את העכבר למצב שכיבה על הבטן והניחו לו להתאושש על פדי חימום. שבוע לאחר היצרות האורטה הרוחבית (transverse aortic constriction), הרדימו שוב את העכבר כדי לקבוע את מידת עומס הלחץ שנוצר כתוצאה מההיצרות של האורטה הרוחבית.ההרדמה וטמפרטורת הגוף נשמרות כפי שהודגם בעבר. הניחו probe דופלר של 20 megahertz בצדדים השמאלי והימני של הצוואר בזווית של 45 מעלות. כדי לזהות מהירויות זרימה בעורק הת צווארי (carotid artery), אנו משתמשים במעבד אותות דופלר מבוסס מחשב להצגה ואחסון של אותות הדופלר.בהתאם לדרגת עומס הלחץ הנדרשת עבור הפרוטוקול הניסויי, רק עכברים עם יחס בין זרימה בעורק התקרותי הימני (RC) לזרימה בעורק התקרותי השמאלי (lc) בטווח מסוים נכללים לניתוח המשך. לדוגמה, דרגה מתונה של עומס לחץ מובילה ליחס של חמישה עד שמונה, בעוד שחישוק הדוק יותר הגורם לעומס לחץ חמור מוביל ליחס של שמונה עד 10. לעומת זאת, בבעל חיים קבוצת ביקורת (sham), היחס הצפוי הוא בערך אחד.שיעור ההישרדות הכירורגית הטיפוסי לאחר TAC בעכברי פרא (wild type) הוא כ-80 עד 90%. קשירה כירורגית של האורטה הרוחבית תוביל ליחס במהירות זרימה בבדיקת דופלר בין העורקים הקרוטידיים הימני והשמאלי, או RC ביחס ל-lc, של חמישה עד 10 בהשוואה לעכברים שעברו ניתוח מדמה (sham).הראינו לכם כיצד לבצע היצרות רדיאלית של אבי העורקים (transverse aortic constriction) בעכברים, אך בעת ביצוע פרוצדורה זו חשוב לשמור על טמפרטורת גוף רגילה ולמזער את איבוד הדם. זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים שלכם.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון זה אנו מדגימים פרוטוקול ניסיוני להתכווצות זעיר פולשנית של אבי העורקים הרוחבי בעכברים כדי לבחון אי ספיקת לב הנגרמת כתוצאה מעומס יתר.

פסים רוחביים של קשת אבי העורקים במודל עכבר: טכניקה זעיר פולשנית בעכברים להשראת לחץ גבוה בחדר השמאלי

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך לב פולשנית לשינויים מבניים ותפקודיים במודל של עכברים של מחלת לב נוצר על ידי התכווצות רוחבי אבי העורקים, באמצעות B ו- M-mode אקוקרדיוגרפיה וצבע / הדמיה דופלר גל הדופק.

שינויים הערכה לב מורפולוגי תפקודי עכבר דגם של מועקה הרוחבית אב עורקים על ידי הדמית אקו

מתואר מודל חולדה של התכווצות אבי העורקים הבטני הגורם להיפרטרופיה של הלב ועיצוב מחדש. שיטה יעילה, ניתנת לשחזור וזעיר פולשנית משמשת כדי לספק פלטפורמה פשוטה אך שימושית למחקר בהיפרטרופיה ותפקוד לקוי של שריר הלב.

מודל של שיפוץ לב באמצעות התכווצות של אבי העורקים בבטן בחולדות

התכווצות העורקים רוחבי פולשנית (MTAC) חוסך את עיקרי התכווצות העורקים רוחבי רגיל (TAC) תוך ביטול השימוש מאוורר עם אינטובציה לקנה הנשימה. זה מוכיח להיות שיטה רצויה מאוד ללימודי תפוקה גבוהה על עומס של חדר שמאלי, בעיקר חקר תרגום.

פולשנית רוחבי אבי העורקים התכווצות עכברים

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר צעד אחר צעד הטכניקה של פולשנית רוחבי אבי העורקים הכיווץ (טק) בעכברים. על ידי חיסול של צנרור ואוורור אשר הכרחיות עבור הליך רגיל בשימוש נפוץ, טק פולשנית ומפשט את תהליך פעיל ומפחית את הלחץ על החיה.

הטכניקה של פולשנית התרחבות אבי העורקים רוחבי בעכברים עבור אינדוקציה של גדילת

כאן, אנו מציגים פרוטוקול של אבי העורקים רוחבי הכיווץ (טק) באמצעות ניקור לרוחב. טכניקה זו היא הליך ניתוחי החזה פולשנית, סגור במטרה לדמות עומס ואי ספיקת לב בעכברים ניצול ההגדרות הרגילות של מעבדה טק.

דגם סגור-החזה לזירוז רוחבי. התרחבות אבי העורקים בעכברים

פרוטוקול זה מציג שיטה משופרת להשגת היפרטרופיה שריר הלב חולפת עם תפר נספג, המדמה ירידה היפרטרופיה חדרית שמאל לאחר הסרת עומס לחץ. זה יכול להיות בעל ערך עבור המחקרים על תנאי היפרטרופי שריר הלב.

הפעלת התכווצות אבי העורקים רוחבית עם תפר נספג להשגת היפרטרופיה שריר הלב ארעית

הפרוטוקול הנוכחי מתאר טכניקה שונה ופשוטה עם הליך היצרות אבי העורקים הרוחבי (TAC) זעיר פולשני באמצעות retractor מתוצרת עצמית. הליך זה יכול להתבצע ללא מכונת הנשמה או מיקרוסקופ ומציג עומס לחץ, המוביל בסופו של דבר היפרטרופיה לבבית או אי ספיקת לב.

טכניקה שונה להתכווצות רוחבית של אבי העורקים בעכברים

הלב heterotopic העכבר מודל השתלת הוכח על ידי חוקרים רבים להיות שיטה חשובה לחקר המנגנונים של דחייה התגובה החיסונית. עם זאת, טכניקות מעורבות עדיין מאתגרת. על ידי שינוי שיטות סטנדרטיות יש לנו הצלחה עם יותר מ 1000 השתלות.

השתלת הלב Heterotopic ב עכברים

המעי הדק העכבר מודל השתלת הוכר ככלי חשוב ללמוד mechanismes הדחייה החיסונית מסך תרופות מדכאות חיסון חדש. עם זאת, מודל זה הוא מוגבל לשימוש בגלל טכניקות מעורב הוא אתגר מאוד מבחינה טכנית. עכשיו אנחנו מציגים את הטכניקה שונה.

מעי והשתלות קטן עכברים

למד את שיטת צמצום העורקים הרוחבי בעכברים לחקר היפרטרופיה לבבית ואי-ספיקת לב. פרוטוקול זה מספק הדרכה מפורטת לניתוח, הערכה פוסט-אופרטיבית ומדידת זרימת דם בקרוטיד.

אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

גלה סרטונים נוספים