Name: 角膜新生血管在小鼠碱烧伤模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-07T15:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: 了解小鼠碱烧伤模型中角膜新生血管的形成机制及抗血管生成疗法的效果。该方法通过氢氧化钠诱导角膜损伤，结合免疫染色定量分析新生血管与炎症水平，为角膜盲症治疗研究提供可重复的实验模型。

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我们感谢李新宇博士在准备手稿过程中提供的帮助。S.W. 的研究得到了杜兰大学启动资金、德克萨斯大学西南医学中心校长研究委员会新研究员奖、美国国立卫生研究院资助项目 EY021862、防盲研究基金会职业发展奖以及年龄相关性黄斑变性研究光明焦点奖的支持。

注意：以下方案及代表性结果以HDAC抑制剂SAHA为例化合物。然而，本方案绝不仅限于SAHA的使用，建议作为测试可溶性化合物对角膜新生血管形成影响的通用方法。对于稀释程度、给药频率和持续时间，需根据具体化合物进行相应微调。此外，若化合物在水中易于溶解，则可无需使用DMSO直接给药。
伦理声明：所有动物实验必须严格遵守国家法律和机构相关规定。本方案已获得杜兰大学机构动物护理和使用委员会批准使用。&#160;
1. 材料准备（按使用顺序）
<ol>
	<li>将一张纤维素滤纸（11 μm）裁剪成直径为 2 mm 的圆形。</li>
	<li>通过将 20 g NaOH 溶解于 500 ml 蒸馏 H2O 中，配制 1 M 的 NaOH 溶液。室温保存。注意：NaOH 溶液具有腐蚀性，可导致碱性灼伤。</li>
	<li>通过将 10 ml 的 100 mg/ml 氯胺酮和 2.5 ml 的 20 mg/ml 赛拉嗪溶于 37.5 ml 的 1x PBS 中，配制麻醉混合液，最终浓度为 20 mg/ml 氯胺酮和 4 mg/ml 赛拉嗪。</li>
	<li>通过将 500 mg 盐酸丙帕他卡因溶于 100 ml 过滤 PBS 中，配制 0.5% 的盐酸丙帕他卡因溶液（用于局部镇痛）。</li>
	<li>在 900 ml 蒸馏 H2O 中溶解 8 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na2HPO4, 和 0.23 g NaH2PO4，配制 1x PBS。调节 pH 至 7.4。用蒸馏 H2O 定容至 1,000 ml，并过滤以确保无菌。</li>
	<li>将 26.4 mg SAHA 溶于 1 ml 二甲基亚砜（DMSO）中，配制约 100 mM 的 1,000 倍浓缩储存液。每次使用前，用过滤 PBS 稀释至 1x（约 10 μM）工作液。储存液可于 -20 °C 保存一个月。注意：DMSO 是已知的毒素和致突变剂。</li>
	<li>配制用于固定的 4% 多聚甲醛（PFA）溶液。在通风橱中，将 4 g PFA 溶于 90 ml PBS 中。将混合物加热至 65 °C，并滴定调节 pH 至 7.4。待 PFA 完全溶解后，加 PBS 定容至 100 ml。4 °C 保存，最长可保存一个月。注意：PFA 具有致敏性、致癌性和毒性。</li>
	<li>将 5 ml 山羊血清和 500 μl Triton X-100 加入 94.5 ml PBS 中，配制 1x 封闭缓冲液。</li>
	<li>将 500 μl Triton X-100 加入 99.5 ml PBS 中，配制 1x 洗涤缓冲液。</li>
</ol>
2. 碱烧伤损伤 &amp;#38; 化合物处理
<ol>
	<li>取一片直径约 2 mm 的圆形滤纸，浸泡于 1 M NaOH 溶液中。</li>
	<li>通过腹腔注射给予小鼠 100 mg/kg 的氯胺酮和 5 mg/kg 的赛拉嗪进行麻醉，每 25 g 体重小鼠注射约 100 μl 来自步骤 1.3 的麻醉混合液。麻醉起效时间约为 1–2 分钟。可通过轻轻夹捏小鼠脚趾或尾巴来判断麻醉深度，若无反应则表明麻醉充分。注意：需注意防止小鼠因麻醉导致体温过低而死亡。</li>
	<li>使用滴管将一滴 0.5% 盐酸丙帕他卡因滴于角膜表面，以实现局部镇痛。</li>
	<li>用无菌镊子夹取一片已浸泡 NaOH 的滤纸。若发现滤纸上附着过多 NaOH 溶液或有滴落现象，可将其在干燥的滤纸上轻触片刻，以吸去多余液体。&#160;将该滤纸置于角膜中央，保持 30 秒，以造成约 2 × 2 mm2 面积的急性碱烧伤。使用手术显微镜有助于准确放置滤纸。注意：仅对小鼠的一只眼睛进行损伤处理，另一只眼作为对照。</li>
	<li>移除滤纸后，使用 10 ml 注射器以 1×PBS 缓冲液轻柔冲洗眼睛两次，每次 10 ml，以彻底清除残留的 1 M NaOH。</li>
	<li>立即在角膜表面滴加一滴 1×SAHA 工作溶液（或使用不含 SAHA 的 PBS 稀释 DMSO 作为溶剂对照）。每日给药 3 次，持续 14 天。注意：在此期间不建议使用局部抗生素软膏，因其可能干扰损伤发展及药物递送；可改用液体抗生素溶液，例如 3% 庆大霉素溶液。</li>
	<li>随后直接进行临床评估（见下文方案 3），或处死小鼠并摘除眼球，用于角膜平铺制片（见下文方案 4）或常规石蜡/冰冻组织学分析。</li>
</ol>
3. 临床评估
<ol>
	<li>在手术显微镜下以盲法对小鼠进行每日检查，并根据角膜混浊度、新生血管（NV）及血管大小对角膜新生血管进行评分。至少由两名观察者进行评分，并记录两者评分的平均值作为最终得分。
	<ol>
		<li>角膜混浊度评分采用0–4分制：0分表示完全透明；1分表示轻微模糊，虹膜和瞳孔清晰可见；2分表示轻度不透明，虹膜和瞳孔仍可辨认；3分表示不透明，瞳孔难以辨认；4分表示完全不透明，无法观察到瞳孔。</li>
		<li>新生血管（NV）评分采用0–3分制：0分表示无新生血管；1分表示新生血管位于角膜缘；2分表示新生血管跨越角膜缘并向角膜中央延伸；3分表示新生血管已延伸至角膜中央区域。</li>
		<li>血管大小评分采用0–3分制：0分表示无新生血管；1分表示在手术显微镜下可检测到新生血管；2分表示在手术显微镜下新生血管清晰可见；3分表示无需显微镜即可清晰观察到新生血管。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用数码相机分别在第7天和第14天拍摄眼部的代表性图像。</li>
</ol>
4. 角膜染色与平铺制片
<ol>
	<li>将去核的眼球在4 °C下用4% PFA固定至少1小时。</li>
	<li>将眼球转移至1×PBS中，并用镊子小心去除多余组织。</li>
	<li>在手术显微镜辅助下，使用18号针头或显微刀穿刺眼球角膜周围区域（注意：此操作应使眼内液体流出）。
	<ol>
		<li>从4.3.1节制作的穿孔处，使用手术剪将眼球前部（角膜）与后部切开分离。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将角膜重新转移至4% PFA中，于4 °C下固定过夜。</li>
	<li>弃去4% PFA（注意：PFA具有危害性，必须根据机构规定进行处置），用1x PBS冲洗角膜三次，以去除残留的PFA。</li>
	<li>在室温下用1×封闭缓冲液孵育至少2小时，以通透组织并防止一抗的非特异性结合。
	<ol>
		<li>在1×封闭缓冲液中加入一抗，稀释倍数为100-500倍。例如 大鼠抗小鼠 PECAM-1（1:100）用于检测血管，兔抗小鼠 LYVE-1（1:500）用于检测淋巴管，和/或大鼠抗小鼠 F4/80（1:100）用于检测巨噬细胞。4 °C 下孵育过夜。</li>
		<li>室温下用1×洗涤缓冲液洗涤六次，每次1小时，以充分去除未结合的一抗。</li>
		<li>在1×封闭缓冲液中按500-1,000倍稀释比例加入二抗。例如 488 nm 荧光标记的山羊抗大鼠 IgG（1:800）或 594 nm 荧光标记的山羊抗兔 IgG（1:800）。4 °C 下避光孵育过夜。</li>
		<li>室温下用1×PBS洗涤三次，每次1小时，以彻底去除未结合的二抗。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将角膜转移至新鲜的1x PBS中，在手术显微镜辅助下，从周边向中心方向小心地做四个切口。这应将角膜均分为四个大致相等的象限（最终形状类似于蝴蝶），并使其能够平整地贴附在载玻片上。</li>
	<li>使用适用于荧光成像的封片剂进行封片。为获得最佳效果，样品应立即进行成像并拍摄数字图像，但也可在4 °C避光条件下保存数周。</li>
</ol>

<ol><li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+visual+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li>
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<li>Hajrasouliha, A., Sadrai, Z., Chauhan, S., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((b-FGF+induces+corneal+blood+and+lymphatic+vessel+growth+in+a+spatially+distinct+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">b-FGF induces corneal blood and lymphatic vessel growth in a spatially distinct pattern.</a> Cornea. 31 (7), 804-809 (2012).</li>
<li>Rogers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+albino+mutation+of+tyrosinase+alters+ocular+angiogenic+responsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The albino mutation of tyrosinase alters ocular angiogenic responsiveness.</a> Angiogenesis. 16 (3), 639-646 (2013).</li>
<li>Connor, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse%3A+a+model+of+vessel+loss%2C+vessel+regrowth+and+pathological%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological.</a> Nat. Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

此处介绍的方案可产生可重复的血管新生、淋巴管新生和炎症水平，使其成为研究这三种（相互关联）过程的理想体系。尽管该方法可诱导角膜中央新生血管形成，但已有若干其他方法被开发用于产生更具方向性的新生血管，例如角膜缝合17 并植入表达生长因子的颗粒18，也可能引起关注。我们的方案专为成年小鼠设计，可提供一种&#160;易于使用的动物模型，同时使实验室能够充分利用一系列尚不可用于大型哺乳动物的分子与转基因技术。上述方案及代表性结果详细描述了使用C57bl/6J背景小鼠的操作过程。白化小鼠同样适用，且可能更便于成像；然而，最近一项研究表明，白化小鼠的新生血管反应可能不如其他品系显著19此外，与其他多种新生血管化模型不同，角膜新生血管可通过手术显微镜甚至肉眼观察进行评分。若需对新生血管化的程度进行更严格的定量分析，可利用多种软件对染色后平铺标本的数字图像进行分析，Conner 中提供了使用 Photoshop CS4 进行此类分析的示例。 等.&#160;近期 自然实验方案 纸 &#34;小鼠氧诱导视网膜病变的量化&#34; 20</sup...

角膜盲是导致失明的第四大常见原因，约占所有病例的4%1。角膜新生血管（NV）在多种此类疾病中起着重要作用，包括疱疹性角膜炎（西方地区感染性失明的首要原因）和沙眼（全球范围内感染性失明的首要原因）2。目前的治疗方法包括皮质类固醇、非甾体抗炎药（NSAIDs）、抗VEGF疗法、环孢素A，以及传统或激光外科手术技术3。然而，由于角膜NV相关疾病的严重致残性、能够治疗角膜NV的外科设施严重不足，以及缺乏疗效显著的药物治疗方案，最近一次专家圆桌会议得出结论：尽管已有现有疗法，这些疾病所带来的基本医疗需求仍未得到满足4。
人角膜由5层组成，包括3个细胞层（上皮层、基质层和内皮层）和2个界面层（前弹力层和后弹力层）。它在眼部起到机械屏障和屈光表面的作用。其透明性源于各组分之间的精细平衡，这种平衡对其正常功能至关重要5。角膜通常无血管，依靠沿其周边走行的微血管提供营养，这些微血管源自睫状动脉和眼动脉。当受到刺激时，可诱发这些血管发生血管新生，使其向角膜中央生长，从而导致视力受限，此过程称为角膜新生血管（corneal NV）6。角膜血管新生包括血管新生（hemangiogenesis）和淋巴管新生（lymphangiogenesis），表现为从角膜缘血管网向角膜中央长入新的血管和淋巴管。这会导致角膜&#34;血管生成特权&#34;的丧失，角膜混浊和纤维化程度增加，角膜各层结构破坏以及水肿7。引发角膜新生血管的确切因素众多，既可由沙眼等感染性疾病引起，也可由传统药物、工业化学品甚至化学战剂等化学物质诱导所致。
该过程的分子机制目前尚未完全阐明，但已鉴定出一些关键参与者。在正常情况下，角膜具有独特的“抗血管生成特权”，这由一组冗余的抗血管生成因子（如可溶性 VEGF-R1）8维持。然而，在受到外界刺激（如损伤）时，局部会上调促血管生成因子（例如 VEGF-A）。这打破了维持角膜抗血管生成特权的促/抗血管生成因子平衡，导致血管生成、淋巴管生成以及炎症反应，从而引发角膜病变甚至失明9。
鉴于这种高度致残性病理存在尚未满足的医疗需求，建立一个可靠的角膜新生血管（corneal NV）动物模型对本领域具有重要意义。本文介绍了一种此类模型：可控的碱烧伤损伤。自20世纪70年代以来，已有多种基于滤纸环的眼部损伤模型被使用10。1989年，哈佛医学院的一组眼科专家建立了一种标准的兔角膜中央碱烧伤模型，该方法通过将圆形滤纸浸入氢氧化钠（NaOH）溶液，并在特定浓度范围内将其贴附于角膜上实现11。此后，该技术已被改良并应用于小鼠12-14。最近，Wang 实验室利用小鼠角膜碱烧伤损伤模型，研究了组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂 SAHA 在角膜新生血管发生过程中的治疗作用15。本文所呈现的小鼠角膜碱烧伤损伤模型的方法主要基于另外两篇文献的前期工作14,16。

<table><tbody><tr><td>1 ml 注射器</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>18 G 针头</td><td>BD</td><td>305918</td><td></td></tr><tr><td>10 ml 注射器</td><td>BD</td><td>306575</td><td></td></tr><tr><td>25 G 针头</td><td>BD</td><td>305916</td><td></td></tr><tr><td>抗 F4/80 抗体（大鼠抗小鼠）</td><td>AbD Serotech</td><td>MCA497RT</td><td></td></tr><tr><td>抗 LYVE-1 抗体（兔抗小鼠）</td><td>Abcam</td><td>ab14917</td><td></td></tr><tr><td>抗 PECAM-1 抗体（大鼠抗小鼠）</td><td>BD</td><td>553370</td><td></td></tr><tr><td>抗 IgG Alexa 488 抗体（山羊抗大鼠）</td><td>Invitrogen</td><td>A11006</td><td></td></tr><tr><td>抗 IgG Alexa 594 抗体（山羊抗兔）</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td></td></tr><tr><td>相机</td><td>Tucsen</td><td>TCC 5.0 ICE</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>Fisher</td><td>12-548-B</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D4540-1L</td><td>注意：具有致突变性、毒性</td></tr><tr><td>镊子（钝头），虹膜镊</td><td>WPI</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>镊子（锐头），Dumont #4</td><td>WPI</td><td>500340</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮溶液</td><td>MedVet</td><td>RXKETAMINE</td><td>管制物质，使用需具备相应许可证。</td></tr><tr><td>显微镜光源</td><td>AmScope</td><td>LED-14M-YA</td><td></td></tr><tr><td>体视显微镜（7X-45X）</td><td>AmScope</td><td>SM-1B</td><td></td></tr><tr><td>封片介质，VECTASHIELD</td><td>Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S271-10</td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher</td><td>S397-500</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Fisher</td><td>S318-1</td><td>注意：腐蚀性</td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td></td><td>P6148-500G</td><td>注意：致敏性、致癌性、毒性</td></tr><tr><td>盐酸丙帕他卡因</td><td>Sigma</td><td>P4554-1G</td><td></td></tr><tr><td>剪刀（5 mm 刀片），Vanas</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>山羊血清</td><td>MPBio</td><td>92939249</td><td></td></tr><tr><td>载玻片</td><td>Fisher</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 1 号滤纸</td><td>Whatman</td><td>1001-6508</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪溶液</td><td>MedVet</td><td>RXANASED-20</td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠角膜新生血管的碱烧伤损伤模型

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

在正常情况下，角膜无血管，这种透明性对于维持良好的视觉敏锐度至关重要。角膜新生血管（NV）可由外伤、角膜移植或感染性疾病引起，会破坏角膜所谓的“抗血管生成特权”，并成为多种视觉病理改变的基础，甚至可能导致失明。尽管目前已有多种治疗选择，但角膜新生血管病变所带来的根本性医疗需求仍未得到满足。为了开发安全、有效且具有靶向性的治疗方法，需要建立一种可靠的角膜新生血管模型及药理干预模型。本文中，我们描述了一种小鼠碱烧伤诱导的角膜新生血管模型。该方案提供了一种在角膜上施加可控碱烧伤损伤的方法、给予目标药理化合物的操作步骤，以及对结果进行可视化观察的技术。该方法可能对研究角膜新生血管及其他新生血管性疾病的机制和干预策略具有重要意义。

碱烧伤后，角膜新生血管（NV）的发生具有可预测的时间依赖性特征。图1展示了在损伤后第7天，未经治疗的动物（图1A）与使用HDAC抑制剂SAHA治疗的动物（图1B）在新生血管形成和角膜混浊程度上的显著差异。
图2A 和2B 展示了未经处理的对照眼角膜平铺样本，经PECAM-1和LYVE-1一抗染色，以及Alexa Fluor 488和594二抗染色（分别对应）。图2C 和2D 显示了每日使用HDAC抑制剂SAHA处理的眼组织进行相同染色的结果，注意其中血管生成和淋巴管生成均显著减少。
图3A 和 3B 详细观察两种染色结果。PECAM-1 作为血管的标记物（图3A），而LYVE-1特异性结合淋巴...

角膜新生血管（NV）可导致多种视觉病理并发症。通过使用可控的碱烧伤损伤模型，可产生可量化的角膜新生血管水平，用于角膜新生血管的机制研究以及针对新生血管性疾病的潜在疗法的评估。

在正常情况下，角膜无血管，这种透明性对维持良好的视力至关重要。角膜新生血管（NV）……

本实验的总体目标是观察抗血管生成疗法在角膜新生血管小鼠模型中的作用。通过将一摩尔浓度的氢氧化钠溶液短暂作用于小鼠眼部，诱导产生可控程度的角膜新生血管。第二步，每日给予抗血管生成化合物，以抑制新生血管向受损角膜的生长。接下来，处死小鼠并摘取受伤的眼睛，进行解剖和免疫染色。为了定量分析新生血管化和炎症的程度，结果显示，根据临床观察和免疫染色结果，新生血管化程度均呈现出可量化的降低。该技术的应用前景在于为角膜盲的新型治疗提供可能，因为它能够产生可重复的新生血管化水平，可用于测试新的化合物和治疗方法。因此，该方法可为角膜病理性新生血管形成提供深入见解，也可作为探索血管生成和炎症机制的通用模型。演示该操作的将是本实验室的一名研究生。为准备碱烧伤损伤，首先，将一片直径约两毫米的圆形滤纸浸泡在1 M氢氧化钠溶液中。然后，通过腹腔注射给予小鼠麻醉，剂量为每千克体重100毫克的氯胺酮和每千克体重5毫克的赛拉嗪。注射后一至两分钟，轻捏小鼠的脚趾或尾巴以检测麻醉深度，确保小鼠无任何反应。使用滴管局部滴加一滴0.5%盐酸丙烷于眼球角膜表面以实现局部麻醉，并将小鼠置于手术显微镜下。接着，使用无菌镊子夹取浸有氢氧化钠的滤纸片，并在显微镜下观察，将滤纸片放置于角膜中央区域。静置30秒，以产生约2×2平方毫米的急性碱烧伤。小鼠的另一只眼睛不进行损伤处理，作为内部对照。移除滤纸后，使用注射器以10毫升1倍PBS溶液轻轻冲洗眼睛两次，每次10毫升，以清除残留的1摩尔氢氧化钠。灌流后，立即在角膜上局部滴加一滴1倍浓度的X Saha工作液。对照组小鼠在碱烧伤后及用PBS冲洗两次后，每日滴加PBS稀释的不含SAHA的DMSO溶液，持续14天，每日3次。在此两周期间，每日均给予SAHA处理组和对照组小鼠3%庆大霉素液体溶液。临床评估包括在手术显微镜下以盲法每日检查小鼠。至少由两名观察者进行评估，并记录最终得分，该得分为两名观察者评分的平均值。角膜混浊程度按0到4分进行评分，其中0分表示完全透明，1分表示轻微浑浊但仍可见虹膜和瞳孔。1 分为轻度浑浊，角膜仍清晰可见，虹膜和瞳孔可辨；2 分为轻度不透明，虹膜和瞳孔仍可识别；3 分为不透明，瞳孔难以辨认；4 分为完全不透明，无法观察到瞳孔。此处展示了角膜浑浊评分的比较。此外，按0到3的等级对新生血管形成进行评分。需要注意的是，所有眼睛的角膜周围均有一圈正常的非病理性血管，因此新生血管形成评分为0表示无新生血管。评分为1表示新生血管位于角膜缘处。评分为2表示新生血管跨越角膜缘并接近角膜中心。评分为3表示新生血管已延伸至角膜中心。此处展示了新生血管化评分的比较。在0到3的范围内，为血管大小增加一个额外评分，其中0分表示无新生血管，1分表示在手术显微镜下 barely 可见新生血管。2 分表示在手术显微镜下可清晰观察到新生血管，3 分表示无需显微镜即可清晰观察到新

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角膜新生血管在小鼠碱烧伤模型

本方案描述了一种在小鼠眼部表面造成擦伤并随后观察其伤口愈合过程的方法。该方案利用眼部钻头，在麻醉小鼠状态下部分去除眼表上皮。...

使用眼部钻头建立角膜上皮擦伤作为角膜伤口愈合模型

本文建立了基于小鼠和兔的动物模型，用于角膜上皮机械性和化学性损伤的研究，以筛选新的治疗方法及其潜在机制。...

Ex Vivo 和 In Vivo 角膜上皮机械性与化学性损伤动物模型

本方案重点研究小鼠角膜碱烧伤诱导的新生血管形成。该方法可建立可重复且可控的角膜疾病模型，用于研究病理性血管生成及其相关分子机制，并评估预防角膜新生血管形成的新药制剂。...

碱烧伤诱导角膜新生血管化的小鼠模型

本方案描述了一种在小鼠模型中诱导精确且可重复的角膜和角膜缘碱烧伤的方法。该方案的优点在于能够使损伤均匀地分布于曲率较高的小鼠角膜和角膜缘区域。...

采用打孔-角膜环钻技术在小鼠模型中诱导角膜和角缘碱烧伤损伤

本文所述的肾脏缺血再灌注损伤小鼠模型包括右肾切除术以获取对照组织，以及夹闭左肾蒂以诱导缺血，从而导致急性肾损伤。该模型采用经腹正中切口，所有操作均通过单一手术切口完成。...

肾缺血再灌注损伤：一种小鼠损伤与再生模型

本文介绍了小鼠激光诱导脉络膜新生血管（CNV）实验方案，该模型可重现新生血管性年龄相关性黄斑变性（AMD）的血管特征。掌握该技术后，可稳定有效地诱导CNV，作为测试多种实验干预措施的模型系统。...

一种用于激光诱导脉络膜新生血管形成的动物模型

运动员每年会遭受数百次轻度创伤性脑损伤（mTBI）或脑震荡；然而，这些损伤对大脑所造成的影响尚不明确。因此，建立一种能够稳定重现临床相关症状的单次及重复性mTBI动物模型，将有助于推动对轻度创伤性脑损伤和脑震荡的研究进展。...

单次与重复性轻度创伤性脑损伤的小鼠模型

虹膜新生血管是缺血性视网膜疾病的常见并发症，可能导致威胁视力的新生血管性青光眼。本文介绍一种用于诱导实验性虹膜新生血管的小鼠实验方案，可用于无创评估调节血管生成的物质。...

穿刺诱导的虹膜新生血管形成作为虹膜红变的小鼠模型

血管环张力测定技术用于研究血管平滑肌功能并筛选新药。本文报道了一种详细方案，用于测定小鼠肠系膜动脉的等长收缩力，并用于筛选血管平滑肌新的舒张剂。...

利用血管环张力测定法测量小鼠肠系膜动脉的等长收缩力

本研究介绍了一种利用激光散斑对比成像技术测量人体口腔黏膜微循环的实验方案。通过一例临床病例展示了结合异种胶原膜移植进行前庭成形术后伤口愈合的监测过程。...

一种监测人牙龈移植组织新生血管化的 novel 方法

了解小鼠碱烧伤模型中角膜新生血管的形成机制及抗血管生成疗法的效果。该方法通过氢氧化钠诱导角膜损伤，结合免疫染色定量分析新生血管与炎症水平，为角膜盲症治疗研究提供可重复的实验模型。

小鼠角膜新生血管的碱烧伤损伤模型

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