Name: Een alkali-brandwonden Model van Cornea Neovascularisatie in de muis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-07T15:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Leer een alkali-brandwondenmodel van cornea-neovascularisatie bij muizen met natriumhydroxide-inductie en anti-angiogene therapie. Deze methode kwantificeert neovascularisatie en ontsteking voor nieuwe behandelingen tegen corneablindheid.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We zijn dankbaar voor Dr Xinyu Li&#39;s hulp bij de voorbereiding van het manuscript. SW werd ondersteund door een Startup fonds van Tulane University, voorzitter van de Raad voor Onderzoek New Investigator Award van UT Southwestern Medical Center, NIH Grant EY021862, een loopbaanontwikkeling onderscheiding van het onderzoek naar Blindheid stichting voorkomen, en een Bright Focus Award in leeftijdsgebonden maculaire degeneratie Onderzoek .

Opmerking: Het volgende protocol en representatieve resultaten te gebruiken de HDAC inhibitor SAHA als voorbeeld verbinding. Echter, dit protocol is geenszins beperkt tot het gebruik van SAHA, en wordt aanbevolen als een algemene methode om de effecten van de oplosbare bestanddelen op corneale neovascularisatie testen. Kleine aanpassingen moeten worden gemaakt verdunningsgraad en frequentie en duur van de toepassing. Bovendien zullen verbindingen die gemakkelijk oplosbaar zijn in water kunnen bij afwezigheid van DMSO worden toegediend. Ethische verklaring: Alle dierproeven mogen alleen in overeenstemming met de nationale wetgeving en institutionele regelgeving worden uitgevoerd. Dit protocol werd goedgekeurd voor gebruik door Tulane University Institutional Animal Care en gebruik Comite. 1. Voorbereiding van Materialen (in volgorde van gebruik) <ol><li> Knip een stuk cellulose filterpapier (11 micrometer) in 2 mm cirkels. </li><li> Bereid een 1 M oplossing van NaOH dooroplossen van 20 g NaOH in 500 ml gedestilleerd H2O Bewaren bij kamertemperatuur. LET OP: NaOH oplossingen zijn corrosief en kunnen alkali-brandwonden veroorzaken. </li><li> Bereid een verdoving cocktail door verdunning 10 ml 100 mg / ml ketamine en 2,5 ml 20 mg / ml xylazine in 37,5 ml 1x PBS gedurende een eindconcentratie van 20 mg / ml ketamine en 4 mg / ml xylazine. </li><li> Bereid een oplossing van 0,5% van proparacaïne hydrochloride (voor topische analgesie) door 500 mg proparacaïne hydrochloride in 100 ml gefiltreerd PBS. </li><li> Bereid 1x PBS door het oplossen van 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na 2 HPO 4 en 0,23 g NaH 2 PO 4 in 900 ml gedestilleerd H2O Pas tot 7,4 pH. Breng de oplossing tot een eindvolume van 1000 ml met gedestilleerd H2O en filter om steriliteit te waarborgen. </li><li> Bereid voorraadoplossingen 1000 x SAHA bij ~ 100 mM in dimethylsulfoxide (DMSO) door oplossen van 26,4 mg SAHA in 1 ml DMSO. Verdun een 1x (~ 10 uM)oplossing gefiltreerd PBS voor elk gebruik. Bewaar de stockoplossing bij -20 ° C gedurende maximaal een maand. LET OP: DMSO is een bekend toxine en mutageen. </li><li> Een oplossing van paraformaldehyde (PFA) voor bevestiging 4%. Onder een chemische kap, los op in 90 ml PBS 4 g PFA. Breng het mengsel op 65 ° C en titreren tot een pH van 7,4. Zodra de PFA is opgelost, vervolgens wordt de oplossing tot een eindvolume van 100 ml. Bewaren bij 4 ° C gedurende maximaal een maand. LET OP: PFA is een bekend allergeen, kankerverwekkend en giftig. </li><li> Bereid 1x blokkerende buffer door verdunning 5 ml geit serum en 500 pl Triton X-100 in 94,5 ml PBS. </li><li> Bereid 1x wasbuffer door verdunning van 500 pl Triton X-100 in 99,5 ml PBS. </li></ol> 2. Alkali-Burn Injury &amp; Compound Treatment <ol><li> Dompel een rond stuk filterpapier, ~ 2 mm in diameter, in een oplossing van 1 M NaOH. </li><li> Verdoven de muis met een injectie van 100 mg / kg ketamine en 5 mg / kg xylazine, which is ~ 100 ul van de narcose cocktail van stap 1.3 per 25 g muis. Anesthesie moet rekening -1-2 min te stellen inch diepte van anesthesie kan worden bepaald door zacht knijpen de teen of de staart van het dier, als anesthesie voldoende zou er geen respons. Opmerking: Zorg moeten worden genomen om ervoor te zorgen de muis niet bezwijken voor anesthesie geïnduceerde hypothermie. </li><li> Met behulp van een pipet, topisch een daling van 0,5% proparacaïne hydrochloride toepassing op het hoornvlies voor lokale analgesie. </li><li> Met behulp van een steriel pincet, pick-up een stuk van NaOH gedrenkt filtreerpapier. Als u merkt dat teveel NaOH vastklampen aan of druipen van het filterpapier, tikt u in het kort de geweekte filterpapier op een droog stukje filtreerpapier om het overtollige te absorberen. Leg het stuk NAOH gedrenkt filtreerpapier op het centrale hoornvlies. Laat het gedurende 30 sec tot een acute alkali-branden van ~ 2 x 2 mm 2 in het gebied genereren. Een chirurgische microscoop is nuttig in de juiste plaatsen van het filterpapier. Opmerking: Alleen een oog van de muis should worden verwond met andere dienen als controle. </li><li> Verwijder het filter papier. Met behulp van een injectiespuit 10 ml voorzichtig spoel het oog met 10 ml 1x PBS twee keer weg te wassen resterende 1 M NaOH. </li><li> Breng onmiddellijk een druppel 1x SAHA werkende oplossing (of een voertuig controle bestaande uit PBS verdund DMSO die geen SAHA) lokaal aan het hoornvlies. Herhaal toepassing 3x/dag gedurende 14 dagen. Let op: tijdens deze periode een actueel antibiotische zalf niet wordt aanbevolen als het kan interfereren met de ontwikkeling van het letsel en de levering van de verbinding. Gebruik een vloeibaar antibioticum oplossing zoals 3% Gentamicine oplossing plaats. </li><li> Ga direct naar Klinische Beoordeling (Protocol 3 hieronder) of offeren de muis en het ophelderen van de ogen hoornvlies plat mount (Protocol 4 hieronder) of conventionele paraffine / bevroren histologie. </li></ol> 3. Clinical Assessment <ol><li> Voer een dagelijkse onderzoek van de muizen in een blinde manier onder een chirurgische microscoop en scoren corneal NV op basis van het hoornvlies, NV, en de omvang van het schip. Gebruik minstens twee waarnemers en registratie van een eindmeting is het gemiddelde van de twee. <ol><li> Score hoornvlies op een schaal van 0-4. 0 = helemaal duidelijk; 1 = licht troebel, iris en pupil goed zichtbaar; 2 = een beetje ondoorzichtig, iris en pupil nog steeds detecteerbaar; 3 = ondoorzichtig, leerlingen nauwelijks waarneembaar; en 4 = volledig ondoorzichtig met geen uitzicht op de leerling. </li><li> Scoren NV op een schaal van 0-3. 0 = geen neovessels; 1 = neovessels in de corneale limbus; 2 = neovessels verspreid over het hoornvlies limbus en het naderen van het hoornvlies centrum; 3 = neovessels verspreid over het hoornvlies centrum. </li><li> Score scheepsgrootte op een schaal van 0-3. 0 = geen neovessels; 1 = neovessels aantoonbaar onder chirurgische microscoop; 2 = neovessels gemakkelijk gezien onder chirurgische microscoop; 3 = neovessels goed zichtbaar zonder microscoop. </li></ol></li><li> Met een digitale camera, representatieve beelden van het oog 7 dagen en 14 dagen. </li></ol> 4.Verkleuring van de cornea en Flat Mounts <ol><li> Fix ontkernde oog in 4% PFA gedurende ten minste 1 uur bij 4 ° C. </li><li> Breng het oog op PBS 1x en een tang om voorzichtig te verwijderen overtollige weefsel. </li><li> Met behulp van een chirurgische microscoop gebruiken een naald (18 gauge) of micro-mes om de pericorneaal gebied van het oog perforeren (opmerking: dit zou afgeven van vloeistof uit het oog). <ol><li> Uit de perforatie in paragraaf 4.3.1 gebruiken een paar chirurgische schaar om het voorste deel van het oog (hoornvlies) vanaf het achterste gedeelte gesneden. </li></ol></li><li> Breng het hoornvlies terug in 4% PFA voor fixatie nacht bij 4 ° C. </li><li> Gooi de 4% PFA (LET OP: PFA is gevaarlijk en moet worden afgevoerd in overeenstemming met de institutionele regelgeving) en spoel het hoornvlies drie keer met 1x PBS om eventuele resten van PFA verwijderen. </li><li> Incubeer in 1x blokkerende buffer gedurende ten minste 2 uur bij kamertemperatuur om het weefsel doorlaatbaar en voorkomt niet-specifieke binding van het primaire antilichaam. <ol><li> Solliciteer primair antilichaam in 1x blokkerende buffer, bij een 100-500 voudige verdunning. (Bijv. rat anti-muis-PECAM-1 voor het detecteren van bloedvaten 1:100 konijn-antimuis-LYVE-1 lymfevaten detecteren van 1:500 en / of rat anti-mouse-F4/80 voor het detecteren macrofagen bij 1:100). Incubeer bij 4 ° C gedurende de nacht. </li><li> Was zesmaal met 1 x wasbuffer gedurende 1 uur elke keer bij kamertemperatuur volledig verwijderen van niet-gebonden primair antilichaam. </li><li> Breng een secundair antilichaam in 1x blokkerende buffer bij een 500-1.000 voudige verdunning. (Bijvoorbeeld een 488 nm fluorescerend gelabeld geit anti-rat-IgG bij 1:800 of 594 nm fluorescent gelabeld geit anti-konijn-IgG bij 1:800). Incubeer bij 4 ° C gedurende de nacht. </li><li> Was driemaal met 1x PBS gedurende 1 uur elk bij kamertemperatuur volledig verwijderen van ongebonden secundair antilichaam. </li></ol></li><li> Breng het hoornvlies in de frisse 1x PBS en, met behulp van een chirurgische microscoop, zorgvuldig maken vier insnijdingen van de periferie naar het centER. Dit moet het hoornvlies te verdelen in vier kwadranten van ongeveer gelijke grootte (de resulterende vorm moet zien er nogal als een vlinder) en laat het plat op een dia. </li><li> Monteer met een montage medium geschikt voor fluorescerende beeldvorming. Voor de beste resultaten moeten de monsters onmiddellijk worden afgebeeld en digitale foto&#39;s genomen, maar kan worden opgeslagen voor enkele weken beschermd tegen licht bij 4 ° C. </li></ol>

<ol><li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+visual+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li>
<li>Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Blindness%3A+A+Global+Perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+World+Health+Org%22%5BJournal%5D)">Corneal Blindness: A Global Perspective.</a> Bull. World Health Org. 79 (3), 214-221 (2003).</li>
<li>Gupta, D., Illingworth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatments+for+corneal+neovascularization%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Treatments for corneal neovascularization: a review.</a> Cornea. 30 (8), 927-938 (2011).</li>
<li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+statement+on+indications+for+anti-angiogenic+therapy+in+the+management+of+corneal+diseases+associated+with+neovascularisation%3A+outcome+of+an+expert+roundtable%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Consensus statement on indications for anti-angiogenic therapy in the management of corneal diseases associated with neovascularisation: outcome of an expert roundtable.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (1), 3-9 (2012).</li>
<li>Delmonte, D., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+Physiology+of+the+Cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cataract+Refract.+Surg%22%5BJournal%5D)">Anatomy and Physiology of the Cornea.</a> J. Cataract Refract. Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li>
<li>Cursiefen, C., Seitz, B., Dana, M. R., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+and+lymphangiogenesis+in+the+cornea.+Pathogenesis%2C+clinical+implications+and+treatment+options%5BTitle%5D)+AND+%22Der+Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis and lymphangiogenesis in the cornea. Pathogenesis, clinical implications and treatment options.</a> Der Ophthalmologe. 100 (4), 292-229 (2003).</li>
<li>Chang, J., Gabison, E., Kato, T., Azar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Corneal Neovascularization.</a> Curr. Opin Ophthalmol. 12 (4), 242-249 (2001).</li>
<li>Ambati, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Avascularity+is+due+to+Soluble+VEGF+Receptor-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Corneal Avascularity is due to Soluble VEGF Receptor-1.</a> Nature. 443 (7114), 993-997 (2006).</li>
<li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-A+Stimulates+Lymphangiogenesis+and+Hemangiogenesis+in+Inflammatory+Neovascularization+via+Macrophage+Recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">VEGF-A Stimulates Lymphangiogenesis and Hemangiogenesis in Inflammatory Neovascularization via Macrophage Recruitment.</a> J. Clin. Invest. 113 (7), 1040-1050 (2004).</li>
<li>Jiri, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paper+Strips+and+Rings+as+Simple+Tools+for+Standardization+of+Experimental+Eye+Injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthal.+Res%22%5BJournal%5D)">Paper Strips and Rings as Simple Tools for Standardization of Experimental Eye Injuries.</a> Ophthal. Res. 1975 (7), 363-367 (2009).</li>
<li>Ormerod, L., Abelson, M., Kenyon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+Models+of+Corneal+Injury+Using+Alkali-Immersed+Filter+Discs+Invest%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Standard Models of Corneal Injury Using Alkali-Immersed Filter Discs Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 30 (10), 2148-2153 (1989).</li>
<li>Saika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+effects+of+adenoviral+gene+transfer+of+bone+morphogenic+protein-7+on+a+corneal+alkali+injury+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">Therapeutic effects of adenoviral gene transfer of bone morphogenic protein-7 on a corneal alkali injury model in mice.</a> Lab. Invest. 85 (4), 474-486 (2005).</li>
<li>Ferrari, G., Bignami, F., Giacomini, C., Franchini, S., Rama, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+topical+infliximab+in+a+mouse+model+of+ocular+surface+scarring%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of topical infliximab in a mouse model of ocular surface scarring.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (3), 1680-1688 (2013).</li>
<li>Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymosin-beta4+modulates+corneal+matrix+metalloproteinase+levels+and+polymorphonuclear+cell+infiltration+after+alkali+injury.Invest%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 46 (7), 2388-2395 (2005).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Multiple+Pathogenic+Pathways+by+Histone+Deacetylase+Inhibitor+SAHA+in+a+Corneal+Alkali-Burn+Injury+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model.</a> Mol. Pharm. 10 (1), 307-318 (2013).</li>
<li>Yoeruek, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety%2C+penetration+and+efficacy+of+topically+applied+bevacizumab%3A+evaluation+of+eyedrops+in+corneal+neovascularization+after+chemical+burn%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Safety, penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn.</a> Acta Ophthalmol. 86 (3), 322-328 (2008).</li>
<li>Bucher, F., Parthasarathy, A., Bergua, A., Onderka, J., Regenfuß, B., Cursiefen, C., Bock, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+Ranibizumab+inhibits+inflammatory+corneal+hem-+and+lymphangiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Topical Ranibizumab inhibits inflammatory corneal hem- and lymphangiogenesis.</a> Acta Ophthalmol. , (2012).</li>
<li>Hajrasouliha, A., Sadrai, Z., Chauhan, S., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((b-FGF+induces+corneal+blood+and+lymphatic+vessel+growth+in+a+spatially+distinct+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">b-FGF induces corneal blood and lymphatic vessel growth in a spatially distinct pattern.</a> Cornea. 31 (7), 804-809 (2012).</li>
<li>Rogers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+albino+mutation+of+tyrosinase+alters+ocular+angiogenic+responsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The albino mutation of tyrosinase alters ocular angiogenic responsiveness.</a> Angiogenesis. 16 (3), 639-646 (2013).</li>
<li>Connor, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse%3A+a+model+of+vessel+loss%2C+vessel+regrowth+and+pathological%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological.</a> Nat. Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De hier gepresenteerde protocol resulteert in reproduceerbare niveaus van hemangiogenesis, lymfangiogenese, en ontsteking, waardoor het een ideaal systeem om deze drie (samenhangende) processen te bestuderen. Hoewel deze methode levert gecentraliseerde hoornvlies NV, verschillende methoden die zijn ontwikkeld om meer gerichte NV, namelijk het hechten van het hoornvlies 17 veroorzaken en geïmplanteerd groeifactor uitdrukken pellets 18, misschien ook interessant. Ons protocol is ontworpen voor gebrui...

Hoornvlies blindheid is de vierde meest voorkomende oorzaak van blindheid, verantwoordelijk voor ongeveer 4% van alle gevallen 1. Corneale neovascularisatie (NV) speelt een belangrijke rol in veel van deze ziekten, waaronder herpetische keratitis (de voornaamste infectieuze oorzaak van blindheid in de West) en trachoom (de belangrijkste oorzaak van besmettelijke blindheid) 2. Huidige therapieën omvatten steroïden, niet-steroïde anti-inflammatoire geneesmiddelen (NSAIDs), anti-VEGF therapie en cyclosporine A evenals conventionele of laser chirurgische technieken 3. De sterk ondermijnende aard van corneale NV basis pathologieën, het gebrek aan chirurgische faciliteiten kunnen behandelen cornea NV en het ontbreken van een sterk presterende farmacologische optie leidde een recent deskundige ronde tafel te concluderen dat, ondanks de bestaande therapieën, de fundamentele medische behoefte door deze pathologieën nog onvervulde 4. Het menselijk hoornvliesbestaat uit 5 lagen, 3 cellulaire lagen (epitheel, stroma en endotheel) en 2 interface (Bowman membraan en Descemet membraan). Het functioneert als een mechanische barrière en brekend oppervlak voor het oog. Het transparante karakter is het gevolg van een delicaat evenwicht tussen de componenten en is een integraal onderdeel van de juiste functie 5. Normaal avasculaire, het hoornvlies bloed uit microvessels die langs de buitenrand die worden gevoed vanuit de ciliaire en oogheelkundige slagaders. Cornea NV treedt op wanneer een stimulus angiogenese bevordert deze vaartuigen waardoor ze groeien naar het midden van het hoornvlies en dus zicht 6 beperken. Corneale angiogenese omvat hemangiogenesis en lymfevaten, die resulteren in de ingroei van bloedvaten en lymfevaten van de limbale vasculaire arcade naar het midden van het hoornvlies. Dit leidt tot een afbraak van het hoornvlies &quot;angiogene privilege&quot;, een verhoging van het hoornvlies en fibrose, verstoring van de cornea layers, en oedeem 7. De precieze triggers van het hoornvlies NV zijn talrijk, variërend van een reactie op infectieziekten zoals trachoom een ​​chemisch geïnduceerde toestand veroorzaakt traditionele medicijnen, industriële chemicaliën, of zelfs stoffen voor chemische oorlogvoering. De moleculaire mechanismen van dit proces niet, nog zo, volledig gekarakteriseerd; Er zijn echter een paar belangrijke spelers geïdentificeerd. Onder normale omstandigheden het hoornvlies bezit een unieke &#39;angiogene privilege&#39; onderhouden door een Redundant Array of anti-angiogene factoren (zoals oplosbare VEGF-R1) 8. In reactie op een externe stimulus (bijvoorbeeld letsel), zal er een lokaal verhoogde expressie van pro-angiogene factoren (zoals VEGF-A). Deze tips het saldo van pro-en anti-angiogene factoren die angiogene voorrecht het hoornvlies ten grondslag ligt, en leidt tot hemangiogenesis, lymphangeogenesis, en ontsteking, dus waardoor de cornea pathologie en zelfs blindheid 9. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Aangezien de medische behoefte van deze zeer slopende pathologie, is het van belang het veld om een ​​betrouwbaar diermodel van hoornvlies NV hebben. Hier presenteren we een dergelijk model: gecontroleerd alkali-brandwonden. Diverse eye-verwonding modellen op basis van het gebruik van filterpapier ringen worden al sinds 1970 10. In 1989, een groep van de Harvard Medical School oogartsen gekenmerkt een standaardmodel van een centrale cornea alkali-brandwonden bij konijnen op basis van het weken een cirkelvormig stukje filterpapier met natriumhydroxide (NaOH) en toe te passen op het hoornvlies bij een bepaald bereik van concentraties 11. Sindsdien is deze techniek aangepast voor gebruik in de muis 12-14. Onlangs, Wang lab bestudeerden de therapeutische effecten van histone deacetylase (HDAC) inhibitor SAHA in de pathogenese van corneale NV een muis hoornvlies alkali-brandwonden model 15. De methodiek van de muis hoornvlies alkali-brandwonden hier gepresenteerde model werd gebouwdvooral op het voorafgaande werk van twee andere kranten 14,16.

<table><tbody><tr><td>1 ml Syringe</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>18 G Needle</td><td>BD</td><td>305918</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Syringe</td><td>BD</td><td>306575</td><td></td></tr><tr><td>25 G Needle</td><td>BD</td><td>305916</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4/80 (rat anti-mouse)</td><td>AbD Serotech</td><td>MCA497RT</td><td></td></tr><tr><td>Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse)</td><td>Abcam</td><td>ab14917</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse)</td><td>BD</td><td>553370</td><td></td></tr><tr><td>Anti-IgG Alexa 488 (goat anti-rat)</td><td>Invitrogen</td><td>A11006</td><td></td></tr><tr><td>Anti-IgG Alexa 594 (goat anti-rabbit)</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td></td></tr><tr><td>Camera</td><td>Tucsen</td><td>TCC 5.0 ICE</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips</td><td>Fisher</td><td>12-548-B</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D4540-1L</td><td>Let op: Mutageen, Toxisch</td></tr><tr><td>Forceps (Blunt), Iris</td><td>WPI</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>Forceps (Sharp), Dumont #4</td><td>WPI</td><td>500340</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine Solution</td><td>MedVet</td><td>RXKETAMINE</td><td>Gecontrolleerde stof, juiste licentie vereist voor gebruik.</td></tr><tr><td>Light Source for Microscope</td><td>AmScope</td><td>LED-14M-YA</td><td></td></tr><tr><td>Microscope (Stereo 7X-45X)</td><td>AmScope</td><td>SM-1B</td><td></td></tr><tr><td>Mounting Medium, VECTASHIELD</td><td>Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S271-10</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Fisher</td><td>S397-500</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Fisher</td><td>S318-1</td><td>Let op: Corrosief</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td></td><td>P6148-500G</td><td>Let op: Allergeen, Carcinogeen, Toxisch</td></tr><tr><td>Proparacaine Hydrochloride</td><td>Sigma</td><td>P4554-1G</td><td></td></tr><tr><td>Scissors (5 mm blade), Vanas</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Goat Serum</td><td>MPBio</td><td>92939249</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Slides</td><td>Fisher</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Grade 1 Filter Paper</td><td>Whatman</td><td>1001-6508</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine Solution</td><td>MedVet</td><td>RXANASED-20</td><td></td></tr></tbody></table>

een alkali-brandwonden model van cornea neovascularisatie in de muis

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Onder normale omstandigheden, het avasculaire hoornvlies, en deze transparantie is essentieel voor het handhaven van goede gezichtsscherpte. Neovascularisatie (NV) van het hoornvlies, die kan worden veroorzaakt door trauma, keratoplastie of besmettelijke ziekte, breekt de zogenaamde angiogene privilege &quot;van de hoornvlies en vormt de basis van meerdere visuele pathologieën die zelfs kan leiden tot blindheid. Hoewel er verschillende behandeling opties beschikbaar, de fundamentele medische noodzaak door het hoornvlies neovascular pathologieën blijft onvervulde. Om een ​​veilige, effectieve en doelgerichte therapieën te ontwikkelen, is een betrouwbaar model van het hoornvlies NV en farmacologische interventie vereist. We beschrijven hier een alkali-brandwond corneale neovascularisatie model in de muis. Dit protocol verschaft een werkwijze voor het aanbrengen van een gecontroleerde alkali-brandwonden aan het hoornvlies, toedienen van een farmacologische verbinding van belang en visualisatie van het resultaat. Deze methode zou kunnen blijken instrumentatieTal voor het bestuderen van de mechanismen en mogelijkheden voor interventie in de cornea NV en andere neovascular aandoeningen.

Na alkali-brandwonden, hoornvlies NV treedt op voorspelbare, tijdsafhankelijke wijze. Figuur 1 toont het grote verschil in zowel neovascularisatie en corneale opaciteit tussen een onbehandeld dier (figuur 1A) en een dier behandeld met de HDAC inhibitor SAHA (Figuur 1B ) op de 7 dag tijdstip. Figuren 2A en 2B tonen een corneale vlakke bevestiging van een onbehandelde controle-oog met primaire PECAM-1 en LYVE-...

Neovascularisatie (NV) van het hoornvlies kan compliceren meerdere visuele pathologieën. Met behulp van een gecontroleerde, alkali-brandwonden-model, kan een kwantificeerbare niveau van de cornea NV worden geproduceerd voor mechanistische studie van het hoornvlies NV en evaluatie van potentiële therapieën voor neovascular aandoeningen.

Een alkali-brandwonden Model van Cornea Neovascularisatie in de muis

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Het algemene doel van het experiment is om het effect van anti-angiogene therapie te observeren in een muismodell van corneaal neovascularisatie. Dit wordt bereikt door kortstondig een 1 M oplossing natriumhydroxide op het oog van de muis aan te brengen om een gecontroleerd niveau van corneaal neovascularisatie op te wekken. Als tweede stap wordt de anti-angiogene verbinding dagelijks toegediend, wat de groei van nieuwe vaten in het beschadigde hoornvlies remt.Vervolgens wordt de muis geëuthanaseerd en wordt het beschadigde oog geoogst, gedisseceerd en immuunhistochemisch gekleurd. Om het niveau van neovascularisatie en inflammatie te kwantificeren, tonen de resultaten een kwantificeerbare afname van neovascularisatie aan op basis van zowel klinische observatie als immuunkleuring. De implicaties van deze techniek reiken tot nieuwe therapieën voor hoornvliesblindheid, omdat het een reproduceerbaar niveau van neovascularisatie biedt waartegen nieuwe verbindingen en therapieën kunnen worden getest.Deze methode kan dus inzicht bieden in pathologische corneale neovascularisatie. Het kan ook dienen als model om in het algemeen de mechanismen van angiogenese en inflammatie te onderzoeken.

an-alkali-burn-injury-model-of-corneal-neovascularization-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Dit protocol beschrijft een methode om een slijtage aan de oculaire oppervlakte van de muis toebrengen, en volgen de wond genezingsproces daarna. Het protocol maakt gebruik van een oogbeschadigingen en/of burr gedeeltelijk verwijderen van de oppervlakte-epitheel van het oog bij verdoofde muizen.

Hoornvlies epitheliale schuren met oogbeschadigingen en/of Burr als een Model voor hoornvlies wondgenezing

Hier worden diermodellen op basis van muis en konijn ontwikkeld voor mechanisch en chemisch letsel van hoornvliesepitheel om nieuwe therapieën en het onderliggende mechanisme te screenen.

Ex vivo en in vivo diermodellen voor mechanische en chemische verwondingen van cornea-epitheel

Dit protocol richt zich op alkalische brandwonden geïnduceerde neovascularisatie van het hoornvlies bij muizen. De methode genereert een reproduceerbaar en controleerbaar model voor hoornvliesaandoeningen om pathologische angiogenese en de bijbehorende moleculaire mechanismen te bestuderen en om nieuwe farmacologische middelen te testen om neovascularisatie van het hoornvlies te voorkomen.

Een muismodel voor neovascularisatie van het hoornvlies door alkaliverbranding

Dit protocol beschrijft een methode om een nauwkeurig en reproduceerbaar hoornvlies- en limbaal alkalisch letsel te induceren in een muismodel. Het protocol is voordelig omdat het een gelijkmatig verdeelde verwonding van het sterk gekromde hoornvlies en de limbus van de muis mogelijk maakt.

Inductie van hoornvlies- en limbale alkalische letsels met behulp van een punch-trephine-techniek in een muismodel

Het muismodel voor nier-ischemie-reperfusie-letsel dat hier wordt beschreven, bestaat uit een rechter nierectomie die controleweefsel biedt en het klemmen van de linker niersteel om ischemie te induceren, wat resulteert in acute nierbeschadiging. Dit model maakt gebruik van een midline laparotomie-aanpak met alle stappen die via één incisie worden uitgevoerd.

Renale ischemie reperfusie schade: een muismodel van letsel en Regeneratie

Hier presenteren we het protocol voor laser-geïnduceerde choroïdale neovascularisatie (CNV) bij muizen, een experimenteel model dat de vasculaire kenmerken van neovasculaire leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD) nastreeft. Eenmaal onder de knie, kan het op betrouwbare en effectieve wijze CNV induceren als modelsysteem om verschillende experimentele maatregelen te testen.

Een muismodel voor Laser-geïnduceerde Choroïdale Neovascularisatie

Atleten absorberen jaarlijks enkele honderden milde traumatische hersenletsels (mTBI) / hersenschudden; Het gevolg van deze op de hersenen is echter slecht begrepen. Daarom, een diermodel van enkelvoudige en herhalende mTBI die consequent repliceren klinisch relevante symptomen, biedt de middelen om de studie van mTBI en hersenschudding te bevorderen.

Een muismodel van een- en herhalende milde traumatische hersenbeschadiging

Iris neovascularization, een gemeenschappelijke complicatie van ischemische retinale ziekte, kan leiden tot zicht-bedreigende neovascular glaucoom. Hier beschrijven we een lymfkliertest protocol voor experimentele iris neovascularization die kan worden gebruikt voor noninvasive evaluatie van angiogenese-modulerende stoffen induceren.

Punctie-geïnduceerde Iris Neovascularization als een muismodel van Rubeosis Iridis

De draad myograph techniek wordt gebruikt om vasculaire vlotte spier functies en de scherm nieuwe drugs te onderzoeken. Wij rapporteren een gedetailleerd protocol voor het meten van de isometrische contractility van de muis mesenterische slagader en voor het screenen van de nieuwe skeletspierrelaxantia van vasculaire glad spierweefsel.

Isometrische Contractility meting van de muis mesenterische slagader met behulp van draad Myography

Deze studie introduceert een protocol voor het meten van de microcirculatie in menselijke mondelinge mucosa tegen laser spikkel contrast denkbaar. Het toezicht op wondgenezing na vestibuloplasty gecombineerd met een prothese xenogene collageen wordt gepresenteerd op een klinisch geval.

Een nieuwe benadering voor het toezicht op Graft Neovascularization in de menselijke tandvlees

Leer een alkali-brandwondenmodel van cornea-neovascularisatie bij muizen met natriumhydroxide-inductie en anti-angiogene therapie. Deze methode kwantificeert neovascularisatie en ontsteking voor nieuwe behandelingen tegen corneablindheid.

Een alkali-brandwonden Model van Cornea Neovascularisatie in de muis

Meer video's verkennen