Name: פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-07T15:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: חקור טיפול נוגד-אנגיוגנזה בדגם עכבר לנאווסקולריזציה של הקרנית באמצעות פגיעת כוויית אלקלי מבוקרת. שיטה זו מאפשרת הערכת תרופות חדשות לטיפול בעיוורון קרניתי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו אסירי תודה על עזרתו של ד&quot;ר Xinyu לי בהכנת כתב היד. SW נתמכה על ידי קרן הזנק מאוניברסיטת טוליין, המועצה למחקר החדש פרס חוקרו של הנשיא ממרכז UT Southwestern Medical, NIH גרנט EY021862, הפרס פיתוח קריירה מהמחקר למניעת קרן עיוורון, ופרס מואר פוקוס במחקר מקולרי הקשור לגיל ניוון .

הערה: הפרוטוקול הבא ותוצאות נציג להשתמש במעכבי HDAC סח&quot;ה כתרכובת ירושלים. עם זאת, פרוטוקול זה הוא בשום אופן לא מוגבל לשימוש של סאהה, והוא מומלץ כשיטת כללית כדי לבחון את ההשפעה של תרכובות מסיסים בneovascularization קרנית. שינויים קלים יצטרכו להתבצע למידת הדילול כמו גם תדירות ומשך זמן של יישום. בנוסף, תרכובות כי הם בקלות מסיסה במים יוכלו להינתן בהעדר DMSO. הצהרה אתית: יש לבצע את כל הניסויים בבעלי החיים רק בציות לחוק הלאומי ותקנות מוסדיות. פרוטוקול זה אושר לשימוש על ידי אוניברסיטת טוליין מוסדית טיפול בבעלי חיים ועדת שימוש. 1. הכנת החומרים (לפי סדר שימוש) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכי פיסת נייר תאית מסנן (11 מיקרומטר) לתוך 2 עיגולי מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון M 1 של NaOH ידיהמסת 20 גרם של NaOH ב500 מיליליטר H 2 O. מזוקק לאחסן בטמפרטורת חדר. זהירות: פתרונות NaOH הם מאכל ויכולים לגרום לכוויות אלקלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן קוקטייל הרדמה על ידי דילול 10 מיליליטר של 100 מ&quot;ג / מיליליטר קטמין ו2.5 מיליליטר של 20 מ&quot;ג / מיליליטר בxylazine 37.5 מיליליטר של 1x PBS לריכוז סופי של 20 מ&quot;ג / מיליליטר קטמין ו -4 מ&quot;ג / מיליליטר xylazine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 0.5% מhydrochloride proparacaine (לשיכוך כאבים אקטואליים) על ידי המסת 500 מ&quot;ג hydrochloride proparacaine בשל PBS המסונן 100 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן PBS 1x ידי המסת 8 גרם NaCl, 0.2 גרם של KCl, 1.44 גרם Na 2 HPO 4, ו0.23 גרם לאא 2 PO 4 ב900 מיליליטר של מזוקקי H 2 O. התאם ל7.4-pH. תביא את הפתרון לנפח סופי של 1,000 מיליליטר עם מזוקקי H 2 O וסינון על מנת להבטיח סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרונות מניות 1,000 x של סח&quot;ה ב ~ 100 מ&quot;מ בsulfoxide דימתיל (DMSO) על ידי המסת 26.4 מ&quot;ג סח&quot;ה ב 1 מיליליטר של DMSO. מדולל ל1x (~ 10 מיקרומטר)פתרון ב-PBS המסונן לכל שימוש. אחסן את פתרון המניות ב -20 ° C עד חודש אחד. זהירות: DMSO הוא רעלן וmutagen ידועים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 4% מparaformaldehyde (PFA) לקיבעון. מתחת למכסת מנוע כימי, לפזר 4 גרם של PFA ב90 מיליליטר של PBS. להביא את התערובת ל65 מעלות צלזיוס ולכייל לpH של 7.4. ברגע שPFA נמס, להביא את הפתרון לנפח סופי של 100 מיליליטר. חנות ב 4 מעלות צלזיוס למשך עד חודש. זהירות: PFA הוא ידוע להיות אלרגניים, מסרטנים, ורעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מאגר חסימת 1x ידי דילול 5 מיליליטר של סרום עז ו500 ul של טריטון X-100 ל94.5 מיליליטר של PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן כביסה חיץ 1x ידי דילול 500 ul של טריטון X-100 ל99.5 מיליליטר של PBS. </li></ol> 2. אלקלי לשרוף טיפול פציעה ומתחם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים חתיכה עגולה של נייר סינון, ~ 2 מ&quot;מ בקוטר, בתמיסה של 1 M NaOH. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם זריקה של 100 מ&quot;ג / קילוגרם קטמין ו5 מ&quot;ג / קילוגרם xylazine, WHich הוא ~ של קוקטייל ההרדמה 100 μl מצעד 1.3 ל25 עכבר גרם. הרדמה צריכה לקחת ~ דקות 1-2 להגדיר פנימה עומק של הרדמה עשוי להיקבע על ידי בעדינות צובט את הבוהן או זנב של החיה, אם ההרדמה היא מספיק לא צריכה להיות שום תגובה. הערה: יש להקפיד על מנת להבטיח את העכבר לא להיכנע להיפותרמיה הנגרמת על הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הטפטפת, מריחה יחול ירידה של .0.5% hydrochloride proparacaine אל פני השטח של הקרנית לשיכוך כאבים מקומיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים סטריליות, להרים פיסת נייר סינון NaOH ספוג. אם אתה מבחין NaOH העודף נצמד לאו נוטף מנייר הסינון, לחץ לחיצה קצרה על נייר הסינון הספוג בפיסת נייר סינון יבשה כדי לספוג את העודף. מניחים את פיסת נייר סינון NaOH ספוג על הקרנית המרכזית. תשאיר את זה במשך 30 שניות כדי ליצור אלקלי צריבה חריפה של ~ 2 x 2 מ&quot;מ 2 באזור. מיקרוסקופ ניתוחי מועיל בהצבת נייר הסינון כראוי. הערה: רק עין אחת של של העכברhould להיפגע עם האחר משמש כבקרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את נייר הסינון. באמצעות מזרק 10 מיליליטר, בעדינות לשטוף את העין עם 10 מיליליטר של 1x PBS פעמיים כדי לשטוף שיורי M NaOH 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד תחול ירידה של פתרון 1x סח&quot;ה עובד (או שליטה ברכב בהיקף של PBS בדילול DMSO המכיל לא סח&quot;ה) למריחה לקרנית. חזור 3x/day בקשה ל14 ימים. הערה: בתקופה זו משחה אנטיביוטית מקומית אינה מומלצת מכיוון שהוא עלול להפריע להתפתחות של הפגיעה והמסירה של המתחם. השתמש בתמיסה נוזלית לאנטיביוטיקה, כגון 3% פתרון גנטמיצין, במקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך ישיר להערכה קלינית (פרוטוקול 3 להלן) או להקריב את העכבר וenucleate העיניים להר שטוח של קרנית (4 פרוטוקול להלן) או פרפין / היסטולוגיה הקפואה קונבנציונלית. </li></ol> 3. הערכה קלינית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע בדיקה יומית של העכברים בצורה עיוורה תחת מיקרוסקופ ניתוחי ולהבקיע גorneal NV מבוסס על אטימות של קרנית, NV, וגודל כלי. השתמש לפחות שני משקיפים ולהקליט את ציון סופי שהוא הממוצע של שתיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון אטימות של קרנית בסולם של 0-4. 0 = ברור לחלוטין; 1 = מעט מעורפלת, קשתית ואישון עין בקלות; 2 = מעט אטומה, קשתית ואישון עדיין לזיהוי; 3 = אטומים, תלמידים כמעט לא מורגש; ו4 = לגמרי אטום ללא מבט של התלמיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון NV בסולם של 0-3. 0 = אין neovessels; 1 = neovessels בימבוס הקרנית; 2 = neovessels פורש ימבוס הקרנית ומתקרבת למרכז קרני; 3 = neovessels פורש המרכז קרני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון גודל כלי דם בסולם של 0-3. 0 = אין neovessels; 1 = neovessels לזיהוי תחת מיקרוסקופ הניתוחי; 2 = neovessels לראות בקלות תחת מיקרוסקופ הניתוחי; 3 = neovessels לראות בקלות בלי מיקרוסקופ. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במצלמה דיגיטלית, קחו את תמונות נציג של העין ב7 ימים ו14 ימים. </li></ol> 4.הכתמה קרנית וMounts שטוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את העין enucleated PFA 4% במשך שעה לפחות 1 ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העין ל1X PBS ולהשתמש במלקחיים כדי להסיר את הרקמה עודפת בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מיקרוסקופ ניתוחי, להשתמש במחט (18 מד) או מיקרו סכין כדי לנקב את אזור pericorneal של העין (שים לב: זה צריך לשחרר את הנוזלים מהעין). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מהניקוב נעשה בסעיף 4.3.1 להשתמש במספריים כירורגית לחתוך את החלק הקדמי של העין (קרנית) מהחלק האחורי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הקרנית חזרה לPFA 4% לקיבעון לילה בשעה 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את PFA 4% (זהירות: PFA הוא מסוכן וחייב להיות מסולק בהתאם לתקנות מוסדיות) ולשטוף את הקרנית שלוש פעמים עם 1x PBS להסיר כל PFA שיורית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה במאגר 1x חסימה לפחות 2 שעות בטמפרטורת חדר כדי permeabilize הרקמות ולמנוע ספציפי מחייב של הנוגדן הראשוני. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל נוגדן ראשוני בחיץ חסימת 1x, בדילול של פי 100-500. (לדוגמא: עכברוש אנטי עכבר PECAM-1 לאיתור כלי דם ב1:100, ארנב נגד עכבר LYVE-1 לאיתור כלי הלימפה ב1:500, ו / או anti-mouse-F4/80 חולדה לאיתור מקרופאגים ב1:100). דגירה על 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף שש פעמים עם חיץ הכביסה 1x עבור שעה 1 בכל פעם בטמפרטורת חדר כדי להסיר נוגדן ראשוני מאוגד באופן מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משני נוגדנים ב1x חיץ החסימה בדילול של פי 500-1,000. (למשל ניאון 488 ננומטר מתויג העז אנטי עכברוש IgG ב1:800 או ניאון 594 ננומטר מתויג העז נגד הארנב IgG-ב1:800). דגירה על 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף שלוש פעמים עם 1X PBS עבור שעה 1 כל אחד בטמפרטורת חדר כדי להסיר משני נוגדנים מאוגדים באופן מלא. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את הקרנית לטרי 1x PBS, ובעזרת מיקרוסקופ ניתוחי, לעשות ארבעה חתכים בזהירות מפריפריה לכיוון אגורהאה. זה צריך לחלק את הקרנית לארבעה רבעים של גודל שווה בערך (צורה וכתוצאה מכך צריכה להיראות ולא כמו פרפר) ולאפשר לו לשכב על שקופיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר עם הרכבה בינונית מתאים לדימות פלואורסצנטי. לקבלת התוצאות הטובות ביותר, צריכים להיות צילמו דגימות באופן מיידי ותצלומים דיגיטליים שצולמו, אך הוא עשוי להיות מאוחסן במשך מספר שבועות המוגנים מפני אור ב 4 ° C. </li></ol>

<ol><li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+visual+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li>
<li>Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Blindness%3A+A+Global+Perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+World+Health+Org%22%5BJournal%5D)">Corneal Blindness: A Global Perspective.</a> Bull. World Health Org. 79 (3), 214-221 (2003).</li>
<li>Gupta, D., Illingworth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatments+for+corneal+neovascularization%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Treatments for corneal neovascularization: a review.</a> Cornea. 30 (8), 927-938 (2011).</li>
<li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+statement+on+indications+for+anti-angiogenic+therapy+in+the+management+of+corneal+diseases+associated+with+neovascularisation%3A+outcome+of+an+expert+roundtable%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Consensus statement on indications for anti-angiogenic therapy in the management of corneal diseases associated with neovascularisation: outcome of an expert roundtable.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (1), 3-9 (2012).</li>
<li>Delmonte, D., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+Physiology+of+the+Cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cataract+Refract.+Surg%22%5BJournal%5D)">Anatomy and Physiology of the Cornea.</a> J. Cataract Refract. Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li>
<li>Cursiefen, C., Seitz, B., Dana, M. R., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+and+lymphangiogenesis+in+the+cornea.+Pathogenesis%2C+clinical+implications+and+treatment+options%5BTitle%5D)+AND+%22Der+Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis and lymphangiogenesis in the cornea. Pathogenesis, clinical implications and treatment options.</a> Der Ophthalmologe. 100 (4), 292-229 (2003).</li>
<li>Chang, J., Gabison, E., Kato, T., Azar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Corneal Neovascularization.</a> Curr. Opin Ophthalmol. 12 (4), 242-249 (2001).</li>
<li>Ambati, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Avascularity+is+due+to+Soluble+VEGF+Receptor-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Corneal Avascularity is due to Soluble VEGF Receptor-1.</a> Nature. 443 (7114), 993-997 (2006).</li>
<li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-A+Stimulates+Lymphangiogenesis+and+Hemangiogenesis+in+Inflammatory+Neovascularization+via+Macrophage+Recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">VEGF-A Stimulates Lymphangiogenesis and Hemangiogenesis in Inflammatory Neovascularization via Macrophage Recruitment.</a> J. Clin. Invest. 113 (7), 1040-1050 (2004).</li>
<li>Jiri, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paper+Strips+and+Rings+as+Simple+Tools+for+Standardization+of+Experimental+Eye+Injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthal.+Res%22%5BJournal%5D)">Paper Strips and Rings as Simple Tools for Standardization of Experimental Eye Injuries.</a> Ophthal. Res. 1975 (7), 363-367 (2009).</li>
<li>Ormerod, L., Abelson, M., Kenyon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+Models+of+Corneal+Injury+Using+Alkali-Immersed+Filter+Discs+Invest%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Standard Models of Corneal Injury Using Alkali-Immersed Filter Discs Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 30 (10), 2148-2153 (1989).</li>
<li>Saika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+effects+of+adenoviral+gene+transfer+of+bone+morphogenic+protein-7+on+a+corneal+alkali+injury+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">Therapeutic effects of adenoviral gene transfer of bone morphogenic protein-7 on a corneal alkali injury model in mice.</a> Lab. Invest. 85 (4), 474-486 (2005).</li>
<li>Ferrari, G., Bignami, F., Giacomini, C., Franchini, S., Rama, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+topical+infliximab+in+a+mouse+model+of+ocular+surface+scarring%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of topical infliximab in a mouse model of ocular surface scarring.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (3), 1680-1688 (2013).</li>
<li>Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymosin-beta4+modulates+corneal+matrix+metalloproteinase+levels+and+polymorphonuclear+cell+infiltration+after+alkali+injury.Invest%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 46 (7), 2388-2395 (2005).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Multiple+Pathogenic+Pathways+by+Histone+Deacetylase+Inhibitor+SAHA+in+a+Corneal+Alkali-Burn+Injury+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model.</a> Mol. Pharm. 10 (1), 307-318 (2013).</li>
<li>Yoeruek, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety%2C+penetration+and+efficacy+of+topically+applied+bevacizumab%3A+evaluation+of+eyedrops+in+corneal+neovascularization+after+chemical+burn%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Safety, penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn.</a> Acta Ophthalmol. 86 (3), 322-328 (2008).</li>
<li>Bucher, F., Parthasarathy, A., Bergua, A., Onderka, J., Regenfuß, B., Cursiefen, C., Bock, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+Ranibizumab+inhibits+inflammatory+corneal+hem-+and+lymphangiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Topical Ranibizumab inhibits inflammatory corneal hem- and lymphangiogenesis.</a> Acta Ophthalmol. , (2012).</li>
<li>Hajrasouliha, A., Sadrai, Z., Chauhan, S., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((b-FGF+induces+corneal+blood+and+lymphatic+vessel+growth+in+a+spatially+distinct+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">b-FGF induces corneal blood and lymphatic vessel growth in a spatially distinct pattern.</a> Cornea. 31 (7), 804-809 (2012).</li>
<li>Rogers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+albino+mutation+of+tyrosinase+alters+ocular+angiogenic+responsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The albino mutation of tyrosinase alters ocular angiogenic responsiveness.</a> Angiogenesis. 16 (3), 639-646 (2013).</li>
<li>Connor, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse%3A+a+model+of+vessel+loss%2C+vessel+regrowth+and+pathological%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological.</a> Nat. Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li>
</ol>

יש המחברים אין לחשוף.

הפרוטוקול המובא כאן תוצאות ברמות שחזור של hemangiogenesis, lymphangiogenesis, ודלקת, מה שהופך את מערכת אידיאלית ללמוד שלושת התהליכים הללו (קשורים). בעוד ששיטה זו מייצרת NV קרנית מרכזי, מספר שיטות שפותחו כדי לגרום NV יותר מכוון, כלומר תפירה של הקרנית 17 ומושתלות צמיחת פקטור המבטא כדורים 18, יכול להיות גם של עניין. הפרוטוקול שלנו מיועד לשימוש בעכבר הבוגר, מתן קל לשימוש במודל חיה בעת גם מאפשר מעבדה כדי לנצל את מלוא יתרונות של מגוון רחב של טכניקות מולקולריות ומהו...

עיוורון של קרנית הוא הסיבה הרביעית הנפוצה ביותר של עיוורון, אחראית לכ -4% מכל מקרי 1. neovascularization קרנית (NV) משחק תפקיד משמעותי בהרבה של מחלות אלו, כוללים קרנית herpetic (הסיבה זיהומית המובילה לעיוורון בעולם המערבי) וגרענתי (הסיבה המובילה לעיוורון בעולם זיהומיות) 2. טיפולים שוטפים כוללים סטרואידים, תרופות נוגדות דלקת לא סטרואידיות (NSAIDs), טיפולים אנטי VEGF, וציקלוספורין, כמו גם טכניקות כירורגיות קונבנציונליות או לייזר 3. עם זאת, האופי קשה מתיש של פתולוגיות NV מבוסס הקרנית, המחסור במתקנים כירורגית מסוגלים לטפל NV בקרנית, וחוסר אפשרות תרופתית חזק ביצוע הוביל שולחן עגול מומחה האחרון למסקנה כי, למרות הטיפולים הקיימים, הצורך הרפואי המהותי שהוצג על ידי פתולוגיות אלה נותר ללא מענה 4. הקרנית האנושיתמורכב 5 שכבות, 3 שכבות סלולריות (אפיתל, סטרומה ואנדותל) וממשק 2 (קרום באומן וקרום Descemet). הוא מתפקד כמחסום מכאני ופני שטח שבירה לעין. הטבע השקוף שלה הוא התוצאה של איזון עדין של מרכיביו, והוא חלק בלתי נפרד מהתפקוד הנכון שלה 5. בדרך כלל avascular, הקרנית מקבלת דם מmicrovessels רץ לאורך הקצה החיצוני שלה, אשר מוזנים מהריסים ועורקי עיניים. קרנית NV מתרחש כאשר גירוי מקדם אנגיוגנזה של הכלים האלה מאפשר להם לצמוח לכיוון המרכז של הקרנית ובכך להגביל את הראייה 6. אנגיוגנזה בקרנית כוללת hemangiogenesis וlymphangiogenesis, אשר תוצאת ingrowth של כלי דם וכלי הלימפה מארקייד כלי דם limbal לכיוון המרכז של הקרנית. זה מוביל להתמוטטות של &quot;זכות angiogenic&quot; קרנית, גידול באטימות וסיסטיק קרנית, שיבוש לה קרניyers, ובצקת 7. הגורמים המדויקים של NV בקרנית הם רבים, החל מתגובה למחלה זיהומית כגון גרענת למצב כימי שגרם גרמו לתרופות מסורתיות, כימיקלים תעשייתיים, או חומרי לחימה כימיים אפילו. המנגנונים המולקולריים של תהליך זה אינם, עדיין, מאופיין במלואו; עם זאת, כמה שחקני מפתח זוהו. בתנאים רגילים הקרנית בעל &quot;זכות angiogenic&quot; ייחודית ומתוחזק על ידי מערך יתיר של גורמים אנטי angiogenic (כגון VEGF-R1 מסיס) 8. עם זאת, בתגובה לגירוי חיצוני (כגון פציעה), יהיה גברת ביטוי מקומית של גורמים פרו angiogenic (למשל VEGF-A). טיפים זה האיזון של גורמים פרו ואנטי angiogenic שבבסיס זכות angiogenic של הקרנית, ומוביל לhemangiogenesis, lymphangeogenesis, ודלקת, ולכן גורם לפתולוגיה בקרנית ואפילו עיוורון 9. &lt;כיתת p = &quot;jove_content&quot;&gt; בהתחשב בצורך הרפואי קיים לפתולוגיה המתישה מאוד, יש בו עניין לשדה יש ​​מודל חיה אמין של NV בקרנית. כאן אנו מציגים מודל כזה: פציעת אלקלי כווייה מבוקרת. מודלים עין פציעה שונים המבוססים על שימוש בטבעות נייר סינון שימשו מאז 1970s 10. ב1989, קבוצה של רופאי עיניים בית הספר לרפואה של הרווארד מאופיין מודל סטנדרטי של פציעת אלקלי כווייה בקרנית מרכזית בארנב המבוסס על השריית פיסת נייר סינון עגול עם נתרן הידרוקסידי (NaOH) וליישם אותו לקרנית בטווח מסוים של ריכוזים 11. מאז, טכניקה זו הותאמה לשימוש ב12-14 העכבר. לאחרונה, המעבדה וואנג חקרה את ההשפעות הטיפוליות של deacetylase היסטון (HDAC) מעכב סח&quot;ה בפתוגנזה של NV בקרנית תוך שימוש במודל עכבר של קרנית אלקלי לשרוף פציעה 15. המתודולוגיה של מודל עכבר קרנית אלקלי לשרוף פציעה שהוצג כאן נבנתהבעיקר על עבודתו המוקדמת של שני עיתונים אחרים 14,16.

<table><tbody><tr><td>1 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>18 גרם מחט</td><td>BD</td><td>305918</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>306575</td><td></td></tr><tr><td>25 גרם מחט</td><td>BD</td><td>305916</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-F4/80 (נגד עכבר)</td> <td>Abd Serotech</td><td>MCA497RT</td><td></td></tr><tr><td>Anti-LYVE-1 (ארנב נגד עכבר)</td><td>Abcam</td><td>ab14917</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PECAM-1 (נגד עכבר)</td> <td>BD</td><td>553370</td><td></td></tr><tr><td>Anti-IgG Alexa 488 (עז נגד חולדות)</td><td>Invitrogen</td><td>A11006</td><td></td></tr><tr><td>Anti-IgG Alexa 594 (עז נגד ארנב)</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td></td></tr><tr><td>מצלמה</td><td>Tucsen</td><td>TCC 5.0 ICE</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips</td><td>פישר</td><td>12-548-B</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D4540-1L</td><td>זהירות: מלקחיים מוטגניים, רעילים</td></tr><tr><td>(קהים), איריס</td><td>WPI</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים (חדים), Dumont #4</td><td>WPI</td><td>500340</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת קטמין</td><td>MedVet</td><td>RXKETAMINE</td><td>חומר מבוקר, נדרש רישיון מתאים לשימוש.</td></tr><tr><td>מקור אור למיקרוסקופ</td><td></td><td>AmScope LED-14M-YA</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ (סטריאו 7X-45X)</td> <td>AmScope</td><td>SM-1B</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הרכבה, VECTASHIELD</td><td>וקטור</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td></td><td>Fisher S271-10</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Fisher</td><td>S397-500</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>פישר</td><td>S318-1</td><td>זהירות:</td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td></td> מאכל <td>P6148-500G</td><td>זהירות: אלרגני, מסרטן, רעיל</td></tr><tr><td>פרופרקאין הידרוכלוריד</td><td>Sigma</td><td>P4554-1G</td><td></td></tr><tr><td>מספריים (להב 5 מ"מ), Vanas</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>סרום עיזים</td><td>MPBio</td><td>92939249</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שקופיות</td><td>פישר</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Grade 1 נייר סינון</td><td>Whatman</td><td>1001-6508</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת קסילזין</td><td>MedVet</td><td>RXANASED-20</td><td></td></tr></tbody></table>

פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

בתנאים רגילים, הקרנית היא avascular, והשקיפות הזאת היא חיונית לשמירה על חדות ראייה טובה. Neovascularization (NV) של הקרנית, אשר יכול להיגרם על ידי טראומה, keratoplasty או מחלות זיהומיות, מפרק את &#39;זכות angiogenic&#39; מה שנקרא של הקרנית ומהווה את הבסיס של פתולוגיות חזותיות מרובות שאף עלול להוביל לעיוורון. למרות שיש כמה אפשרויות טיפול זמינות, הצורך הרפואי המהותי שהוצג על ידי פתולוגיות neovascular קרנית נותר לא מסופק. על מנת לפתח טיפולים בטוחים, יעילים, וממוקד, נדרש מודל אמין של NV בקרנית והתערבות תרופתית. כאן, אנו מתארים מודל neovascularization קרנית פציעת אלקלי כווייה בעכבר. פרוטוקול זה מספק שיטה ליישום של פציעת אלקלי כווייה מבוקרת לקרנית, המנהלה של מתחם תרופתי של ריבית, ויזואליזציה של התוצאה. שיטה זו יכולה להוכיח instrumenטל לחקר המנגנונים וההזדמנויות להתערבות בNV בקרנית והפרעות neovascular אחרות.

לאחר פציעת אלקלי צריבה, NV הקרנית מתרחש באופן צפוי, תלוי זמן. איור 1 מדגים את ההבדל הבולט הן בneovascularization ואטימות של קרנית בין בעלי חיים שלא טופלו (איור 1 א) ושל בעלי חיים שטופלו במעכבי HDAC סח&quot;ה (איור 1 ב ) בנקודת הזמן של 7 ימים. 2A הדמויות ו2B להפגין הר שטוח של קרנית של העין ביקורת שלא טופלה עם מכתים עיקרי PECAM-1 וLYVE-1 והמשני אלק...

Neovascularization (NV) של הקרנית יכול לסבך פתולוגיות חזותיות מרובות. ניצול מודל פציעה מבוקרת, אלקלי צריבה, רמת כימות של NV בקרנית יכולה להיות מיוצרת למחקר מכניסטית של NV והערכה של קרנית של טיפולי פוטנציאל להפרעות neovascular.

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

המטרה הכללית של הניסוי היא לבחון את ההשפעה של טיפול אנטי-אנגיוגני במודל עכברי של נאו-וסקולריזציה קרנאלית (צמיחת כלי דם חדשים בקרנית). מטרה זו מושגת על ידי יישום קצר של תמיסת נתרן הידרוקסיד בריכוז 1M לעין העכבר כדי להשרות רמה מבוקרת של נאו-וסקולריזציה קרנאלית. כשלב שני, ניתן התרכובת האנטי-אנגיוגנית מדי יום, אשר מעכבת את צמיחתם של כלי דם חדשים אל תוך הקרנית הפגועה.בשלב הבא, העכבר מושמד (euthanized), והעין הפגועה נאספת, מנוסחת ועוברת צביעה אימונוהיסטוכימית. על מנת לכמת את רמת הנאובסקולריזציה (יצירת כלי דם חדשים) והדלקת, התוצאות מראות הפחתה מדידה בנאובסקולריזציה בהתבסס הן על תצפית קלינית והן על צביעה אימונוהיסטוכימית. ההשלכות של טכניקה זו פונות לעבר טיפולים חדשים לעיוורון קרניתי, כיוון שהיא מספקת רמה ניתנת לשחזור של נאובסקולריזציה שביחס אליה ניתן לבחון תרכובות וטיפולים חדשים.לפיכך, שיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי נאווסקולריזציה פתולוגית של קרנית העין. ניתן להשתמש בה גם כמודל לחקר מנגנוני האנגיוגנזה ודלקת באופן כללי. הדגמת הפרוצדורה תבוא כפוסטר במעבדתי כדי להתכונן לפגיעת כוויות בסיס.התחילו בהשריית פיסת נייר סינון עגולה, בקוטר של כשני מילימטרים, בתמיסה של sodium hydroxide בריכוז one molar. לאחר מכן, הרדימו עכבר באמצעות הזרקה של 100 milligrams per kilogram ketamine ו-5 milligrams per kilog

an-alkali-burn-injury-model-of-corneal-neovascularization-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פרוטוקול זה מתאר שיטה כדי לגרום של שחיקה השטח עינית של העכבר, בצע את לאחר מכן תהליך ריפוי הפצע. הפרוטוקול מנצל burr עינית חלקית להסרת האפיתל פני השטח של העין בעכברים מרדימים.

אפיתל שחיקה הקרנית עם עינית Burr כמודל עבור קרנית ריפוי פצעים

כאן, מודלים של בעלי חיים המבוססים על עכבר וארנב מפותחים עבור פגיעה מכנית וכימית של אפיתל הקרנית כדי לסנן טיפולים חדשים ואת המנגנון הבסיסי.

מודלים של בעלי חיים של Ex Vivo ו-In Vivo לפציעות מכניות וכימיות של אפיתל הקרנית

פרוטוקול זה מתמקד בניאו-וסקולריזציה של הקרנית הנגרמת על ידי כוויות אלקליות בעכברים. השיטה מייצרת מודל למחלות קרנית הניתנות לשחזור ולשליטה כדי לחקור אנגיוגנזה פתולוגית ואת המנגנונים המולקולריים הקשורים ולבדוק סוכנים פרמקולוגיים חדשים למניעת ניאו-וסקולריזציה של הקרנית.

מודל עכבר לניאו-וסקולריזציה של הקרנית על ידי כוויה אלקלית

פרוטוקול זה מתאר שיטה לגרימת פגיעה אלקלית מדויקת וניתנת לשחזור בקרנית ובגפיים במודל עכבר. לפרוטוקול יש יתרון מכיוון שהוא מאפשר פגיעה מפוזרת באופן שווה בקרנית ובלימבוס של עכבר מעוקל מאוד.

השראת פציעה אלקלית בקרנית ובגפיים בטכניקת אגרוף-טרפין במודל עכבר

מודל העכבר של פגיעה חוזרת באיסכמיה כלייתית המתואר כאן מורכב מכריתת כליה ימנית המספקת רקמת בקרה והידוק של פדיקל הכליה השמאלי כדי לגרום לאיסכמיה הגורמת לפגיעה כלייתית חריפה. מודל זה משתמש בגישת לפרוטומיה בקו האמצע כאשר כל השלבים מבוצעים באמצעות חתך אחד.

כליות איסכמיה reperfusion פגיעה: במודל עכבר של הפגיעה והתחדשות

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול הניאו-וסקולריזציה הכורואידלית (CNV) המושרה על ידי לייזר עכבר, מודל ניסיוני המשחזר את סימני ההיכר של כלי הדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל ניאו-וסקולרי (AMD). לאחר שליטה, הוא יכול לגרום באופן אמין ויעיל ל-CNV כמערכת מודל לבדיקת אמצעים ניסיוניים שונים.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

הספורטאים סופגים כמה מאות פציעות מוחיות טראומטיות קלות (mTBI) / זעזוע מוח מדי שנה; עם זאת, את התוצאות של אלה על המוח הוא הבין היטב. לכן, מודל החיות של mTBI יחיד וחוזר על עצמו באופן עקבי משכפל סימפטומים קליניים רלוונטיים מספק את האמצעים לקדם את המחקר של mTBI ו זעזוע מוח.

דגם עכבר של פגיעה בודדת וחזרה קלה של פגיעה מוחית טראומטית

איריס כורוידאלית, סיבוך נפוץ של מחלת רשתית איסכמי, עלול להוביל סכנת הראייה neovascular גלאוקומה. כאן, אנו מתארים את פרוטוקול מאתר להשראת כורוידאלית איריס ניסיוני העשויות לשמש להערכה לא פולשנית של חומרים להתכוונן אנגיוגנזה.

ניקוב-Induced כורוידאלית איריס כמודל העכבר של Rubeosis Iridis

הטכניקה myograph החוט משמש כדי לחקור פונקציות השריר החלק בכלי הדם, תרופות חדשות מסך. אנחנו מדווחים על פרוטוקול מפורט עבור מודדים את contractility איזומטרי של עורק מצע המעי העליון העכבר, הקרנת מרפה החדש של השריר החלק בכלי הדם.

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

מחקר זה מציג את פרוטוקול למדידת microcirculation ב האוראלית האנושית על ידי לייזר חודרני לעומת זאת הדמיה. פיקוח על פצע ריפוי לאחר vestibuloplasty בשילוב עם השתלה קולגן xenogenic מוצג על מקרה קליני.

הגישה של הרומן ניטור שתל כורוידאלית ב Gingiva אנושי

חקור טיפול נוגד-אנגיוגנזה בדגם עכבר לנאווסקולריזציה של הקרנית באמצעות פגיעת כוויית אלקלי מבוקרת. שיטה זו מאפשרת הערכת תרופות חדשות לטיפול בעיוורון קרניתי.

פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר

גלה סרטונים נוספים