Name: Fare Kornea Neovaskülarizasyonunun bir Alkali-yanık Yaralanma Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-07T15:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Keşfedin fare kornea neovaskülarizasyonunun alkali yanık yaralanma modelinde anti-anjiyojenik tedavi etkilerini. Bu yöntem, kornea körlüğü için yeni tedaviler geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz yazının hazırlanmasında Dr Xinyu Li&#39;nin yardım için minnettarız. SW Tulane Üniversitesi, UT Güneybatı Tıp Merkezi, NIH Hibe EY021862, Körlük vakıf Engellenir Research bir kariyer geliştirme ödülü itibaren Başkanlık Araştırma Konseyi, Yeni Araştırmacı Ödülü, ve Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonu Araştırma Parlak Odak Ödülü bir başlangıç ​​fonu tarafından desteklenen .

Not: Aşağıdaki protokol ve sonuçlar temsili bir örneği, bir bileşik olarak HDAC inhibitörü SAHA kullanın. Bununla birlikte, bu protokol SAHA kullanımıyla hiçbir şekilde sınırlı değildir ve korneal neovaskularizasyon üzerindeki çözünür bileşiklerin etkisini test etmek için genel bir yöntem olarak tavsiye edilir. Küçük değişiklikler seyreltme derecesi hem de frekans ve uygulama süresi için yapılmış olması gerekir. Ek olarak, su içinde kolayca çözünür olan bileşikleri DMSO yokluğunda tatbik edilmesi mümkün olacaktır. Etik Açıklama: Tüm hayvan deneyleri sadece ulusal hukuk ve kurumsal düzenlemelere uygun olarak yapılmalıdır. Bu protokol, Tulane Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kullanım için onaylanmıştır. 1.. (Kullanım Düzeninde) Malzemelerin Hazırlanması <ol><li> 2 mm daire içine selüloz filtre kağıdı (11 mikron) bir parça kesin. </li><li> NaOH ile 1 M çözelti hazırlayın500 ml damıtılmış H2O içinde NaOH 20 g çözülmesi Oda sıcaklığında saklayın. DİKKAT: NaOH çözümleri aşındırıcı ve alkali-yanıklara neden olabilir. </li><li> Nihai 20 mg / ml ketamin konsantrasyonu ve 4 mg / ml ksilazin 1x PBS 37.5 ml 20 mg / ml ksilazin 10 ila 100 mg / ml ketamin ml ve 2,5 ml seyreltilmesi ile bir anestezi kokteyl hazırlayın. </li><li> Filtre PBS 100 ml proparakain hidroklorür 500 mg çözülmesiyle (lokal analjezi için) proparakain hidroklorür ile% 0.5 &#39;lik çözelti hazırlayın. </li><li> 8 g NaCl, 0.2 g KCI, 1.44 g 2 Na HPO 4 ve damıtılmış H2O içinde 900 ml NaH 2 PO 4, 0.23 g çözülerek 1x PBS hazırlayın 7.4 pH ayarlayın. Sterilite sağlamak için damıtılmış H2O ve filtre ile 1000 ml &#39;lik bir son hacim için çözüm getirmek. </li><li> DMSO içinde 1 ml SAHA 26.4 mg çözülmesiyle dimetil sülfoksit (DMSO) içinde ~ 100 mM&#39;de SAHA 1000 x stok çözelti hazırlayın. Bir 1x sulandırmak (~ 10 uM)her bir kullanım için, filtre PBS çözeltisi. Kadar bir ay boyunca -20 ° C de stok solüsyonu saklayın. DİKKAT: DMSO bilinen bir toksin ve mutajen olduğu. </li><li> Tespit için paraformaldehid (PFA) bir% 4 çözelti hazırlayın. Kimyasal bir başlık altında, PBS içinde 90 ml PFA 4 g çözülür. 65 ° C&#39;ye kadar karışımın getirin ve 7.4 arasında bir pH&#39;a titre edilir. PFA çözündükten sonra, 100 ml &#39;lik bir son hacim için bir çözüm getirir. Kadar bir ay boyunca 4 ° C&#39;de saklayın. DİKKAT: PFA bir, alerjik karsinojenik ve toksik olduğu bilinmektedir. </li><li> PBS içinde 94.5 ml keçi serumu içinde 5 ml ve Triton X-100&#39;ün 500 ul seyreltilmesi ile 1 x bloke edici tamponu hazırlayın. </li><li> PBS içinde 99.5 ml Triton X-100, 500 ul seyreltilmesi ile 1x yıkama tamponu hazırlayın. </li></ol> 2. Yaralanma ve Bileşik Tedavisi Alkali-Yanık <ol><li> 1 M NaOH çözeltisi içinde, çapı filtre kağıdı yuvarlak parça, yaklaşık 2 mm bekletin. </li><li> WH, 100 mg / kg ketamin ve 5 mg / kg ksilazin enjeksiyonu ile fare anestezisiich ~ 25 g fare başına aşama 1.3 anestezik kokteyl 100 ul. Anestezi anestezi yanıt olmalıdır yeterli ise, yavaşça hayvanın parmak veya kuyruğu kısma belirlenebilir ~ anestezi derinliği in ayarlamak için 1-2 dakika sürer. Not: Bakım fare anestezi kaynaklı hipotermi yenik değildir sağlamak için alınmalıdır. </li><li> Bir damlalık kullanarak, topikal lokal analjezi için kornea yüzeyinin 0.5% proparakain hidroklorür bir damla uygulanır. </li><li> Steril forseps kullanarak, NaOH ıslatılmış filtre kağıdı bir parça almak. Eğer aşırı NaOH tutunarak veya filtre kağıdı damlayan fark ederseniz, kısaca aşırı emmek için filtre kağıdı kuru bir parça üzerinde ıslatılmış filtre kağıdı dokunun. Merkezi kornea üzerinde NAOH ıslatılmış filtre kağıdı parçası koyun. Bölgede ~ 2 x 2, 2 mm arasında akut alkali-yanık oluşturmak için 30 saniye boyunca bekletin. Bir cerrahi mikroskop düzgün bir filtre kağıdı koyularak yararlıdır. Not: fare s Sadece bir gözünühould diğer bir kontrol olarak hizmet veren yaralanabilir. </li><li> Filtre kağıdı çıkarın. Bir 10 ml şırınga kullanarak, yumuşak kalıntı 1 M NaOH aşındırmak için iki kez 1 x 10 ml PBS ile göz yıkayın. </li><li> Hemen 1x SAHA hazır çözelti (ya da PBS içeren bir araç kontrol no SAHA içeren seyreltilmiş DMSO) topikal kornea bir damla uygulanır. 14 gün boyunca uygulama 3x/day tekrarlayın. Not: zedelenmesinin gelişiminde ve bileşiğin verilmesine bir müdahalede olabileceğinden bu dönemde bir lokal antibiyotik merhem tavsiye edilmez. Bir sıvı antibiyotik çözüm gibi% 3 Gentamisin çözüm yerine kullanın. </li><li> Klinik Değerlendirme (aşağıda Protokolü 3) doğrudan devam veya fare kurban ve (aşağıda Protokolü 4) ya da geleneksel parafin / dondurulmuş histoloji kornea düz montaj için gözleri tanıttılar. </li></ol> 3. Klinik Değerlendirme <ol><li> Cerrahi bir mikroskop altında bir kör şekilde farelerin günlük inceleme yapın ve c skororneal NV korneal opasite, NV ve damar boyutuna göre. En az iki gözlemci kullanmak ve iki ortalama bir skor kaydedebilirsiniz. <ol><li> 0-4 bir ölçekte kornea saydamlığını skor. 0 = tamamen açık; 1 = hafif puslu, iris ve öğrenci kolayca görülebilir; 2 = hafif opak, iris ve öğrenci hala saptanabilir; Zor saptanabilir 3 = opak, öğrenciler; ve öğrencinin hiçbir manzaralı tamamen opak 4 =. </li><li> 0-3 arasındaki bir ölçek üzerinde NV Skor. 0 = hayır neoveselleri; Korneal limbusta 1 = neoveselleri; Kornea limbus kapsayan ve kornea merkezine yaklaşırken 2 = neoveselleri; Kornea merkezi kapsayan 3 = neoveselleri. </li><li> 0-3 arasındaki bir ölçek üzerinde damar büyüklüğü Skor. 0 = hayır neoveselleri; Ameliyat mikroskobu altında tespit 1 = neoveselleri; Kolayca cerrahi mikroskop altında görülebilen 2 = neoveselleri; Kolayca mikroskop olmadan görülen 3 = neoveselleri. </li></ol></li><li> Bir dijital kamera kullanıyorsanız, 7 gün ve 14 gün gözün temsilcisi görüntü almak. </li></ol> 4.Kornea Boyama ve Düz Mounts <ol><li> 4 ° C&#39;de en az 1 saat süreyle% 4 PFA içinde enüklee göz saptamak </li><li> PBS 1x ve dikkatle aşırı doku çıkarmak için forseps kullanabilir göz aktarın. </li><li> Bir cerrahi mikroskop yardımı ile, (Bu göz sıvının serbest gereken dikkat edin) gözün pericorneal bölgesini delmek için bir iğne (18 ölçü) veya mikro bıçak kullanın. <ol><li> Bölüm 4.3.1 &#39;de yapılan delikli itibaren arka kısmından göz (kornea) ön kısmını kesmek için cerrahi bir makas kullanımı. </li></ol></li><li> 4 ° C&#39;de gece boyunca sabitlenmesi için geri% 4 PFA içine kornea aktarın </li><li> (: PFA tehlikeli ve kurumsal düzenlemelere uygun olarak bertaraf edilmelidir DİKKAT) ve kalan PFA çıkarmak için 1x PBS ile korneaya üç defa çalkalayın% 4 PFA atın. </li><li> Doku permeabilize ve birincil antikorun özel olmayan bağlanmasını önlemek üzere, oda sıcaklığında en az 2 saat boyunca 1 x bloke edici tamponu içinde inkübe. <ol><li> Bir 100-500 kat seyreltmede, 1 x bloke edici tampon maddesi içinde birincil antikor uygulayın. 1:100 kan damarlarının tespit etmek için (örneğin, sıçan anti-fare PECAM-1, tavşan anti-fare-LYVE-1 makrofajlar tespit etmek için 1:500 &#39;de lenf damarlarına tespit ve / veya fare için anti-mouse-F4/80 1:100). Gece boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> Tam Bağlanmamış birinci antikorları ayıklamak için oda sıcaklığında 1 saat boyunca 1 x Yıkama tamponu ile her altı kez yıkayın. </li><li> 1x bir 500-1000 kat seyreltmede bloke edici tampon içinde bir ikincil antikor uygulayın. (Örneğin, 488 nm floresan 1:800 at, keçi anti-fare-IgG&#39;si etiketli ya da 594 nm floresan 1:800 da keçi anti-tavşan-IgG&#39;si etiketli). Gece boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edilir. </li><li> Tam Bağlanmamış ikinci antikorları ayıklamak için oda sıcaklığında 1 saat için, her 1x PBS ile üç kez yıkanır. </li></ol></li><li> Taze 1x PBS içine aktarın ve kornea, bir cerrahi mikroskop yardımıyla, dikkatlice yüzde doğru çevresinden dört kesiler yapmaker. Bu (edilen şekil yerine bir kelebek gibi görünmelidir) yaklaşık olarak eşit büyüklükte dört parçaya bölünür kornea bölmek ve bir slayt düz yatmak için izin vermelidir. </li><li> Floresan görüntüleme için bir montaj orta uygun şekilde monte edilir. En iyi sonuçlar için, numuneler hemen görüntülü olmalıdır ve dijital fotoğraf alınmıştır, ancak, 4 ° C&#39;de ışıktan korunmuş olarak birkaç hafta boyunca depolanabilir </li></ol>

<ol><li>Pascolini, D., Mariotti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+visual+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Global estimates of visual impairment.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (5), 614-618 (2010).</li>
<li>Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Blindness%3A+A+Global+Perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+World+Health+Org%22%5BJournal%5D)">Corneal Blindness: A Global Perspective.</a> Bull. World Health Org. 79 (3), 214-221 (2003).</li>
<li>Gupta, D., Illingworth, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatments+for+corneal+neovascularization%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Treatments for corneal neovascularization: a review.</a> Cornea. 30 (8), 927-938 (2011).</li>
<li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+statement+on+indications+for+anti-angiogenic+therapy+in+the+management+of+corneal+diseases+associated+with+neovascularisation%3A+outcome+of+an+expert+roundtable%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Consensus statement on indications for anti-angiogenic therapy in the management of corneal diseases associated with neovascularisation: outcome of an expert roundtable.</a> Br. J. Ophthalmol. 96 (1), 3-9 (2012).</li>
<li>Delmonte, D., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+Physiology+of+the+Cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cataract+Refract.+Surg%22%5BJournal%5D)">Anatomy and Physiology of the Cornea.</a> J. Cataract Refract. Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li>
<li>Cursiefen, C., Seitz, B., Dana, M. R., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+and+lymphangiogenesis+in+the+cornea.+Pathogenesis%2C+clinical+implications+and+treatment+options%5BTitle%5D)+AND+%22Der+Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis and lymphangiogenesis in the cornea. Pathogenesis, clinical implications and treatment options.</a> Der Ophthalmologe. 100 (4), 292-229 (2003).</li>
<li>Chang, J., Gabison, E., Kato, T., Azar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Corneal Neovascularization.</a> Curr. Opin Ophthalmol. 12 (4), 242-249 (2001).</li>
<li>Ambati, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+Avascularity+is+due+to+Soluble+VEGF+Receptor-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Corneal Avascularity is due to Soluble VEGF Receptor-1.</a> Nature. 443 (7114), 993-997 (2006).</li>
<li>Cursiefen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-A+Stimulates+Lymphangiogenesis+and+Hemangiogenesis+in+Inflammatory+Neovascularization+via+Macrophage+Recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">VEGF-A Stimulates Lymphangiogenesis and Hemangiogenesis in Inflammatory Neovascularization via Macrophage Recruitment.</a> J. Clin. Invest. 113 (7), 1040-1050 (2004).</li>
<li>Jiri, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paper+Strips+and+Rings+as+Simple+Tools+for+Standardization+of+Experimental+Eye+Injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthal.+Res%22%5BJournal%5D)">Paper Strips and Rings as Simple Tools for Standardization of Experimental Eye Injuries.</a> Ophthal. Res. 1975 (7), 363-367 (2009).</li>
<li>Ormerod, L., Abelson, M., Kenyon, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+Models+of+Corneal+Injury+Using+Alkali-Immersed+Filter+Discs+Invest%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Standard Models of Corneal Injury Using Alkali-Immersed Filter Discs Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 30 (10), 2148-2153 (1989).</li>
<li>Saika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+effects+of+adenoviral+gene+transfer+of+bone+morphogenic+protein-7+on+a+corneal+alkali+injury+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">Therapeutic effects of adenoviral gene transfer of bone morphogenic protein-7 on a corneal alkali injury model in mice.</a> Lab. Invest. 85 (4), 474-486 (2005).</li>
<li>Ferrari, G., Bignami, F., Giacomini, C., Franchini, S., Rama, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+and+efficacy+of+topical+infliximab+in+a+mouse+model+of+ocular+surface+scarring%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Safety and efficacy of topical infliximab in a mouse model of ocular surface scarring.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54 (3), 1680-1688 (2013).</li>
<li>Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymosin-beta4+modulates+corneal+matrix+metalloproteinase+levels+and+polymorphonuclear+cell+infiltration+after+alkali+injury.Invest%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest.</a> Ophthalmol. Vis. Sci. 46 (7), 2388-2395 (2005).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Multiple+Pathogenic+Pathways+by+Histone+Deacetylase+Inhibitor+SAHA+in+a+Corneal+Alkali-Burn+Injury+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model.</a> Mol. Pharm. 10 (1), 307-318 (2013).</li>
<li>Yoeruek, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety%2C+penetration+and+efficacy+of+topically+applied+bevacizumab%3A+evaluation+of+eyedrops+in+corneal+neovascularization+after+chemical+burn%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Safety, penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn.</a> Acta Ophthalmol. 86 (3), 322-328 (2008).</li>
<li>Bucher, F., Parthasarathy, A., Bergua, A., Onderka, J., Regenfuß, B., Cursiefen, C., Bock, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+Ranibizumab+inhibits+inflammatory+corneal+hem-+and+lymphangiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Topical Ranibizumab inhibits inflammatory corneal hem- and lymphangiogenesis.</a> Acta Ophthalmol. , (2012).</li>
<li>Hajrasouliha, A., Sadrai, Z., Chauhan, S., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((b-FGF+induces+corneal+blood+and+lymphatic+vessel+growth+in+a+spatially+distinct+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">b-FGF induces corneal blood and lymphatic vessel growth in a spatially distinct pattern.</a> Cornea. 31 (7), 804-809 (2012).</li>
<li>Rogers, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+albino+mutation+of+tyrosinase+alters+ocular+angiogenic+responsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">The albino mutation of tyrosinase alters ocular angiogenic responsiveness.</a> Angiogenesis. 16 (3), 639-646 (2013).</li>
<li>Connor, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+oxygen-induced+retinopathy+in+the+mouse%3A+a+model+of+vessel+loss%2C+vessel+regrowth+and+pathological%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological.</a> Nat. Protoc. 4 (11), 1565-1573 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada sunulan protokol bu üç (birbiriyle) süreçleri incelemek için ideal bir sistem haline hemangiogenesis, lenfanjiyogenezin ve inflamasyon tekrarlanabilir seviyeleri ile sonuçlanır. Bu yöntem merkezi kornea NV, hapların 18 ifade büyüme faktörü korneanın 17 yani sütür daha yönetti NV, neden geliştirilmiş ve implante edilmiş çeşitli yöntemler üretirken, aynı zamanda ilgi çekici olabilir. Bizim protokol de büyük memeliler için henüz mevcut değil moleküler ve transgenik teknikleri bir dizi tam olara...

Kornea körlük tüm olgularda 1 yaklaşık 4% sorumlu körlüğün en yaygın dördüncü nedenidir. Kornea neovaskülarizasyon (NV) herpetik keratit (Batı&#39;da körlüğün en önde gelen nedenidir bulaşıcı) ve trahom (dünya çapında bulaşıcı körlüğün önde gelen nedenidir) 2 dahil olmak üzere bu patolojilerin, çok önemli bir rol oynar. Mevcut tedaviler steroidler, steroidal olmayan anti-enflamatuar ilaçlar (NSAID), anti-VEGF terapileri, A ve yanı sıra, geleneksel lazer ya da cerrahi teknikleri 3 siklosporin içerir. Ancak, kornea NV bazlı patolojilerin ciddi zayıflatıcı doğa, cerrahi kornea NV tedavi edebilen tesisleri ve güçlü bir performans farmakolojik seçeneği eksikliği yetersizliği, kaybolmamış tedavilere rağmen, temel tıbbi ihtiyacı olduğu sonucuna yeni bir uzman yuvarlak masa açtı Bu patolojilerde tarafından sunulan 4 karşılanmamış kalır. Insan kornea5 kat, 3 hücre tabakaları (epitelyal, stromal ve endotelyum) ve 2 arabirimi (Bowman ve zar Descemet) oluşur. Bu göz için mekanik bir engel ve refraktif yüzeyi olarak işlev görür. Onun şeffaf doğası onun bileşenlerinin hassas bir denge sonucudur ve doğru fonksiyon 5 ayrılmaz bir parçasıdır. Normal avasküler, kornea ve göz siliyer arterlerden beslenir dış kenarı boyunca uzanan kılcal kan alır. Bir uyarıcı onları kornea merkezine doğru büyür ve böylece görme 6 sınırlamak için izin Bu damarların anjiyojenezi teşvik zaman korneal NV oluşur. Kornea anjiyojenez kornea merkezine doğru limbal damar pasajı kan damarları ve lenf damarlarının büyümesinin neden olan hemangiogenesis ve lenfanjiyogenezin içerir. Bu kornea &quot;Anjiyojenik ayrıcalık&quot;, korneal opasite ve fibrozis bir artış, korneal la bozulması bozulmasına yol açarkuramsal ve ödem 7. Kornea NV&#39;nin kesin tetikler geleneksel ilaçlar, endüstriyel kimyasallar, hatta kimyasal savaş ajanları neden olduğu bulaşıcı hastalığa bir tepki böyle trahom gibi bir kimyasal kaynaklı durumuna kadar çoktur. Bu sürecin moleküler mekanizmalar, henüz tam olarak karakterize edici özelliği değildir; Ancak, birkaç anahtar oyuncular tespit edilmiştir. Normal koşullar altında, kornea (örneğin, çözünür VEGF-R1 gibi) anti-anjiyojenik faktörler 8 bir yedek dizisi tarafından tutulan bir benzersiz bir &#39;anjiyojenik ayrıcalık&#39; sahiptir. Bununla birlikte, (örneğin, bir yaralanma gibi) harici bir uyarana yanıt olarak, pro-anjiyojenik faktörler (VEGF-A) yerel bir yukarı-regülasyonu olacaktır. Bu ipuçları kornea Anjiyojenik ayrıcalığını yatan ve bu nedenle kornea patolojisi ve hatta körlüğe neden 9, hemangiogenesis, lymphangeogenesis ve inflamasyona neden olur yanlısı ve anti-anjiyogenik faktörlerin dengesi. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Bu son derece zayıflatıcı patolojinin karşılanmamış tıbbi ihtiyaçları göz önüne alındığında, bu kornea NV güvenilir bir hayvan modeli var alanına ilgi. Kontrollü alkali-yanık: İşte biz böyle bir model sunuyoruz. Filtre kağıdı yüzük kullanmaya dayalı çeşitli göz yaralanması modelleri 1970&#39;lerden 10 beri kullanılmaktadır. 1989 yılında, Harvard Medical School oftalmologların bir grup, sodyum hidroksit (NaOH) ile yuvarlak bir filtre kağıdı parçası ıslatma ve belirli bir aralığının en kornea uygulamadan göre tavşan merkezi bir korneal alkali yanığı hasarının bir standart model özelliği, konsantrasyonları 11. O zamandan beri, bu teknik, fare 12-14 kullanılmak üzere adapte edilmiştir. Son zamanlarda, Wang laboratuvar fare korneal alkali yanık yaralanma modeli 15 kullanılarak kornea NV patogenezinde histon deasetilaz (HDAC) inhibitörü SAHA terapötik etkilerini inceledi. Burada yer alan fare korneal alkali-yanık yaralanması modeli inşa edilmiş metodolojiEsas olarak iki diğer kağıtlar 14,16 önceden çalışmaları.

<table><tbody><tr><td>1 ml Şırınga</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>18 G İğne</td><td>BD</td><td>305918</td><td></td></tr><tr><td>10 ml Şırınga</td><td>BD</td><td>306575</td><td></td></tr><tr><td>25 G İğne</td><td>BD</td><td>305916</td><td></td></tr><tr><td>Anti-F4/80 (sıçan anti-fare)</td><td>AbD Serotech</td><td>MCA497RT</td><td></td></tr><tr><td>Anti-LYVE-1 (tavşan anti-fare)</td><td>Abcam</td><td>ab14917</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PECAM-1 (sıçan anti-fare)</td><td>BD</td><td>553370</td><td></td></tr><tr><td>Anti-IgG Alexa 488 (keçi anti-sıçan)</td><td>Invitrogen</td><td>A11006</td><td></td></tr><tr><td>Anti-IgG Alexa 594 (keçi anti-tavşan)</td><td>Invitrogen</td><td>A11012</td><td></td></tr><tr><td>Kamera</td><td>Tucsen</td><td>TCC 5.0 ICE</td><td></td></tr><tr><td>Lameller</td><td>Fisher</td><td>12-548-B</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D4540-1L</td><td>Dikkat: Mutajenik, Toksik</td></tr><tr><td>Forseps (Künt), Iris</td><td>WPI</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>Forseps (Keskin), Dumont #</td>4 <td>WPI</td><td>500340</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher</td><td>P217-500</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Çözeltisi MedVet</td><td>RXKETAMIN</td><td>Kontrollü madde, kullanım için uygun lisans gereklidir.</td></tr><tr><td>Mikroskop için Işık Kaynağı</td><td>AmScope</td><td>LED-14M-YA</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop (Stereo 7X-45X)</td><td>AmScope</td><td>SM-1B</td><td></td></tr><tr><td>Montaj Ortamı, VECTASHIELD</td><td>Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S271-10</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Fisher</td><td>S397-500</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Fisher</td><td>S318-1</td><td>Dikkat: Aşındırıcı</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td></td><td>P6148-500G</td><td>Dikkat: Alerjenik, Kanserojen, Toksik</td></tr><tr><td>Proparakain</td><td>Hidroklorür Sigma</td><td>P4554-1G</td><td></td></tr><tr><td>Makas (5 mm bıçak), Vanas</td><td>WPI</td><td>14003</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Serumu</td><td>MPBio</td><td>92939249</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Slaytları</td><td>Fisher</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Whatman Sınıf 1 Filtre Kağıdı</td><td>Whatman</td><td>1001-6508</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin Çözeltisi</td><td>MedVet</td><td>RXANASED-20</td><td></td></tr></tbody></table>

fare kornea neovaskülarizasyonunun bir alkali-yanık yaralanma modeli

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Normal koşullar altında, kornea avasküler, ve bu iyi bir şeffaflık görme keskinliği korumak için gereklidir. Travma, keratoplasti veya bulaşıcı hastalığa neden olabilir kornea, Neovaskülarizasyon (NV) korneanın sözde &#39;Anjiyojenik ayrıcalığı&#39; ayırır ve hatta körlüğe neden olabilir birden fazla görsel patolojilerin temelini oluşturur. Çeşitli tedavi seçenekleri olmasına rağmen, kornea neovasküler patolojilerin tarafından sunulan temel tıp ihtiyacı karşılanmamış kalır. Güvenli, etkili ve hedefli tedaviler geliştirmek amacıyla, kornea NV ve farmakolojik müdahale güvenilir bir model gereklidir. Burada, fare içinde bir alkali-yanık yaralanması korneal neovaskularizasyon modeli açıklar. Bu protokol, kornea, ilgi konusu bir farmakolojik bileşik uygulaması, ve sonuç görselleştirilmesi için kontrollü bir alkali-yanık uygulanması için bir metot sağlar. Bu yöntem instrumen olabilecektal kornea NV ve diğer neovasküler bozukluklarında müdahale mekanizmaları ve fırsatları eğitim için.

Alkali-yanık yaralanması sonrasında, kornea NV tahmin edilebilir, zamana bağlı bir şekilde oluşur. 1, bir muamele edilmemiş hayvan (Şekil 1A) ve HDAC inhibitörü SAHA (Şekil 1B ile tedavi edilmiş bir hayvan arasında yeni damarlanma ve kornea opasitesi hem de sade farkı gösterir Şekil ) 7 günlük bir zaman noktasında gerçekleştirilir. Şekiller 2A ve 2B, primer PECAM-1 ve LYVE-1 lekeleme ve ikin...

Korneanın neovaskülarizasyon (NV) çoklu görsel patolojileri karmaşık hale getirebilir. Kontrollü, alkali-yanık yaralanması modeli kullanılarak, korneal NV bir ölçülebilir düzeyde neovasküler hastalıkları için potansiyel tedavilerinin kornea NV ve değerlendirme mekanik çalışma için üretilebilir.

Fare Kornea Neovaskülarizasyonunun bir Alkali-yanık Yaralanma Modeli

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

Deneyin genel amacı, kornea neovaskülarizasyonu oluşturulmuş bir fare modelinde anti-anjiyojenik tedavinin etkisini gözlemlemektir. Bu işlem, kontrollü düzeyde kornea neovaskülarizasyonu indüklemek için fare gözüne kısa süreli bir molar sodyum hidroksit çözeltisi uygulanarak gerçekleştirilir. İkinci adım olarak, hasarlı korneaya yeni damarların büyümesini inhibe eden anti-anjiyojenik bileşik günlük olarak uygulanır.Ardından fare uyutulur ve hasarlı göz alınarak diseke edilir ve immün boyama yapılır. Neovaskülarizasyon ve inflamasyon düzeyini belirlemek için sonuçlar, hem klinik gözlem hem de immün boyamaya dayanarak neovaskülarizasyonda ölçülebilir bir azalma olduğunu göstermektedir. Bu tekniğin etkileri, yeni bileşiklerin ve tedavilerin test edilebileceği tekrarlanabilir bir neovaskülarizasyon düzeyi sağladığı için korneal körlüğe yönelik yeni tedavilere kadar uzanmaktadır.Böylece bu yöntem, patolojik kornea neovaskülarizasyonu hakkında bilgi sağlayabilir. Ayrıca, genel olarak anjiyogenez ve inflamasyon mekanizmalarını araştırmak için bir model teşkil edebilir. Prosedürün gösterimi, laboratuvarımdaki alkali yanık yaralanması hazırlıklarının bir parçası olacaktır.Çapı yaklaşık iki

an-alkali-burn-injury-model-of-corneal-neovascularization-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu iletişim kuralı oküler yüzey için bir aşınma fare indirebilmek için ve yara iyileşme süreci bundan sonra izlenecek yöntemi açıklanır. Protokol kısmen göz yüzey epitel anaesthetized farelerde kaldırmak için oküler bir burr yararlanır.

Kornea epitel aşınma oküler Burr ile bir Model olarak kornea için yara iyileşme

Burada, kornea epitelinin mekanik ve kimyasal hasarı için fare ve tavşana dayalı hayvan modelleri, yeni terapötikleri ve altta yatan mekanizmayı taramak için geliştirilmiştir.

Kornea Epitelinin Mekanik ve Kimyasal Yaralanmaları için Ex Vivo ve In Vivo Hayvan Modelleri

Bu protokol, farelerde alkali yanığın neden olduğu kornea neovaskülarizasyonuna odaklanır. Yöntem, patolojik anjiyogenezi ve ilişkili moleküler mekanizmaları incelemek ve kornea neovaskülarizasyonunu önlemek için yeni farmakolojik ajanları test etmek için tekrarlanabilir ve kontrol edilebilir bir kornea hastalığı modeli oluşturur.

Alkali Yanığı ile Kornea Neovaskülarizasyonu için Bir Fare Modeli

Bu protokol, bir fare modelinde doğru ve tekrarlanabilir bir kornea ve limbal alkali hasarını indüklemek için bir yöntemi açıklar. Protokol, oldukça kavisli fare korneası ve limbusunda eşit olarak dağılmış bir yaralanmaya izin verdiği için avantajlıdır.

Bir fare modelinde punch-trephine tekniği kullanılarak kornea ve limbal alkali yaralanma indüksiyonu

Burada açıklanan renal iskemi reperfüzyon yaralanmasının fare modeli, akut böbrek hasarı ile sonuçlanan iskemiyi indüklemek için kontrol dokusu ve sol renal pedikülün klemplenmesini sağlayan bir sağ nefrektomiden oluşur. Bu model, tüm adımların tek bir kesi ile gerçekleştirildiği bir orta hat laparotomi yaklaşımı kullanır.

Renal İskemi Reperfüzyon Hasarı: Yaralanma Fare Modeli ve Rejenerasyon

Burada, neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) vasküler özelliklerini yeniden yaratan deneysel bir model olan fare lazer kaynaklı koroidal neovaskülarizasyon (CNV) protokolünü sunuyoruz. Bir kez ustalaştıktan sonra, çeşitli deneysel önlemleri test etmek için bir model sistem olarak CNV'yi güvenilir ve etkili bir şekilde indükleyebilir.

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

Sporcular, her yıl birkaç yüz hafif travmatik beyin yaralanması (mTBI) / sarsıntıyı emerler; Bununla birlikte, bunların beynin üzerindeki sonuçları tam olarak anlaşılamamıştır. Bu nedenle, klinik olarak ilgili semptomları sürekli olarak çoğaltan tek ve tekrarlayan bir mTBI'nin bir hayvan modeli mTBI ve sarsıntı çalışmalarını ilerletmenin yollarını sağlar.

Tek ve Tekrarlayan Hafif Travmatik Beyin Hasarı İçin Bir Fare Modeli

Iris neovaskülarizasyon, iskemik retina hastalığı, ortak bir komplikasyonu görme tehdit neovasküler glokom için neden olabilir. Burada, anjiogenez oransal maddeler noninvaziv değerlendirme için kullanılabilir deneysel Iris neovaskülarizasyon inducing için fare bir protokol açıklayın.

Delici cisim kaynaklı Iris neovaskülarizasyon Rubeosis Iridis bir fare modeli olarak

Telli myograph teknik vasküler düz kas fonksiyonları ve ekran yeni ilaçlar araştırmak için kullanılır. Biz fare mezenterik arter izometrik contractility ölçme ve vasküler düz kas yeni gevşetici süzmek için detaylı bir protokol raporu.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

Bu çalışmada insan ağız mukozasında mikro lazer benek Karşıtlık görüntüleme tarafından ölçmek için bir protokol tanıttı. İzlenmesi sonra xenogenic kollajen greft ile kombine vestibuloplasty klinik bir vaka üzerinde sunulan yaranın normal iyileşmesi.

İnsan jinjiva greft neovaskülarizasyon izleme için yeni bir yaklaşım

Keşfedin fare kornea neovaskülarizasyonunun alkali yanık yaralanma modelinde anti-anjiyojenik tedavi etkilerini. Bu yöntem, kornea körlüğü için yeni tedaviler geliştirmeye yardımcı olur.

Fare Kornea Neovaskülarizasyonunun bir Alkali-yanık Yaralanma Modeli

Daha fazla video keşfet