Name: Een model van remodellering Door vernauwing van de abdominale aorta bij ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-02T10:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Leer een minimaal invasieve chirurgische methode voor het induceren van cardiale hypertrofie en remodellering bij ratten. Dit reproduceerbare model biedt waardevolle inzichten in hartfalenmechanismen en therapeutische strategieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Het werk van de auteurs werd ondersteund door een subsidie van het Ministerie van Wetenschap en Technologie (MOST 103-2320-B-002-068-MY2), het National Health Research Institute (NHRI-EX104-10418SC) en de Nationale Universiteit van Taiwan (NTU 104R4000).

Alle dierlijke experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de Gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren, gepubliceerd door het Amerikaanse National Institutes of Health (NIH publicatie nr. 85-23, herzien 1996). Dit protocol werd goedgekeurd door en in overeenstemming met de uiteengezet door de Institutional Animal Care en gebruik Comite bij National Taiwan University richtlijnen. 1. Dierlijke Surgery <ol><li> Bereid een 22 G injectienaald door afstomping de punt van de naald op een honen steen. Met behulp van een tang, plicate de naald in een rechte hoek. </li><li> Voor de operatie voorbereiden die nodig chirurgische instrumenten en materialen, evenals een herstelkooi. Autoclaaf alle instrumenten en chirurgisch materiaal voor gebruik. </li><li> Handhaving van de ratten ongeveer 200 g en houd ze onder 12 uur licht / donker cycli bij een gecontroleerde temperatuur (21 ± 2 ° C) met vrije toegang tot voedsel en water. Ten minste 6 ratten in elke groep. Verdoven de ratten met pentobarbital(75 mg / kg in 0,5 ml, ip) of een ander geschikt anestheticum. Controleer de diepte van de anesthesie door het testen van de staart reflex. OPMERKING: De afwezigheid van staart reflex is een indicator van geschikte anesthesie. </li><li> Plaats een rat in rugligging op een operatie platform met een verwarmingselement om de lichaamstemperatuur te handhaven. Scheer de buikstreek van de rat met een dierlijk haar clipper en haar remover lotion chirurgische besmettingen te voorkomen. Schrob de netjes geschoren achterlijf met betadine of een andere reinigende reagens voor de operatie. NB: Het is belangrijk om een ​​steriel veld te houden gedurende de hele procedure. </li><li> Voeg een 2 cm incisie langs de middellijn van het abdomen met een scalpel. Met behulp van een fysiologische zoutoplossing, houden de buik orgel vochtig tijdens de operatie. Verplaats de spijsverteringsorganen voorzichtig opzij behulp watten de inferior vena cava dat ligt in het achterste peritoneale regio bloot. Identificeer de abdominale aorta, die ligt geplaatst naast en meestal aan delinks van de inferior vena cava. NB: De abdominale aorta is het schip dat pulseert in de tijd met de hartslag. </li><li> Doorboren het peritoneum met een tang om de schepen eronder bloot. Voorzichtig de abdominale aorta nabij de nierslagaders isoleren en passen een 8 cm lange 4-0 zijden hechtdraad onder de abdominale aorta tussen de oorsprong van de rechter en linker nierslagaders. </li><li> Maak een losse dubbele knoop met de hechtdraad; laat een diameter lus 3 mm, en plaats de afgestompte en boog 22 G naald in de lus. Draai de knoop rond de aorta en de naald en verwijder de naald onmiddellijk tot een diameter vernauwing 0,7 mm te bereiken. </li><li> Sluit de buikholte met 6-0 absorbeerbare hechtmateriaal. Hecht de spier of incisies met eenvoudige onderbroken hechtingen. Om infectie te voorkomen, scrub de chirurgische site met een jodium tinctuur. </li><li> Observeer het dier voorzichtig tot het voldoende bewustzijn herwint, zoals aangegeven door het vrije verkeeren voedselinname. Heeft een dier niet onbeheerd achter te laten tot het voldoende bewustzijn heeft herwonnen om borstligging handhaven. Om te voorkomen na de operatie pijn, de behandeling van de rat met acetaminofen (300 mg / kg in 0,5 ml, ip). OPMERKING: Gebruikers moeten analgetica toedienen, zoals goedgekeurd door institutionele beleid. </li></ol> 2. Tissue and Blood Sample Collection <ol><li> Op 10 weken na de operatie, wegen de rat en verdoven met pentobarbital (75 mg / kg in 0,5 ml, ip). Voor de operatie, bevestigen de diepte van de anesthesie door het testen van zijn staart reflex. Plaats de rat op een metalen dienblad. </li><li> Voeg een 2 cm incisie langs de middellijn van de hals met een scalpel. Verplaats de spieren voorzichtig met een tang om de luchtpijp bloot. Observeer aandachtig naar de halsslagaders, die parallel aan de luchtpijp zijn en pulseren in de tijd met de hartslag te identificeren. </li><li> Verzamel het bloed van de halsslagader in een Bloedverzamelinrichting buis bekleed met EDTA. onmiddellijk centrifugehet bloed gedurende 15 minuten bij 2000 xg en het verzamelen van het plasma. Bewaar het bloedplasma bij -80 ° C totdat het nodig is. </li><li> Maak een 5 cm incisie in de thoracale regio, rond de middellijn van xyphoid proces. Doorboren het membraan met scherpe tang. Met behulp van een schaar, knippen en verwijder de ribbenkast langs de mid-claviculaire lijnen aan beide zijden naar het hart bloot te leggen. Accijnzen het hart voorzichtig langs de cardiale en vasculaire grenzen. Verwijder het hart voorzichtig zonder grijpen het weefsel. </li><li> Monteer het hart op een gemodificeerde Langendorff perfusie apparaat door koppelverkoop de aorta stam naar de perfusie naald. Perfuseren het hart met Krebs buffer (die 110 mM NaCl, 2,6 mM KCI, 1,2 mM KH 2 PO 4, 1,2 mM MgSO4, 25 mM NaHCO3, en 11 mM glucose [pH 7,4]) uit te spoelen het bloed. Weeg het hart en het berekenen van de hart-weight-to-body-gewichtsverhouding. Bevestig het hart met 4% paraformaldehyde op het ijs. Vergeet niet om een ​​masker te dragen, omdat paraformaldehyde damp is toxic. </li></ol> 3. Tissue Fibrosis Kwantificering <ol><li> Plaats het paraformaldehyde gefixeerd hartweefsel op een weefsel snijden en snij inrichting 2 mm dikke panelen. Plaats de weefselcoupes per inbedding cassette. Dehydrateer het weefsel door een reeks van gegradeerde alcohol baden (50%, 75%, 95% en 100% voor 1 uur elk). </li><li> Infiltreren het weefsel met xyleen gedurende 1 uur en tenslotte in was gedurende 1 uur. Plaats het geïnfiltreerde weefsel in een inbedding cassette en insluiten met paraffine. Bewaar de ingebedde weefsels in paraffine blokken bij kamertemperatuur totdat microtoming. </li><li> Snijd de ingebedde weefsel in 4 pm dikke secties. Leg de secties in een 45 ° C waterbad. Dompel een glasplaatje in het waterbad onder een hoek en geleidelijk aan de aanpak van de paraffine sectie randen gedeeltelijke bevestiging aan de dia toe te staan. </li><li> Beweeg de schuif in en uit het bad om potentiële luchtzakken onder het gedeelte weefsel te verwijderen en om een ​​betere hechting te vergemakkelijken. droge tHij schuift bij 37 * C gedurende 1 uur en opgeslagen bij kamertemperatuur histologische kleuring. </li><li> Zet de schuif in een tank. Deparaffinize de dia met xyleen gedurende 30 min en hydrateren in opeenvolgend verdunde alcohol (95%, 75% en 50% gedurende 3 min elk) en tenslotte in gedestilleerd water. Met adequate picrosirius rode oplossing volledig te bedekken de weefselcoupes gedurende 1 uur. Spoel de dia&#39;s in een 0,5% azijnzuur oplossing voor twee wijzigingen, en vervolgens uit te voeren twee spoelingen in absolute alcohol. </li><li> Air-droog de glijbaan en monteer de dia in kunsthars met een dekglaasje. Fotografeer de dia in een zichtbaar licht veld. LET OP: Het rode gebied in de foto toont een picrosirius rode positieve zone onder een microscoop bij 200X vergroting. Bereken het percentage positieve picrosirius rode zone boven de oppervlakte, wat aangeeft de mate van fibrose 11. </li></ol> 4. Bloed troponine kwantificering <ol><li> Kwantificeren plasma troponine niveausonder toepassing van een enzymgekoppelde immunosorbent assay (ELISA). Assay elk monster in duplo. Belasting 50 pl bloed plasma en 50 pl van een antilichaam cocktail in de geschikte putjes. Verzegel de plaat en incubeer gedurende 1 uur bij kamer temperatuur op een plaat schudder bij 400 rpm. OPMERKING: troponine in het plasma is een marker voor cardiale schade. </li><li> Zuig het vloeistof en was elk putje met 250 ui wasbuffer driemaal. Na de laatste wasbeurt, draai de plaat en dep het tegen schone papieren zakdoekjes om overmatige vloeistof te verwijderen. </li><li> Voeg 100 pl tetramethylbenzidine substraat aan elk putje en incubeer gedurende 10 minuten in het donker op een plaat schudder bij 400 rpm. Voeg 100 gl stopoplossing aan elk putje. Schud de plaat op een plaat schudder gedurende 1 min mengen. Noteer de optische dichtheid (OD) bij 450 nm. NB: De troponine-concentratie in verhouding staat tot de OD-waarde. </li></ol>

<ol><li>Houser, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+heart+failure%3A+a+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of heart failure: a scientific statement from the American Heart Association.</a> Circ Res. 111, 131-150 (2012).</li>
<li>Towbin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inherited+cardiomyopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+J%22%5BJournal%5D)">Inherited cardiomyopathies.</a> Circ J. 78, 2347-2356 (2014).</li>
<li>Breckenridge, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+failure+and+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Heart failure and mouse models.</a> Dis Model Mech. 3, 138-143 (2010).</li>
<li>van Bilsen, M., van Nieuwenhoven, F. A., van der Vusse, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+remodelling+of+the+failing+heart%3A+beneficial+or+detrimental%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolic remodelling of the failing heart: beneficial or detrimental?</a> Cardiovasc Res. 81, 420-428 (2009).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure%3A+development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure: development of novel therapies, past and present.</a> Circ Heart Fail. 2, 138-144 (2009).</li>
<li>Gu, W. L., Chen, C. X., Huang, X. Y., Gao, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+angoroside+C+on+pressure+overload-induced+ventricular+remodeling+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">The effect of angoroside C on pressure overload-induced ventricular remodeling in rats.</a> Phytomedicine. 22, 705-712 (2015).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alteration+of+cardiac+ACE2%2FMas+expression+and+cardiac+remodelling+in+rats+with+aortic+constriction%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Alteration of cardiac ACE2/Mas expression and cardiac remodelling in rats with aortic constriction.</a> Chin J Physiol. 57, 335-342 (2014).</li>
<li>Tardif, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nestin+upregulation+characterizes+vascular+remodeling+secondary+to+hypertension+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Nestin upregulation characterizes vascular remodeling secondary to hypertension in the rat.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 308, H1265-H1274 (2015).</li>
<li>Li, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+mineralocorticoid+receptor+deficiency+inhibits+aortic+constriction-induced+cardiac+hypertrophy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Myeloid mineralocorticoid receptor deficiency inhibits aortic constriction-induced cardiac hypertrophy in mice.</a> PLoS One. 9, e110950(2014).</li>
<li>Ku, H. C., Su, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DPP4+deficiency+preserved+cardiac+function+in+abdominal+aortic+banding+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">DPP4 deficiency preserved cardiac function in abdominal aortic banding rats.</a> PLoS One. 9, e85634(2014).</li>
<li>Lee, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caffeic+acid+ethanolamide+prevents+cardiac+dysfunction+through+sirtuin+dependent+cardiac+bioenergetics+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Caffeic acid ethanolamide prevents cardiac dysfunction through sirtuin dependent cardiac bioenergetics preservation.</a> J Biomed Sci. 22, 80(2015).</li>
<li>Gs, A. K., Raj, B., Santhosh, K. S., Sanjay, G., Kartha, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascending+aortic+constriction+in+rats+for+creation+of+pressure+overload+cardiac+hypertrophy+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ascending aortic constriction in rats for creation of pressure overload cardiac hypertrophy model.</a> J Vis Exp. , e50983(2014).</li>
<li>deAlmeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transverse+aortic+constriction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transverse aortic constriction in mice.</a> J Vis Exp. , e1729(2010).</li>
<li>Schaefer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+New+Animal+Model+for+Investigation+of+Mechanical+Unloading+in+Hypertrophic+and+Failing+Hearts%3A+Combination+of+Transverse+Aortic+Constriction+and+Heterotopic+Heart+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A New Animal Model for Investigation of Mechanical Unloading in Hypertrophic and Failing Hearts: Combination of Transverse Aortic Constriction and Heterotopic Heart Transplantation.</a> PLoS One. 11, e0148259(2016).</li>
<li>Rodriguez-Iturbe, B., Quiroz, Y., Kim, C. H., Vaziri, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertension+induced+by+aortic+coarctation+above+the+renal+arteries+is+associated+with+immune+cell+infiltration+of+the+kidneys%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Hypertension induced by aortic coarctation above the renal arteries is associated with immune cell infiltration of the kidneys.</a> Am J Hypertens. 18, 1449-1456 (2005).</li>
<li>Ku, H. C., Lee, S. Y., Yang, K. C., Kuo, Y. H., Su, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+Caffeic+Acid+with+Pyrrolidine+Enhances+Antioxidant+Ability+by+Activating+AKT%2FHO-1+Pathway+in+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Modification of Caffeic Acid with Pyrrolidine Enhances Antioxidant Ability by Activating AKT/HO-1 Pathway in Heart.</a> PLoS One. 11, e0148545(2016).</li>
<li>Bovill, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+anesthesia+for+the+patient+with+left+ventricular+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cardiothorac+Vasc+Anesth%22%5BJournal%5D)">Intravenous anesthesia for the patient with left ventricular dysfunction.</a> Semin Cardiothorac Vasc Anesth. 10, 43-48 (2006).</li>
<li>Inoko, M., Kihara, Y., Morii, I., Fujiwara, H., Sasayama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transition+from+compensatory+hypertrophy+to+dilated%2C+failing+left+ventricles+in+Dahl+salt-sensitive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transition from compensatory hypertrophy to dilated, failing left ventricles in Dahl salt-sensitive rats.</a> Am J Physiol. 267, H2471-H2482 (1994).</li>
<li>Heyen, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural%2C+functional%2C+and+molecular+characterization+of+the+SHHF+model+of+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Structural, functional, and molecular characterization of the SHHF model of heart failure.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 283, H1775-H1784 (2002).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Hypertensieve hartziekte, een groot gezondheidsprobleem dat aanzienlijk bijdraagt aan morbiditeit en mortaliteit, kan leiden tot cardiale hypertrofie en hartfalen5. De pathogenese en progressie van hypertensieve hartziekte bij mensen is complex, dus een geschikt diermodel is van cruciaal belang om de onderliggende mechanismen te onderzoeken en nieuwe therapieën te testen die zijn gericht op het verbeteren van de hartstructuur en -functie5. Het model voor abdominale aortaconstricie, dat chronische ha...

Hartfalen is een complex klinisch syndroom, waarvan de symptomen zijn vermoeidheid, dyspnoe, inspanningsintolerantie en vochtophoping in perifere weefsels. Het is de belangrijkste doodsoorzaak in de ontwikkelde landen 1. Naast erfelijke cardiomyopathie veroorzaakt door mutaties in sarcomeer eiwitten of ionkanalen 2, kan myocardiale disfunctie veroorzaakt door een verscheidenheid aan medische aandoeningen, waaronder hypertensie, hartklepaandoeningen, obesitas en diabetes 3. Veranderingen in het myocard structuur, elektrische geleiding en energiemetabolisme leiden tot onvoldoende cardiale pompcapaciteit om de bloedsomloop eisen, wat uiteindelijk resulteert in hartfalen 3,4 ontmoeten. De mechanismen die ten grondslag liggen hartfalen derhalve kritisch op het gebied van cardiovasculair onderzoek. Het identificeren moleculaire mechanismen die leiden tot hartfalen progressie uiteindelijk helpen bij de ontdekking van nieuwe therapeutische doelwitten of nuttig biomerkers <sup&gt; 1. Het is daarom belangrijk om hartfalen dierlijke modellen die de belangrijkste klinische kenmerken deelt met hartfalen bij mensen 5 ontwikkelen. Cardiale hypertrofie en remodellering speelt een cruciale rol in de ontwikkeling van hartfalen. Hypertensieve hart-en vaatziekten is de belangrijkste bijdragende factor van cardiale hypertrofie en de onaangepaste remodeling gezien bij menselijke patiënten 1. Om deze menselijke omstandigheden na te bootsen, zijn diermodellen vaak vastgesteld door middel van chirurgische procedures. In het bijzonder kan de dwars- of abdominale aorta wordt vernauwd tot de weerstand tegen de linker ventrikel, wat uiteindelijk leidt tot een drukoverbelasting in het hart te verhogen. Dit verschijnsel leidt gewoonlijk tot cardiale hypertrofie, een fysiologische compensatie van de hartspiercellen op de functionele eis van het cardiovasculaire systeem. Echter, de functionele vraag voorrang op de normale fysiologische compensatiemechanismen, wat leidt tot cardiale fibrose en contractegel impairment. Dwarse aorta vernauwing (TAC) chirurgie gaat vaak ingewikkelde procedures, waaronder thoracotomie, mechanische ventilatie en scheiding van de thymus en vetweefsel van de aortaboog. Daarentegen abdominale aorta vernauwing vereist eenvoudiger experimentele technieken 6-8. De abdominale aorta tussen het linker en rechter nierslagaders vernauwd tijdens de operatie. Cardiale hypertrofie en remodellering kan enkele weken waargenomen na de abdominale aorta vernauwing chirurgie 6-8; zij produceren robuuste hypertensieve hartziekte vergelijkbaar met die die door de dwarse aorta vernauwing chirurgie 9,10. We beschrijven hier een protocol abdominale aorta vernauwing gedrag in ratten een efficiënt, zeer reproduceerbare en minimaal-invasieve methode. De abdominale aorta naast de nierslagaders vernauwd door een 0,72 mm lus gevormd door een 4-0 zijden draad. Tien weken na de operatie, cardiale hypertrofie en remodeling waarneembaar. Het rattenmodel van abdominale aorta-vernauwing geïnduceerde cardiale hypertrofie verschaft een platform voor het bestuderen van ziektemechanismen en pathofysiologie, alsook de ontwikkeling van potentiële therapeutica.

<table><tbody><tr><td>22 G syringe needle&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;&nbsp; BD Biosciences&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>309572</td><td></td></tr><tr><td>EDTA Blood Collection Tubes</td><td>&nbsp;&nbsp; BD Biosciences&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>REF365974</td><td></td></tr><tr><td>4-0 silk suture&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Sharpoint&trade; Products&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>DC-2515N</td><td></td></tr><tr><td>6-0 silk suture&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Sharpoint&trade; Products&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>DC-2150N</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>1507002</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>Acetaminophen</td><td>Sigma Aldrich&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>A7085</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirius red solution&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>Abcam&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>ab150681</td><td></td></tr><tr><td>Cardiac troponin kit&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;Abcam&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>ab200016</td><td></td></tr><tr><td>Imagequant</td><td>Molecular Dynamics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Langendorff&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;ADInstruments&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>ML870B2</td><td></td></tr></tbody></table>

een model van remodellering door vernauwing van de abdominale aorta bij ratten

A Model of Cardiac Remodeling Through Constriction of the Abdominal Aorta in Rats

Hartfalen is een van de belangrijkste doodsoorzaken wereldwijd. Het is een complex klinisch syndroom dat vermoeidheid, kortademigheid, inspanningsintolerantie en vochtretentie omvat. Veranderingen in de myocardstructuur, elektrische geleiding en energiemetabolisme ontwikkelen zich bij hartfalen, wat leidt tot contractiele disfunctie, verhoogd risico op aritmieën en plotselinge dood. Hypertensieve hartziekte is een van de belangrijkste bijdragende factoren van cardiaal remodelleren geassocieerd met hartfalen. Het meest gebruikte diermodel dat hypertensieve hartziekte nabootst, wordt gemaakt via chirurgische ingrepen, zoals door het vernauwen van de aorta. Abcessie van de abdominale aorta is een nuttige experimentele techniek om een drukbevrachting te induceren, wat leidt tot hartfalen. De operatie kan eenvoudig worden uitgevoerd, zonder de noodzaak van het openen van de borstkas of mechanische ventilatie. Door abdominaal aortavernauwing veroorzaakte cardiale pathologie vordert geleidelijk, waardoor dit model relevant is voor klinische hypertensieve hartfalen. Cardiale letsels en remodellering kunnen 10 weken na de operatie worden waargenomen. De hier beschreven methode biedt een eenvoudige en effectieve aanpak om een diermodel van hypertensieve hartziekte te produceren dat geschikt is voor het bestuderen van ziektemechanismen en voor het testen van nieuwe therapeutische middelen.

10 weken na de abdominale aorta vernauwing chirurgie, werd de resulterende cardiale pathologie geanalyseerd. De cardiale histologie werd gemeten als de verhouding van het gewicht van het hart tot het lichaamsgewicht en door het detecteren van de hoeveelheid collageen in het hart. Cardiale schade werd bevestigd door meting van plasma cardiaal troponine concentratie. Zoals getoond in figuur 1A, is de cardiale gr...

Een rattenmodel van abdominale aortaconstrictie dat cardiale hypertrofie en remodellering induceert, wordt beschreven. Een efficiënte, zeer reproduceerbare en minimaal invasieve methode wordt gebruikt om een eenvoudige maar nuttige platform te bieden voor onderzoek naar myocardiale hypertrofie en disfunctie.

Een model van remodellering Door vernauwing van de abdominale aorta bij ratten

Heart failure is one of the leading causes of death worldwide. It is a complex clinical syndromethat includes fatigue, dyspnea, exercise intolerance, and ...

Het algemene doel van de chirurgische procedure is het bieden van een eenvoudig platform voor het bestuderen van myocardiale hypertrofie, remodellering en dysfunctie. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het cardiovasculaire vakgebied, zoals de signalering bij cardiale hypertrofie en remodellering, evenals de ontdekking van nieuwe therapeutische doelwitten bij hypertensieve hartaandoeningen.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een minimaal invasieve methode is die zeer eenvoudige chirurgische technieken vereist en waarvan de resultaten toch zeer reproduceerbaar zijn. De implicaties van deze technieken strekken zich uit tot onze therapie voor hypertensieve hartaandoeningen, aangezien constrictie van de abdominale aorta drukoverbelasting induceert en uiteindelijk leidt tot cardiale hypertrofie, remodellering en hartfalen.Bereid eerst een injectienaald van 22 gauge voor door de punt stomp te maken met een slijpsteen. Buig de naald vervolgens met een tang in een rechte hoek. Bereid de benodigde chirurgische materialen voor, inclusief de herstelkooi, en autoclaveer de chirurgische instrumenten.Houd de ratten rond de 200 gram en houd ze onder 12-uurs licht-donkercycli bij een gecontroleerde temperatuur met vrije toegang tot voedsel en water. Plaats de rat in rugligging op een operatieplatform met een warmtemat om de lichaamstemperatuur te handhaven. Scheer het operatiegebied volledig om contaminatie van de wond door contact met vacht te voorkomen.Schrob vervolgens de gladgeschoren buik met betadine of een ander reinigingsmiddel. Maak daarna met een scalpel een incisie van twee centimeter langs de middellijn van de buik. Bevochtig vervolgens de buikorganen met normale zoutoplossing en houd de organen gedurende de operatie vochtig.Verschuif voorzichtig de spijsverteringsorganen naar de zijkant met behulp van wattenbolletjes om de vena cava inferior en de posterieure peritoneale regio bloot te leggen. Identificeer vervolgens de aorta abdominalis, die naast en gewoonlijk links van de vena cava inferior ligt. Doorboor nu met een pincet het peritoneum om de onderliggende vaten vrij te leggen.Isoleer voorzichtig de abdominale aorta naast de nierslagaders en haal een acht centimeter lange 4/0 zijden hechtdraad onder het vat door tussen de oorsprongen van de rechter- en linkernierslagader. Maak een losse dubbele knoop met de hechtdraad en laat een lus van drie millimeter diameter over. Plaats vervolgens de stompe en gebogen 22 gauge naald in de lus.Trek de knoop rond de aorta en de naald strak aan en verwijder vervolgens onmiddellijk de naald om een vernauwing van 0,7 millimeter diameter te verkrijgen. Sluit de buikholte met 6/0 hechtingen. Gebruik daarna enkelvoudige onderbroken hechtingen om de incisies in de spier en de huid te sluiten.Gebruik jodiumtinctuur om de operatielocatie te ontsmetten om infecties te voorkomen. Om postoperatieve pijn te voorkomen, wordt het dier behandeld met acetaminophen en nauwlettend in de gaten gehouden totdat het voldoende bewustzijn heeft teruggewonnen, wat wordt aangegeven door vrije beweging en voedselopname, en in sternumligging blijft. Weeg de rat 10 weken na de operatie.Nadat het dier is gebenestheseerd en de diepte van de anesthesie is bevestigd, plaatst u de rat op een metalen dienblad. Maak nu een incisie van vijf centimeter in de thoraxregio rond de middellijn van het xiphoïde proces. Doorboor het diafragma met een scherp pincet.Knip vervolgens met een schaar de borstkas langs de middensleutelbeenlijnen aan beide zijden door en verwijder deze om het hart bloot te leggen. Exciteer het hart zorgvuldig langs de cardiale en vasculaire grenzen. Verwijder daarna voorzichtig het hart zonder het weefsel vast te grijpen.Bevestig het hart aan een aangepast Langendorff-perfusieapparaat door de aortastam aan de perfusienaald te binden. Gebruik vervolgens Krebs-buffer om het hart te perfunderen en het bloed uit te spoelen. Weeg het hart en bereken de ratio tussen het hartgewicht en het lichaamsgewicht.Plaats vervolgens, terwijl u een masker draagt, het orgaan in 4%paraformaldehyde en fixeer het gedurende de nacht op ijs. Na het fixeren van het hartweefsel plaatst u dit in een weefselsectie-apparaat, snijdt u het in plakken van twee millimeter dik en plaatst u de secties in een inbedcassette. Na paraffine-inbedding en verdere sectie volgens het tekstprotocol wordt de paraffine van de coupes verwijderd door deze gedurende 30 minuten in een tank met xyleen te plaatsen.Rehydrate het weefsel vervolgens in een reeks opeenvolgend verdunde alcoholoplossingen, gevolgd door gedestilleerd water. Gebruik daarna voldoende picrosiriusrood-oplossing om de weefselcoupes volledig te bedekken en incubeer deze gedurende één uur. Spoel de objectglazen vervolgens twee keer af met een 0,5% azijnzuuroplossing.Spoel de monsters twee keer met absolute alcohol. Laat de monsters aan de lucht drogen en monteer ze in synthetische hars met een dekglas. Gebruik vervolgens zichtbaar licht onder een microscoop bij een vergroting van 200X om de preparaten te fotograferen.Bereken ten slotte het percentage picrosirius-rood positieve zone ten opzichte van het totale oppervlak, wat de mate van fibrose aangeeft. Zoals hier te zien is, nam het hartvolume toe na de abdominale aortaconstrictie-operatie. Dit wordt aangetoond door een hogere ratio van hartgewicht ten opzichte van lichaamsgewicht, wat een indicator is voor cardiale hypertrofie.Door gebruik te maken van picrosiriusrood-kleuring kan fibrotisch myocard met een verhoogd collageengehalte worden onderscheiden van normale gebieden. Zoals aangetoond in deze gekleurde monsters, was de cardiale fibrose verhoogd na een abdominale aortaconstrictie-operatie in vergelijking met de controlegroepen. Eenmaal beheerst kan de operatie in 30 minuten worden voltooid indien deze correct wordt uitgevoerd.Na deze procedure kunnen andere methoden, zoals echocardiografie, worden uitgevoerd om aanvullende vragen over de hartfunctie te beantwoorden. Na de ontwikkeling van deze techniek werd de weg vrijgemaakt voor onderzoekers op het gebied van hypertensieve hartaandoeningen om de mechanismen rondom cardiohypertrofie, remodellering en hartfalen te onderzoeken. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u abdominale aortaconstrictie uitvoert om cardiohypertrofie en myocardiale remodellering bij ratten te induceren.

a-model-cardiac-remodeling-through-constriction-abdominal-aorta

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video demonstrates the technique of aortic debanding, which can lead to reverse remodeling to limit the progression towards heart failure in a murine model. Post debanding, a significant reduction of ventricular afterload triggers regression of ventricular hypertrophy and fibrosis, causing a recovery in cardiac function.

Surgical Aortic Debanding: A Procedure to Study Left Ventricular Reverse Remodeling in Murine Model of Aortic Constriction

We beschrijven een stapsgewijze procedure voor het creëren van druk overbelasting en linker ventrikel hypertrofie in Wistarratten door vernauwing van de aorta ascendens met een kleine metalen clip. Dit model wordt veel gebruikt voor het bestuderen remodelleren veranderingen tijdens cardiale hypertrofie en voor het identificeren en evalueren van strategieën voor regressie van dergelijke veranderingen.

Oplopend Aorta Vernauwing in ratten voor de schepping van druk overbelasting cardiale hypertrofie Model

Polyurethaan katheter inbrengen in de aorta lumen en hechtdraad Afbinding van de aorta induceren chronische hypoxie als gevolg van hypoperfusie van de adventitial Wasa vasorum. Dit artikel beschrijft een roman diermodel van abdominale aorta aneurysma (AAA) met eigenschappen die vergelijkbaar zijn met die van AAA bij de mens.

Oprichting van een knaagdier Model van abdominale aorta aneurysma door het blokkeren van Adventitial Vasa Vasorum perfusie

Hier beschrijven we een stapsgewijs protocol van chirurgische aorta-debanding in het gevestigde muizenmodel van aorta-vernauwing. Deze procedure maakt het niet alleen mogelijk om de mechanismen te bestuderen die ten grondslag liggen aan de linker ventriculaire omgekeerde remodellering en regressie van hypertrofie, maar ook om nieuwe therapeutische opties te testen die myocardherstel kunnen versnellen.

Het bestuderen van Linker Ventriculaire Omgekeerde Remodeling door Aorta Debanding in Knaagdieren

We beschrijven de creatie van een rat model van druk overbelasting geïnduceerde matige remodelleren en vroege systolische disfunctie waar signaal transductie trajecten die betrokken zijn bij de inleiding van het remodelleren proces worden geactiveerd. Dit diermodel zal helpen bij het identificeren van moleculaire doelen voor het toepassen van vroege therapeutische anti-remodelleren strategieën voor hartfalen.

Een Rat Model van Pressure Overload Geïnduceerde Matige Remodeling en Systolische disfunctie in tegenstelling tot Openlijke Systolische hartfalen

Het huidige protocol beschrijft een chirurgische procedure om oplopende aortabanding te verwijderen in een rattenmodel van pulmonale hypertensie als gevolg van linkerhartaandoeningen. Deze techniek bestudeert endogene mechanismen van omgekeerde remodellering in de pulmonale circulatie en het rechterhart, waardoor strategieën worden geïnformeerd om pulmonale hypertensie en / of rechterventrikeldisfunctie om te keren.

Een model van omgekeerde vasculaire remodellering bij pulmonale hypertensie als gevolg van linkerhartziekte door aorta-debanding bij ratten

Het huidige protocol beschrijft een stapsgewijze procedure om een minivarkensmodel van hartfalen op te stellen met behoud van de ejectiefractie met behulp van dalende aortavernauwing. De methoden voor het evalueren van cardiale morfologie, histologie en functie van dit ziektemodel worden ook gepresenteerd.

Een chirurgisch model van hartfalen met behouden ejectiefractie bij Tibetaanse minivarkens

Het huidige protocol beschrijft een nieuwe techniek van aortabanding bij muizen om drukoverbelasting cardiale hypertrofie te induceren. Voor het banderen wordt een rubberen ring met een vaste binnendiameter gebruikt. Deze nieuwe techniek belooft minder variantie en meer reproduceerbare gegevens voor toekomstige experimenten.

O-ring aortabanding versus traditionele transversale aortavernauwing voor het modelleren van drukoverbelasting-geïnduceerde cardiale hypertrofie

Deze studie toont een reproduceerbare heterotope abdominale harttransplantatietechniek bij ratten die beginners kunnen leren en uitvoeren. Bovendien wordt een nieuw aorta-regurgitatiemodel bij ratten gegenereerd door heterotope abdominale harttransplantatie uit te voeren en de aortaklep van de donor te beschadigen met behulp van een geleidedraad na het oogsten.

Gemodificeerde heterotope abdominale harttransplantatie en een nieuw aorta-regurgitatiemodel bij ratten

Dit protocol beschrijft een minimaal invasieve chirurgische ingreep voor het opstijgen van aortabanden bij varkens.

Een minimaal invasief model van aortastenose bij varkens

Rechterhartfalen (RHF) wordt gekenmerkt door rechtszijdige hartdilatatie en hypertrofie, wat leidt tot ventriculaire en atriale stoornissen. Cardiopulmonale aandoeningen geassocieerd met RHF gaan gepaard met een verhoogd risico op hartritmestoornissen. Dit artikel beschrijft een gestandaardiseerd model van door longslagaderband geïnduceerde RHF geassocieerd met verbeterde ventriculaire en atriale aritmogenese.

Rattenmodel van rechtszijdige cardiale remodellering en aritmie met behulp van longslagaderbanden

Leer een minimaal invasieve chirurgische methode voor het induceren van cardiale hypertrofie en remodellering bij ratten. Dit reproduceerbare model biedt waardevolle inzichten in hartfalenmechanismen en therapeutische strategieën.

Een model van remodellering Door vernauwing van de abdominale aorta bij ratten

Meer video's verkennen