המצאה של אלקטרודות Amperometric

Summary

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור סיבים אלקטרודות פחמן. אלקטרודות משמשות לאחר מכן כדי לזהות שחרור קטכולאמינים מתוך שלפוחית ​​עם amperometry סיבי פחמן.

Abstract

סיבים אלקטרודות פחמן הם קריטיים לצורך זיהוי של שחרור קטכולאמינים מתוך שלפוחית ​​בתאי יחיד עבור מדידות amperometry. כאן, אנו מתארים את טכניקות הדרושה כדי לייצר רעש נמוך (<0.5 רש"פ) אלקטרודות. הטכניקות שונו מן התיאורים שפורסם על ידי חוקרים קודמים (1,2). אלקטרודות מבוצעים על ידי הכנת סיבי הפחמן משחילה אותם בנפרד לתוך הצינור בכל נימי באמצעות ואקום עם מסנן כדי לשאוב את סיב. בשלב הבא, צינור נימי עם סיבים נמשך חולץ על ידי אלקטרודה, יצירת שני חצאים, כל אחד עם קצה עדין הצביע. האלקטרודות הן טבול אפוקסי, חם נוזלי מעורבב עם hardener ליצור חותם אפוקסי זכוכית. לבסוף, האלקטרודות ממוקמות בתנור כדי לרפא את אפוקסי. טיפול זהיר של אלקטרודות הוא קריטי על מנת להבטיח כי הם עשויים בעקביות וללא נזק. פרוטוקול זה מראה כיצד לפברק וחותכים אלקטרודות amperometric הקלטה של ​​תאים בודדים.

Protocol

חלק 1: Carbon Fiber הכנה

1. גזור צרור של סיבי פחמן (אנו משתמשים 7μm קוטר) באריכות כי הוא ~ 1.25 X אורך פיפטה נימי.
2. הסר את גודל על ידי הרתחה ~ 100 מ"ל של אצטון במיכל והוספת סיבים אצטון, רותחים למשך 30 דקות או יותר.
3. הסר סיבים אצטון החם, ולהעביר כוס נקייה עם 50-100 מ"ל של אצטון טרי.
4. סיבי יבש על ידי הנחת צרור על צלחת פטרי 150 מ"מ פתוח ולינה airdry.

Discussion

פרוטוקול זה מתאר כיצד ליצור חתך אלקטרודות amperometric. במהלך ההקלטות amperometric, אלקטרודה סיבי פחמן ממוקם מול פני השטח של תא הפרשה. פעילות Exocytotic הוא ציין כמו קוצים amperometric, אשר מציין הנוכחית אלקטרוכימיים הנגרמת על ידי העברת האלקטרונים לאחר חמצון catecholamines. בעזרת תרגול ביצוע חיתוך אלקטרודות amperometric, רמות הרעש יכול להיות משופרת מאוד על רבים של אלקטרודות זמינים מסחרית.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
מקשה אפוקסי 1,3-פנילן-דיאמן פתיתי	ריאגנט	סיגמא-אולדריץ'	P23954-100G04 716AJ	Aliquots מאוחסנים במייבש ואין לחשוף אותם לאור.
סיבי פחמן	חומר	Goodfellow	C005725
מיקרו-המטוקריט צינורות נימיים	חומר	פישר מדעי	NC9836768
אפוקסי שרף	ריאגנט	מילר-סטיבנסון	אפון שרף 828
ניתוח מכשיר
מכשיר		חולץ אלקטרודותNarishige International	PP-830	משיכה ראשונה = 24.8 מעלות צלזיוס; משיכה שנייה = 62.7 מעלות צלזיוס
מכשיר			תנור	מוגדר ל-100 מעלות צלזיוס.
מכשיר			פלטה חמה	מוגדר ל-55 מעלות צלזיוס