Microinjection طريقة راسخة وفعالة لإدخال المؤثرات الأجنبية في الأجنة المخصبة الزرد. هنا ، علينا أن نظهر تقنية microinjection قوية لأداء overexpression مرنا ، والدراسات morpholino ضربة قاضية قليل النوكليوتيد الجينات في الزرد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
Microinjection من مرنا والعقاقير [أليغنوكليوتيد] Morpholino اسماك الزرد في الأجنة.
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
أداة أساسية للتحقيق في دور الجينات خلال التنمية هو القدرة على تنفيذ ضربة قاضية الجينات ، overexpression والدراسات misexpression. في الزرد (
البروتوكول
الجزء 1 : إعداد micropipettes وألواح غرفة microinjection
- افتعال micropipettes عن طريق التسخين وسحب الأنابيب الزجاجية البورسليكات الشعرية (البنك الآلات الدقيقة ، وشركة ، 1B100 - 4) في جهاز مجتذب micropipette (سوتر الآلات ، وشركة يلهب / براون P - 97). مخزن في طبق بتري على أعلى كمية صغيرة من الطين أو شريط لاصق.
- صب agarose 1.5 ٪ (الاميركي Bioanlytical ، شركة ، AB00972 - 00500) في لوحات 1X المتوسطة E3 مصبوب مع اسفين على شكل أحواض من شأنها أن تكون بمثابة طريقة سهلة لعقد أجنة خلال حقن (كما هو موض....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
Microinjection في الأجنة الزرد هي تقنية راسخة وقوية لاستكشاف دور جين خاص في مجال التنمية. وتشمل التطبيقات overexpression ، misexpression ، وضربة قاضية لفحوصات الجينات اهتمامك ، فضلا عن تحليل روكبي بين جينات متعددة. وقد Microinjection في الزرد المستخدمة على نطاق واسع لتوليد حيوانات معدلة وراثيا ، ورسم الخرائط مصير الخلايا في الأجنة المبكرة الأريمة 5،6،7،8،9. بالإضافة إلى ذلك ، تطبيق هذه التقنية هي بمثابة خطوة رئيسية في توليد الجرثومية خط الوهم بالطرق زرع الخلية 10.<.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة ومؤسسة PKD لZS. وأجريت التجارب على الحيوانات فقط وفقا لمركز يال الثروة الحيوانية (YARC) والمؤسسية رعاية الحيوان واستخدام المبادئ التوجيهية للجنة (IACUC).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
يتم سرد كافة المواد الأخرى في البروتوكول.
المراجع
- Westerfield, M. The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , 4th, University of Oregon. (2000).
- Nasevicius, A., Ekker, S. Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish. Nat Genet. 26, 216-220 (2000).
- Draper, B., Morcos, P., Kimmel, ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
![Microinjection من مرنا والعقاقير [أليغنوكليوتيد] Morpholino اسماك الزرد في الأجنة.](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F1113.jpg&w=3840&q=75)