ويقدم طريقة بسيطة وغير مكلفة وفعالة للتحضير للأجنة ذبابة الفاكهة تعيش التصوير التحليل. بروتوكول يتيح لنا الرطوبة والغاز والصرف لا ضغط الجنين ذبابة الفاكهة. هذا الأسلوب هو مناسبة لGFP القائم على التصوير المباشر للأجنة ذبابة الفاكهة باستخدام stereomicroscope أو تستقيم المجهر المركب.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
لإعداد ذبابة الفاكهة الأجنة لايف التصوير باستخدام بروتوكول إسقاط الشنق
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الأخضر ببروتين (GFP) المستندة timelapse الحية هي تقنية التصوير القوية لدراسة التنظيم الجيني للعمليات الحيوية مثل الأنسجة التشكل ، خلية التصاق الخلايا ، أو موت الخلية. يتم تصويرها بسهولة أجنة ذبابة الفاكهة معربا عن GFP باستخدام المجهر مجسمة أو مبائر. والهدف من أي بروتوكول الحية التصوير للحد من الآثار الضارة مثل الجفاف ونقص الأكسجين. وقد شملت البروتوكولات السابقة لإعداد أجنة ذبابة الفاكهة لحية التصوير تحليل وضع الأجنة dechorionated في مجال النفط والهالوكربون يقحم عليها بين الهالوكربون الغاز نفاذية الغشاء وساترة a
البروتوكول
إعداد
- جمع الأجنة على مستوى لوحات أجار عصير العنب 4. وهو ملائمة لاستخدام الآلية ذبابة الفاكهة جامع البيض (Flymax العلمية معدات المحدودة). متزامن باستخدام نظم مجموعات الجنين وتقليل عدد dechorionations التي يجب تنفيذها من أجل الحصول على أعداد كافية من الأجنة في هذه المرحلة التنموية المنشودة.
- إعداد شريحة dechorionation عن طريق ربط قطعة من الشريط على الوجهين إلى شريحة المجهر ، وإزالة الدعم من الشريط.
- إعداد غرفة التصوير العيش عن طريق ق....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نحن تصف طريقة جديدة لإعداد أجنة ذبابة الفاكهة لتحليل التصوير الحي ، الذي نسميه بروتوكول قطرة شنقا. لسوء الحظ ، فإنه ليس من الممكن استخدام بروتوكول إسقاط عقوبة الاعدام شنقا اذا عمل مع مجهر مقلوب. ويجب في هذه الحالة يمكن استخدام هذه التقنية يقحم (كما هو موضح في أعلاه مجردة) ، وضغط من الأجنة لا تزال مصدرا للقلق.
في التجارب حيث يتم قياس حجم وشكل خلية لحساب القوات التابعة لحركة التخلق ، واستخدام المجهر تستقيم وبروتوكو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
نحن نعترف بامتنان الدعم لBHR من خلال منحة ديسكفري فضلا عن أدوات البحث والمنح الصك من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (NSERC). نعترف أيضا H. أودا وذبابة الفاكهة بلومينغتون المخزون مركز لتوفير مخزونات الجينية التي تم استخدامها في تسلسل سبيل المثال التصوير الحي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
التجهيزات القياسية والمواد المطلوبة للتحضير لتصوير الأجنة يعيش باستخدام بروتوكول قطرة شنقا تتضمن العناصر التالية : شرائح المجهر ، coverslips (22 × 40 مم ، رقم 2) ، والشريط على الوجهين ، ملقط المجوهرات (دومون رقم 5 نمط ) ، الهالوكربون النفط سلسلة 56 وسلسلة 700 (الهالوكربون منتجات شركة) ، سكين الأداة أو شفرة حلاقة واحدة الحافة ، والمناديل الورقية ، مقص ، والماء المقطر ، الشريط العامة الغرض ، ومناسبة لتقديم الماصة ميكرولتر 20-40. بروتوكول التصوير العيش يتطلب أيضا مصنوعة خصيصا غرفة التصوير الحي. الذي أعد هذه بقطع 5 مم اعتقد البولي ورقة من البلاستيك لأبعاد شريحة المجهر القياسي (75 X 25 مم) ، واستخدام الدوار لإنشاء الاكتئاب العميق 3mm في الشريحة (20 X 55 مم). الوصول إلى stereomicroscope (تشريح المجهر) ، ومطلوب أيضا مصدر إضاءة من الألياف الضوئية.
المراجع
- Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila. J. Cell Biol. 149, 471-490 (2000).
- Schock, F., Perrimon, N. Cellular processes associated with germ band retracti....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
