Method Article

버딩 효모에 Replicative 수명 측정

DOI:

10.3791/1209

⸱

June 25th, 2009

 ,  , 
1Department of Biochemistry, University of Washington, 2Department of Pathology, University of Washington

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 문서에서 우리는 효모 어머니 세포의 replicative의 수명을 측정하는 일반적인 프로토콜을 제시한다.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

노화는 세포의 구성 요소와 사망률의 결과 organelles의 점진적 저하 특징 퇴행성 과정이다. 신진 효모

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

파트 1 : replicative 수명 분석을위한 종자 및 플레이트 준비

이 섹션은 replicative 수명 실험 및 수명 분석을위한 효모 세포의 준비에 사용하기 위해 고체 YEPD 접시의 준비에 대해 설명합니다.

  1. 적절한 무균 기술을 사용하여 culturing 효모 세포 및 replicative 수명 분석에 사용됩니다 YEPD 한천 플레이트를 (1 % 효모 추출물, 2퍼센트 bacto - 펩톤, 2 %의 한천, 2 % 포도당) 준비합니다. 당신은 수명 실험에서 분석하기 위해 모든 4-5 종자에 대한 최소한 2 접시를 준비한다. 접시는 수명 실험하기 전에 적어도 이일 준비 및 수명 분석을 시작하기 전에 건조 수 있어야합니다. 실험이 번호판을 털어놓지 않는 편입니다 4~5일 이내에 시작하지 않는 경우, 그들은 냉장 배양기에 위치하고 parafilm에 싸여 또는 dessication을 막기 위해 플라스틱해야합니다.
  2. 냉동 주식 및 YEPD 한천 플레이트에 하나의 식민지에 대한 승리의 효모 종자를 제거합니다. 최대 6 계통에 쉽게 동일 크기의 파이 모양의 웨지로 번호판을 분할하여 동일한 YEPD 접시 줄무늬 수 있습니다.
  3. 2 일 30 ° C에서 세포를 품어.
  4. 신선한 YEPD 접시에 보육 및 단일 식민지에서 패치....

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Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 작품은 엘리슨 의료 재단에서 MK와 BKK에 부여에 의해 지원되었다. MK는 노화에 엘리슨 의료 재단 신규 장학생입니다. 우리는 촬영하는 동안 도움을 Soumya Kotireddy 감사하고 싶습니다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
한천약Fisher ScientificDF0145-17-0 (214530)
박토-펩톤시약Fisher ScientificDF0118-17-0 (211677)
효모 추출물시약Fisher ScientificDF0886-17-0 (288620)
포도
시당

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. Recent developments in yeast aging. PLoS Genet. 3, (2007).
  2. Kaeberlein, M. Handbook of models for human aging. Conn, P. M. , Elsevier Press. Boston. 109-120 (2006).
  3. Smith, E. D.

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Replicative Life SpanBudding YeastYeast Mother CellsMicromanipulator TechniqueVirgin Daughter CellsLifespan Data SheetYeast Strain PreparationAgar Plate IncubationCell Division TrackingSurvival Curve Analysis

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