Summary
עכבר Stemgent DOX ועין מתנהלת TF הגדר Lentivirus ניתן לתכנת מחדש fibroblasts העכבר עובריים (MEFs) הנגרמת על גזע pluripotent (שב"ס) תאים. כאן אנו מדגימים את פרוטוקול לביטוי DOX-ועין מתנהלת תכנות מחדש של העכבר גורמי תעתוק Oct4, Sox2, Klf4 ו c-myc ליצור מושבות iPS המבטאים משותף סמנים MES pluripotency.
Abstract
באמצעות סט מוגדר של גורמי תעתוק ותרבות תנאי התא, יאמאנאקה ועמיתיו הראו כי רטרווירוס בתיווך מסירה ביטוי Oct4, Sox2, c-myc, ו Klf4 מסוגל גרימת pluripotency ב fibroblasts העכבר. 1 דיווחים מאוחרים יותר הוכיחו את השירות של דוקסיציקלין (DOX) ועין מתנהלת מערכת המסירה lentiviral עבור הדור של תאים iPS הן יסודי ותיכון ממגוון רחב של סוגים אחרים עכבר מבוגר תא סומטי. 2,3
מושרה גזע pluripotent (שב"ס) תאים דומים גזע עובריים (ES) התאים התפשטות מורפולוגיה, ואת יכולתו להשפיע על היווצרות תפלצת רוחנית. שני סוגי תאים יכול לשמש כחומר pluripotent החל לדור של תאים או רקמות הבדיל ברפואה רגנרטיבית. 4-6 תאים iPS יש גם יתרון בולט על פני תאים ES כפי שהם מציגים תכונות מפתח של תאים ES ללא הדילמה האתית של הרס העובר.
כאן אנו מדגימים את פרוטוקול reprogramming עובריים בעכבר פיברובלסטים (MEF) תאים עם העכבר Stemgent DOX הגדר ועין מתנהלת Lentivirus TF. כמו כן, אנו מראים כי העכבר Stemgent DOX ועין מתנהלת TF הגדר Lentivirus מסוגל להביע כל אחד גורמי תעתוק four על התמרה לתוך MEFs ובכך גרימת תא גזע pluripotent המדינה המציג את pluripotency סמנים אופייניים לתאים עובריים.
Protocol
Discussion
תוצאות אלו מראות כי DOX Stemgent ועין מתנהלת עכבר קבע TF Lentivirus ניתן להשתמש כדי לייצר ביעילות iPS מושבות ידי גרימת ביטוי אקטופי של transduced גורמי שעתוק ב fibroblasts העכבר עובריים. בעת תכנון ניסויים תכנות מחדש, כמה משתנים צריך להיחשב כדי לייעל את היעילות של תכנות מחדש. ראשית, ניתן לשנות את יחס פעיל וירוס אל תא המטרה (כלומר, משרד הפנים), במהלך שלב ההדבקה הראשוני כדי להגדיל או להקטין את היעילות התמרה, ובכך להשפיע על מספר וירוסים משולב באוכלוסייה תא היעד. שנית, להתאים את משך הזמן התאים נחשפים DOX יכולה להשפיע על היעילות של הדור המושבה iPS התא. שלישית, יכולת שגשוג של תאים היעד יכול להשפיע על תכנות מחדש, כמו תאים אשר ומתרחב וחלוקת הנוחות יותר תכנות מחדש. לבסוף, כאשר משנים את הפרוטוקול של מספרים או תאים שונים ברקמות שונות גודל המנות תרבות, מומלץ כי התא מספרי היעד להיות מותאם באופן יחסי על פני השטח של המנה תרבות.
Disclosures
המחבר, בראד המילטון, מועסק על ידי Stemgent המייצרת ריאגנטים ומכשירים המשמשים במאמר זה.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DOX Inducible Mouse TF Concentrated Lentifirus Set | Stemgent | 00-0003 |
References
- Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126, 663-676 (2006).
- Aoi, T., Yae, K., Nakagawa, M., Ichisaka, T., Okita, K., Takahashi, K., Chiba, T., Yamanaka, S. Generation of pluripotent stem cells from adult mouse liver and stomach cells. Science. 321, 699-702 (2008).
- Yu, J., Vodyanik, M. A., Smuga-Otto, K., Antosiewicz-Bourget, J., Frane, J. L., Tian, S., Nie, J., Jonsdottir, G. A., Ruotti, V., Stewart, R., Slukvin, I. I., Thomson, J. A. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science. 318, 1917-1920 (2007).
- Murry, C. E., Keller, G. Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development. Cell. 132, 661-680 (2008).
- Lerou, P. H., Daley, G. Q. Therapeutic potential of embryonic stem cells. Blood Rev. 19, 321-331 (2005).
- Wernig, M., Meissner, A., Foreman, R., Brambrink, T., Ku, M., Hochedlinger, K., Bernstein, B. E., Jaenisch, R. In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state. Nature. 448, 318-324 (2007).
