على microfluidics الرقمية هي تقنية تتميز التلاعب قطرات منفصلة (~ NL -- مل) على مجموعة من الأقطاب الكهربائية من تطبيق الحقول الكهربائية. انها مناسبة تماما للاضطلاع ، المتسلسل السريع ، المنمنمة الآلي فحوصات البيوكيميائية. هنا ، نحن تقرير منصة قادرة على أتمتة العديد من خطوات التجهيز البروتين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الرقمية على microfluidics لتصنيع البروتين الآلي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد برزت البروتيوميات السريرية والانضباط جديد مهم ، واعدا لاكتشاف المؤشرات الحيوية التي من شأنها أن تكون مفيدة للتشخيص المبكر والتشخيص للمرض. في حين أن الأساليب تختلف البروتين سريرية على نطاق واسع ، وهي سمة مشتركة هي الحاجة إلى (ط) استخراج البروتينات من السوائل غير متجانسة للغاية (أي مصل الدم كله ، الخ) و (ب) تجهيز البيوكيميائية واسعة النطاق قبل التحليل. هنا ، نحن تقرير رقمية جديدة على microfluidics (DMF) الأسلوب يستند دمج عدة خطوات المعالجة المستخدمة في البروتيوميات السريرية. وهذا يشمل استخراج البروتين ، resolubilization ، والحد ، والهضم ألكلة الأنزيمية. الرقمية على microfluidics هو الميكروسكيل معالجة السوائل التقنية التي يتم التلاعب قطرات نانولتر - ميكروليتر الحجم على سطح مفتوح. يتم وضع قطرات على رأس مجموعة من الأقطاب الكهربائية التي تكون مغلفة بطبقة عازلة -- عندما يتم تطبيق الجهد الكهربائي على الحبرية ، والرسوم تتراكم على جانبي عازلة. هذه الاتهامات بمثابة مقابض الكهروستاتيكية التي يمكن استخدامها للسيطرة على الموقف الحبرية ، ويتحامل سلسلة من الأقطاب الكهربائية في سلسلة ، ويمكن إجراء قطرات على الاستغناء ، ونقل ، دمج ، مزيج ، والانقسام على السطح. لذلك ، DMF مادة طبيعية ملائمة لنقل ، متسلسلة السريع ، ومتعددة الخطوات ، المنمنمة فحوصات البيوكيميائية الآلي. هذا يمثل تقدما كبيرا على الأساليب التقليدية (التي تعتمد على pipetting اليدوي أو الروبوتات) ، ولديه القدرة على أن تكون أداة مفيدة جديدة في البروتيوميات السريرية.
ساهم ميس J. جبرايل ، فيفيان N. وقا ، وستيف شيه CC بالتساوي على هذا العمل.
عنوان سيرجيو LS فريري الحالي هو في جامعة العلوم في فيلادلفيا يقع في 600 شارع 43 جنوب ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا 19104.
البروتوكول
الجزء 1 : تصنيع الأجهزة
- ركائز الزجاج النظيفة في حل سمكة البيرانا (3:1 اضرب حامض الكبريتيك : 30 ٪ بيروكسيد الهيدروجين). مغادرة ركائز في حل سمكة البيرانا لمدة 10 دقيقة مع التحريض المتكرر.
- بعد شطف في الماء (DI) منزوع الأيونات وتجفيف الغاز مع ركائز 2 N ، وضع ركائز داخل غرفة شعاع الالكترون لترسيب الكروم (سمك من 250 نانومتر).
- ليذوى الركيزة الكروم المغلفة ، وشطف في الأيزوبروبانول ثم يخبز على طبق ساخن لمدة 5 دقائق في 115 درجة مئوية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
عدم وجود نموذج موحد المناولة والتجهيز في وجود قيود البروتيوميات الرئيسية للحقل. بالإضافة إلى ذلك ، التقليدية مناولة الحاويات يشمل عينة macroscale متعددة ونقل الحل الذي يمكن أن يؤدي إلى فقدان العينة والتلوث. وهناك حل محتمل لهذه المشاكل هو تشكيل نظم متكاملة لمعالجة الاعتماد على عينة على microfluidics الرقمية 1 (DMF). في الأعمال السابقة ، فقد تبين أن تكون مفيدة DMF لإزالة الملوثات غير المرغوب فيها بكفاءة في غير المتجانسة التي تحتوي على البروتين الحلول. كان 2 وبا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
نشكر العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث (NSERC) وجمعية السرطان الكندية للحصول على الدعم المالي. وبفضل SCCS NSERC VNL يشكر أونتاريو العليا للمنح الدراسية (معرض النفط والغاز) برنامج المنح الدراسية للدراسات العليا. ARW بفضل اتفاقية حقوق الطفل لكرسي أبحاث كندا.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المراجع
- Abdelgawad, M., Wheeler, A. R. The Digital Revolution: A New Paradigm for Microfluidics. Adv. Mat. 21, 920-925 (2009).
- Jebrail, M., Wheeler, A. R. A Digital Microfluidic Method for Protein Extraction by Precipitation. Anal. Chem. 81, 330-335 (2009).
- Luk, V.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
