Method Article

Магнитно-резонансной спектроскопии живых Дрозофилы С помощью магии прядильной Угол

DOI:

10.3791/1710

⸱

April 15th, 2010

 ,  ,  , 
1NMR Surgical Laboratory, Department of Surgery, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, 2Shriners Burn Institute, 3Department of Radiology, Athinoula A. Martinos Center of Biomedical Imaging, Harvard Medical School, 4Molecular Surgery Laboratory, Department of Surgery, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта технология позволяет использовать с высоким разрешением магическим углом спиннинг протона МР-спектроскопия (HRMAS 1H-MRS) для молекулярных характеристик живых Дрозофилы С обычными 14,1 тесла спектрометр оснащен датчиком HRMAS.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Высокого разрешения магическим углом Спиннинг (HRMAS) протонной магнитно-резонансной спектроскопии (

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Часть 1: Подготовка дрозофилы для измерения HRMAS

  1. С помощью стандартных процедур flylab 1, собирают вновь eclosing мух в течение 3 дней и передачи им летать флаконах, содержащих свежие продукты летать. Инкубируйте собранных мух в течение 5 дней, чтобы мухи станут 5-8 дней непосредственно перед экспериментом. Только одного пола (обычно мужчины) используется для экспериментов.
  2. Используйте здоровые, неповрежденные дикого типа мухи сравнить с обработанными например, травмированные или генетически измененных мух 1.
  3. Место одного летит в 2 мл пробирки, содержащие часть (~ 0,2 мл) летучей пищи за 24 часов до экспе....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

За исключением последнего доклада возможности в естественных условиях МРТ у плодовых мушек 6, в естественных условиях MRS исследования у дрозофилы до сих пор не сообщалось. В настоящее время протокол, мы описываем реализацию романа в естественных условиях HRMAS 1 H-MRS подход для выявления биологически важных молекул. В частности, мы обнаружили липидов и малых метаболитов в живых мухи дрозофилы составляет 14,1 т в примерно 45 мин, что позволяет достаточн.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами установленными Massachusetts General Hospital Институциональный комитет Исследования животных Review Board.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была выполнена при частичной поддержке Национального института здоровья (NIH) предоставлять AI063433 к Лоуренс Г. Rahme, Национального института Институтов Здоровья (NIH) Центр Грант (P50GM021700) Рональда Г. Томпкинс (А. Ария Tzika, директор основные ЯМР), и больница Шрайнер по делам детей исследовательского гранта (# 8893) А. Ария Tzika. Мы благодарим Dionyssios Mintzopoulos кандидат за помощь в начальные фазы развития этого протокола и Овидиу С. Andronesi кандидат за помощь в TOBSY импульсной последовательности.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Реагент оксид дейтерияSigma-Aldrich7789-20-0
3-(триметилсилил)пропионовый-2,2,3,3-d4 кислотныйреагентSigma-Aldrich24493-21-8
агар, сахароза, дрожжи, кукурузная мукаFoodGenesee Scientifichttp://www.flystuff.com/
Oregon RS или Canton-S мухиВзрослые нахлыстовые лескиBloomington Stock centerhttp://flystocks.bio.indiana.edu/
КистьОборудование(размер 0)
2мл тубыОборудованиеFisher ScientificK749521-1590
Инкубаторы для мухОборудованиевысокая влажность (60-75%), регулируемая температура и цикл 12 ч:12 ч свет: темнота.
ЯМР-спектрометр Bruker Bio-Spin Avance (600,13 МГц) тройной резонанс 4 мм (1H, 13C, 2H) Зонд HRMAS Оборудование BrukerCorporation
Блок BTO-2000 в сочетании с пневматическим блоком MASОборудование BrukerCorporation
4 мм ротор из оксида циркония (емкость 50 мкл)ОборудованиеBruker CorporationB3829 (магазин Bruker)
MestReC (Mestrelab Research) Программное обеспечение1D анализ ЯМР-спектров
http://mestrelab.com/
SPARKY 3, Программное обеспечение USCF2DNMR spectraanalysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
  2. Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. <....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Magic Angle SpinningProton Magnetic Resonance SpectroscopyHigh Resolution Magic Angle SpinningDrosophila MelanogasterIn Vivo MRSMetabolite MeasurementNMR SpectroscopyRotor PreparationSpectral AnalysisBiomarker Identification

Related Articles