アミロイドのための前方脂肪パッドのFNAの実行と処理

Summary

脂肪パッドの吸引は、全身性アミロイドーシスの診断にアミロイドを検出するためには、他の方法に比べて優先、低侵襲、低コストのアプローチです。このビデオの記事では、最適な診断結果のための検体の適切な処理によって脂肪パッドの吸引を行うための手続きの概要を示しています。

Abstract

歴史的に、心臓、肝臓、および腎臓の生検はアミロイドーシスにおけるアミロイド沈着を証明するために行われた。この疾患の臨床症状は非常に可変と非特異的であるため、これらの生検のリスクは診断率のために余りに大きいです。このような皮膚や歯肉などの低生検のリスクを持っている他のサイトでは、、また、比較的侵襲的で高価です。さらに、これらの生検は常に診断を確立するために十分なアミロイド沈着を持っていない可能性があります。脂肪パッドの吸引は、低コストと最小限の罹患率との良好な臨床的相関関係を実証してきました。しかし、この手順を実行したり、変数やnonreproducible結果につながる吸引標本を、処理するための標準プロトコルはありません。組織でアミロイドを検出するための最も頻繁に利用さモダリティは、偏光顕微鏡を使用してコンゴレッド染色した切片上に青リンゴ色の複屈折である。この手法は、吸引材料のセルブロックの準備が必要です。残念なことに、アミロイドーシスの初期段階で受診した患者は大幅に脂肪パッドの吸引のコンゴレッド染色細胞のブロックのセクションの感度を減少させるアミロイドの最小限の量を持っている。そのため、電子顕微鏡による脂肪パッドの吸引の超微細構造の評価は、アミロイドの検出のために感度の向上を考えると、利用されるべきである。この記事では、コンゴレッドのセルブロックのセクションの染色および超微細構造識別の​​ための電子顕微鏡の両方を利用してアミロイドの検出のための前脂肪パッドの吸引を行うためのシンプルで再現性の手順を示しています。

Protocol

はじめ

全身性アミロイドーシスは、総称してアミロイドと呼ばれる様々なタンパク質の細胞外沈着を参照している非常に可変性疾患です。 βプリーツ構成でこれらのアミロイド線維の沈着が関与する臓器に応じて様々な臨床症状につながる。このような心臓、肝臓、および/または腎臓などの重要臓器の関与がある場合に全身性アミロイドーシスの臨床的に最も関連する症状が記載されています。歴史的に、これらの浸潤臓器は、アミロイドの存在を実証するために生検される。これらの適度侵襲的処置は出血を含む重大なリスクを運んだ。脂肪パッドの吸引は、以来、全身性アミロイドーシス¹のアミロイドの検出のための信頼性と非侵襲的方法を提供することが示されている。この手順では、小さな血管の壁²に乏しいアミロイドの沈着を評価するための線維脂肪の組織を取得するために局所麻酔下で前腹壁の皮下脂肪の脂肪吸引に本質的に同等です。

組織におけるアミロイドの同定のための最も頻繁に使用方法は、コンゴレッド染色した切片は、偏光顕微鏡³で視覚化するときに見られる特徴的な青リンゴ色の複屈折パターンのまま。脂肪パッドの吸引が行われるときは、コンゴレッド染色は、直接塗抹スライドまたは吸引脂肪組織の細胞ブロック標本のどちらかで行うことができます。しかし、アミロイドーシスの初期段階で患者が大幅に^4,5コンゴ赤染色細胞のブロックのセクションの感度を減少させるわずかなアミロイド沈着を、持っている。電子顕微鏡による脂肪パッドの吸引の超微細構造評価は、より良い再現性と感度の向上^4とを有し^ている。したがって、セルブロックの両方を調製するため、電子顕微鏡^2を実行するためのすべての脂肪パッドの吸引を提出することをお勧めします。

脂肪パッドの吸引は、比較的低コストおよび全身性アミロイドーシスの診断に組織を得るための非侵襲的方法である。この記事では、電子顕微鏡によるコンゴレッド染色と微細構造評価の両方に検体を提出するサンプルの処理についての詳細と一緒に脂肪パッドの吸引の手順を説明します。このビデオでは、我々は最適な診断材料を取得するために、この再現性と簡単な手順を示しています。

1。前歯部脂肪パッドのFNAの実行

ローカルエリアのA.の麻酔（図1＆2）

1. アルコール綿棒または特定の機関によって好ま皮膚洗浄剤を使用して、正中線と臍下（図1）の外側腹部の下腹部の領域で皮膚を洗浄。
2. としてマーキングペンで図1に示す2 × 2インチ約菱形形状の領域をマークします。
3. 1％の吸引約10 mLを18G針でリドカイン。 25G 1を取り付けます½シリンジにインチ針を。液体を分配しても気泡が存在しないされるまでプランジャーを押しながら直立シリンジをタップして、任意の閉じ込められた空気を削除します。
4. 図2に示すように、既にマーク菱形領域の境界に沿って麻酔する。ちょうどポイントで皮膚の下に25G針を挿入して起動し、慎重にX.を使用すると、容器内にないことを保証するために注射器のプランジャーを後方に引いて指すように、皮下針を押してください。その後徐々に針は、針がポイント（図2A3）で皮膚から出てくるさせることなく参照するように撤退しながらリドカインの2.5mLの（10 mLシリンジのリドカインの¼約）まで潜入するためにプランジャーを押してください。針でも、皮膚の下に点Y（図2A4）に向かって方向を変更するとポイントY（図2B1）に皮下針を押してください。以前と同じようにゆっくりとポイントを介して針を引き出しながら、針が血管内にないことを確認し、リドカインの約2.5 mLを分注する（2B4〜図2B3）。 YにXとB（2D4〜図2C1）に点Bから点Bと調剤リドカイン皮下から始まる同様の手順を繰り返します。呵責からの出血を防ぎ、無菌ゲージピースの会社のアプリケーションによるB。
5. これで、面積は軽く、隣接する無麻酔皮膚と比較することによって、先端/綿のガーゼ片のコーナーで麻酔菱形の中で皮膚に触れることによって麻酔であることを確認することができます。

B.は、脂肪パッドの吸引（図3）の実行

（前の脂肪パッドの吸引のパフォーマンスへの局所麻酔の適用は、地域や個人の好みに応じて、バイパスされる可能性があります。前方脂肪パッドの吸引のための適切に行わFNABの手順が1つの刺し傷で完了することができます。しかし、個々の患者の痛みのしきい値に応じて、皮下脂肪組織に前後に18G針を操縦するのは比較的distresです歌う。ここで説明する麻酔の方法は、25G針で2つだけの呵責に効果を発揮し、手順に耐性が向上して痛みをaverts。）

1. 10mLのシリンジに18G 1 ½インチの針を組み立てます。適切なアプリケーションと真空のリリースのための注射器のグリップ（"FNABグリップ/銃"）で注射針を装着してください。
2. クレンジングと麻酔菱形の領域（図3a）内に皮下脂肪に針の先端を挿入します。
3. 完全真空（図3b）を生成するために皮下組織に挿入された針と注射器のプランジャーを引っ込める。
4. 真空を維持し、皮下脂肪（3iの〜図3C）への様々な方向に前後に針を操縦。各ストロークは、針が皮膚から出てくるさせることなく、選択された針の長さをできるだけ長くしてください。最大のサンプリングは、各ストローク方向（図3iを）変えることによって実現される。漿膜への接線と腹腔のパンクチャを避けるために皮膚表面に平行な針の方向を維持することが重要です。
5. 線維脂肪の組織は、注射器内に蓄積する。一度十分な線維脂肪の組織の断片（フラグメントを豊富に含む血液の混合試料の最大1​​ mL）を取得され、完全に真空を解放し、針（3K図）を取り外します。
6. 患者またはアシスタントが血液の溢出を防止するためのガーゼのパッドを持つプロシージャの領域でしっかり圧力を適用しています。

2。検体処理

1. 電子顕微鏡のためのグルタルアルデヒド溶液（図4B）で線維脂肪の組織の少なくとも5から6の断片を配置。
2. 制度的なプロトコルに応じて、線維脂肪の組織の断片のいくつかの塗抹標本は、2つのスライド（図4A）との間で、それらを拡散させることによって調製することができる。
3. 残りの材料は、シリンジ内の血栓（これが凝固時間に応じて、5〜7分かかる場合があります）（図4C）に許可されています。
4. 凝固した線維脂肪の組織の材料が注射器とフリーフローティング（図4C2）の壁から外れているように注射器で10％ホルマリンを吸引除去する。注射器（図4C3）からプランジャーを取り外し、ノズルの端（図4C4）反対側のシリンジの開放端から10％ホルマリン容器にクロテッド線維脂肪の組織を移す。
5. 適切な容器にラベルを付け、電子顕微鏡のためのグルタルアルデヒドを提出し、H＆Eセクションとコンゴレッドのためのホルマリンは、偏光顕微鏡下で評価するために染色。塗抹標本が準備されている場合、それらは個々の実験室のプロトコルに従って処理される可能性があります。

図1。前脂肪パッドのFNABのために麻酔になるエリア。

図2。ローカルエリアの麻酔。

図3。前脂肪パッドのFNABを実行。

図4。前脂肪パッドの処理は、アミロイド沈着を検出するための実験室に提出する吸引。

3。代表的な結果

図5。線維脂肪の組織フラグメントの小血管の壁にアミロイド。線維脂肪の組織はホルマリン加工、パラフィンコンゴレッドで染色し、埋め込 ​​み、および光学顕微鏡を偏光により調べた。小血管の壁にアミロイドは、アップルグリーン複屈折（白い矢印）を示しています。

図6。アミロイドーシスを欠いている組織は。青リンゴ色の複屈折は、アミロイドーシスのない別の患者の組織中に存在しない。コラーゲン線維の青の複屈折は（白矢印）、ほぼすべての標本で、通常は存在する。

図7。血管壁にアミロイドと一致して線維。血管壁にアミロイドが形成されたストレート、非分岐、ランダムに散らばって80〜10 nmの直径の線維の電子顕微鏡写真。

Discussion

アミロイドーシスの診断は、通常、腎臓、肝臓、および/または心臓などの影響を受ける臓器の組織生検によって達成される。このアプローチは、高い診断率を持っている、しかし、侵襲的であり、出血^2を含む合併症に関連付けることができます。直腸、歯肉、および骨髄生検は、1960年代^6,7,8で、比較的少ない侵襲的なアプローチとして、診断のために好まれた。腹部の脂肪パッドの吸引は、全身性アミロイドーシス¹の組織診断のための安全、低侵襲、シンプル、そして安価な手順として、1973年に報告された。しかし、取得された検体の処理に手順とアプローチの詳細はコヒーレント報告されていません。このビデオと記事は、ステップでの手順のステップを説明します。

脂肪パッドの吸引でアミロイドを検出するためのアプローチは、同様に、また^{、1,5,6,7,8を} 、様々なアプローチを比較し、評価するいくつかの研究でも標準化されていません。コンゴレッド染色で前方の脂肪パッドの吸引の評価が特に乏しいのアミロイド沈着⁵のアミロイドーシスの早期の場合には下の観察者間の再現性と影響を受けにくいです。免疫組織化学では、ホルマリン固定パラフィン包埋細胞のブロックのセクションで行われ、細胞診塗抹標本上で実行コンゴ赤色蛍光は、診断感度^9,10を改善すること^が報告されている。電子顕微鏡では脂肪体吸引^4,5の線維脂肪の組織における微小血管の壁にわずかアミロイド線維の検出と同定を向上させます。この情報に基づいて、この記事では、セルブロックを（診断リンゴ緑色の複屈折偏光顕微鏡下でコンゴレッド染色したセルブロックセクションの評価のためとも示されている免疫組織化学としての）と電子顕微鏡を準備する試料の処理について説明します。しかしながら、アミロイドのための試料の評価のために選択されたアプローチによって、それは細胞診塗抹標本作製、セルブロックの準備、および電子顕微鏡のための処理を施すことができる。いくつかの研究室では、吸引線維脂肪の組織の断片から調製し、蛍光^10を研究するためにコンゴレッドで染色した塗抹標本上でテストを実行。

一般的に遅くアミロイドーシスでは、コンゴレッド偏光顕微鏡と光学顕微鏡では十分な場合もありますが、セルブロックのセクションの偏光顕微鏡による疾患コンゴレッド染色の初期段階で脂肪パッド吸引^4,5,11に対して感応性が低く、信頼性です。 。チオフラビンTを含むその他の特別な汚れは、同様の制限事項を考慮に入れて使用することができます。アミロイドを検出する他のアプローチは、コンゴレッド偏光顕微鏡と蛍光¹⁰のアミロイドのための吸引塗抹標本の評価が含まれています。我々の経験ではこの方法の方が再現可能です。電子顕微鏡によるアミロイドのための脂肪パッドの血管の評価は、これらの制限を^4,11を克服^{しています} 。アミロイドのさらなる特徴は、免疫電子顕微鏡¹²で報告されているが、これらのメソッドは非三次医療の設定で広く利用できない場合があります。

吸引の手順を実行するために使用する針は、（例えば、- 14G）、（21 - 25G）ファイン中間（18 - 20G）、および大規模な¹¹にそれらのゲージサイズに応じて分類されることがあります。前方脂肪パッドの願望は、中間（18〜20G）から罰金^{（21〜22G）2,10}まで可変ゲージを使用して実行することが報告されている。腫瘤病変のほとんどは、セルのブロックに対して追加のサンプルを取得するために、広いゲージの針（例えば18Gなど）と追加のパスと一緒に良い細胞診塗抹標本を得るために細かいゲージの針（例えば25Gなど）で吸引されています。

前脂肪パッドの吸引時には、凝集線維脂肪の組織は、細かい針でも吸引していません。セルブロックの準備と電子顕微鏡では脂肪吸引の線維脂肪の組織フラグメントの小血管壁の評価のために重要である。広いゲージの針（例えば18Gなど）の診断に十分な材料^2,10を得るために推奨されています。手順は、従来のFNABに匹敵するように、脂肪パッドの吸引は、広いゲージの針が⁵それを実行するために使用されていてもFNABと呼ばれています。

Materials