이 문서는 인간의 암 세포 라인의 전이성 잠재력을 결정하는 데 사용되는 실험적인 전이 분석의 절차를 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
전이는 암 환자에서 사망의 주요 원인입니다. 전이의 메커니즘을 이해하기 위해서, 실험적인 전이 분석은 immunodeficient 마우스를 사용하여 설립되었습니다. 이 문서는 샘플 준비, 정맥 주사, 그리고 폐 metastases에서 culturing 세포를 포함하여이 분석에 관련된 절차를 delineates. 간단히, 인간의 암 세포의 미리 정해진 숫자는 준비가되어있다
프로토콜
1. 샘플 준비
- 성장 요인 또는 FBS 그들의 특정 미디어에 ~ 70 % 합류 (예 : MC - 1 세포를 10 % FBS와 DMEM)에 세포를 성장. 접시에서 미디어를 대기음 부드럽게 1 X PBS (나 2 HPO 4 NaCl 8 G / L, KCl의 0.2 g / L, 1.15 g / L 0.7 H 2 O, KH 2 PO의 0.2 g / L로 여러 번 씻어 4, 산도 7.3).
- 대기음 PBS가와 versene에서 0.05 %의 트립신 (0.014 g / 페놀 빨간색과 1 X PBS, pH를 7.2에서 0.2의 G / L EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) - 나의 L) 2 ML를 추가합니다. 부드럽게 접시에서 세포 분리를 촉진하기 위해 플레이트를 바위. 현미경 세포를 관찰합니다. 그것은 일반적으로 분리하는 세포에 대한 2-5분 걸립니다.
- 트립신 활동을 담금질하고 50mL 팔콘 튜브에 세포를 수집하는 FBS (또는 대두 트립신 억제제)가 포함된 미디어의 충분한 볼륨을 추가합니다. hemacytometer를 사용하여 셀을 계산합니다. 깨끗한 hemacytometer에 세포 현탁액의 10μL를로드합니다. ML 당 세포의 숫자는 10 ....
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토론
전이는 암 환자에서 사망의 주요 원인입니다. 그들의 주요 loci, 유통에 자신의 항목 (intravasation), 순환 (넘쳐 흐름)에서 자신의 종료, 그리고 먼 장기에 생존과 성장에서 암 세포의 분리 : 그것은 네 개의 주요 단계를 포함한다. 인간의 전이는 느린 과정으로 간주하고 종종 지연 년 이후 각성입니다. 적시에 자사의 진행을 연구하기 위해 위의 비교적 신속하게 실험적인 분석은 immunodeficient 생쥐에서 설립되었습니다. 4 설립 이래, 그것이 다른 전이성 능력을 가진 세포를 분리하기 위해 효과적으로 사용되고 있습니다, 최대 - 아래 - 규제하는 동안 아르 유전자를 식별 전이 1,2,5, 그리고 전이 동안 이러한 유전자의 인과 관계 역할을 테스트 3.
이 분석에서 가장 어려운 단계는 꼬리 정맥에 세포를 주입하는 것입니다. 그것은 주입 기술을 마스터하는 방법을 걸립니다. 비록 경험이 연구자를위한,.......
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감사의 글
이 프로토콜은 테스트 및 박사 리차드 하인즈 (MIT)의 실험실에서 처음에 최적화되었습니다. 기금은 NYSTEM 아이디어 수상 (LX)을하고 루트 L. Kirschstein 내셔널 리서치 서비스 수상 (LX)를 제공합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | |
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | |
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| KCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 6838-04 | |
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 7896-04 | |
| KH2PO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 7100-12 | |
| 페놀 레드 | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| EDTA-Na | EMD Millipore | 4010 | |
| 트리판 블루 | Invitrogen | 15250-061 | |
| Trypsin 2.5% | Invitrogen | 15090-046 | |
| 에탄올 | Ultrapure | 200-CSGP | |
| 50 ml Falcon 튜브 | VWR international | 89039-656 | |
| 마이크로 원심분리 튜브 | Axygen Scientific | MCT-175-C | |
| Falcon 70μm 세포 스트레이너 | BD Biosciences | 352350 | |
| 5ml Falcon 배양 튜브 | VWR international | 60818-576 | |
| 혈구계수기 | Hausser Scientific | 15170-208 | |
| 1 ml 주사기 | BD Biosciences | 329650 | |
| 30 ½ 게이지 바늘 | BD Biosciences | 305106 | |
| 마우스 보정기 | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | |
| 수술용 가위 | Fisher Scientific | 08-940 | |
| 포셉 | Fisher Scientific | 08-902 | |
| 해부 현미경 | Nikon Instruments | SMZ1500 | |
| 벤치탑 원심분리기 | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 75003491 |
참고문헌
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....
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재인쇄 및 허가
