هنا ، نحن تصف غير الغازية ثنائية الفوتون نهج المجهري (2P) لدراسة الكريات البيض صاروخ موجه في قاطع الطريق الماوس. نحن مناقشة الجوانب التقنية لدينا نسيج التحضير والتصوير والمشي القارئ من خلال تجربة نموذجية من الأولية التي أنشئت لتنفيذ وجمع البيانات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
غير الغازية تصوير الزاجل كريات بيضاء والهجرة في الجسم الحي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ثنائي الفوتون (2P) المجهري هو التصوير عالية الدقة التقنية التي تم تكييفها على نطاق واسع من قبل علماء الأحياء. قيمة المجهري 2P هو أنه يقدم معلومات غنية spatiotemporal بشأن السلوكيات داخل أنسجة الخلايا في فئران سليمة وحية. التوظيف الكريات البيض تلعب دورا هاما في الدفاع المضيف ضد العدوى وعندما لم يتم التحقق منه ، يمكن أن تسهم في الأمراض الالتهابية والمناعة الذاتية. دراسة الكريات البيض في الجسم الحي التوظيف يشكل تحديا تقنيا منذ خلايا تتحرك بسرعة داخل الأوعية تقع عميقا داخل أنسجة تشتت الضوء. حتى الآن ، ومعظم الدراسات التصوير intravital الجراحية تتطلب تحضيرا لفضح الأوعية الدموية والأنسجة. لتجنب تلف الأنسجة والالتهابات الناجمة عن الجراحة نفسها ، وهنا ، نحن تصف غير الغازية نهج التصوير وحيدة الخلية والتي يمكن استخدامها لدراسة الكريات البيض في الاتجار قاطع الطريق الماوس والسلاميات. نحن مناقشة الجوانب التقنية لدينا 2P التحضير والتصوير والمشي القارئ من خلال تجربة نموذجية من الأولية التي أنشئت لتنفيذ وجمع البيانات.
البروتوكول
1. الحيوان التحضير :
هذا البروتوكول يستخدم الكبار البالغات LysM - eGFP الفئران ، والتي هي fluorescently المسمى العدلات والضامة عن طريق التعبير عن eGFP 1.
- وسم الأوعية الدموية :
لتصور الأوعية الدموية ، 15μl الكم من النقاط غير المستهدفة (655nm) والمخفف الى 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني وحقن في الوريد إلى 10-30 دقيقة الماوس قبل التصوير. - التخدير :
- <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا البروتوكول الفيديو نظهر إجراءات التصوير 2P غير الغازية من الكريات البيض في التوظيف استجابة للالتهاب.
وقاطع الطريق هو موقع الكلاسيكية الفسيولوجية لدراسة التهاب مثل مرض الحساسية ، والعدوى والمناعة الذاتية 4-7. 2P التصوير يقدم صورة مفصلة لخطوات متميزة في مسارات الاتجار الكريات البيض ، والمتداول من التصاق في الأوعية الدموية لالكيميائي لمواقع ظيفة المستجيب. لقد وجدنا أن الكريات البيض يختلف التوظيف اس.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
أجريت جميع التجارب وفقا لبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة الدراسات الحيوانية من جامعة واشنطن في سانت لويس.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 - 3155-53502 واشنطن اتفاق بحوث الطبية الحيوية جامعة فايزر.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| إيزوفلوران، دستور الأدوية الأمريكي (USP) | Butler Animal Health Supply | 029405 | |
| نقاط كمومية غير مستهدفة بطول موجي 655nm | Invitrogen | Q21021MP | |
| جسيمات حيوية BioParticles من E. coli مقترنة بالتتراميثيل رودامين | Invitrogen | E2862 | |
| Listeria monocytogenes (Lm) | Reference 2 | ||
| هلام سريع (Quick gel) | Duro | ||
| مرهم Puralube Vet | Pharmaderm Animal Health | ||
| محاقن إنسولين | BD Biosciences | 08290-3284-38 | |
| PBS | Thermo Fisher Scientific, Inc. | SH30256.02 |
المراجع
- Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96, 719-726 (2000).
- Zinselmeyer, B. H., Lynch, J. N., Zhang, X., Aoshi, T., Miller, M. J.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
