Bu makalede, 50 mikron lümen cam kılcal iğneler yapmak için bir yöntem gösteriyor. Bu teknik, beyin hasarı önemli ölçüde azaltır, ilaç pasif difüzyon en aza indirir ve kemirgen beyin içine hassas bir hedefleme sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İlaçlar, Viral Vektörler, veya Hücre Transplantasyon teslimi için Microinjections Derin Beyin Yapıları Hedefleme
Bu makalede
Özet
Özet
Beyin parankimi içine Microinjections ilaçlar, viral vektörlerin veya hücre nakli sunmak için önemli prosedürler vardır. Bir enjeksiyon iğnesi, yörünge sırasında ürettiği beyin lezyonu sadece beyin küçük ama aynı zamanda bazen çoklu enjeksiyon ihtiyaç vardır özellikle fare beyinde önemli bir husustur. Biz burada cam kılcal iğneler beyin hasarı önemli ölçüde azaltır ve kemirgen beyin içine hassas bir hedefleme sağlar 50 mikron lümen üretmek için bir yöntem gösteriyor. Bu yöntem, küçük hacimli bir teslimat (20 100 nl), kanama riskini azaltır sağlar ve beyin parankimi içine ilaç pasif difüzyon en aza indirir. Farklı boyutta kılcal cam tüpler kullanarak veya iğne lümen değişen, çeşitli madde ve hücreler enjekte edilebilir. Cam kapiller tüp ile Microinjections enjeksiyon teknikleri ve küçük kemirgenler minimum teminat hasar hedefleyen derin beyin önemli bir iyileşme temsil eder.
Protokol
- Fare ameliyat öncesi cam iğneler olun:
- Mikropipet çektirmenin kapiller cam tüp koyun.
- Yerelleştirilmiş alan cam tüp yumuşatmak için cam tüp ortasında ısıtın.
- Uzunlamasına eksen boyunca cam tüp, yerelleştirilmiş alan cam tüp çapı bir azalma neden olmak için yeterli bir başlangıç mesafe gerin.
- Cam tüp kalıncaya kadar uzanan tutun. Bu şekilde, iki özdeş tek varil iğneler elde edilir.
- Bir microforge cam iğne koyun. A 30 ° açı yeterli konik ucu.
- Her iğne doğru iç çapı olduğu mikroskop altında kontrol edin. Hidrofilik ilaçların çoğu için bir iç çapı 30-50 mikron idealdir (Şekil 1).
- Mineral yağ ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu yöntem beynin içine çok hassas yerlere ilaçlar veya viral vektörlerin en sunmak için çok yararlı olan bu video gösterdi. Bu tekniğin başlıca avantajlarından bazıları hedefleme nokta enjeksiyonları doğruluğu ve beyin lezyon ve sistem zarar 1, 2, 5, 6 küçük boyutlu güvenilirliğini. Sonra teknik mistargeting aralığında standardize 50 mm veya 1, 2 daha az. Hücre nakli aynı zamanda daha geniş, 100-150 mikron 7-9, iğneler kullanılarak yapılabilir. Bu nedenle verimli hücre teslim hücre nakli.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
RG-P CONACyT s hibe (CB-2008-101.476) ve FRABA (686/10) tarafından desteklenmiştir. AQ-H Ulusal Sağlık Enstitüsü, Howard Hughes Tıp Enstitüsü, Robert Wood Johnson Vakfı ve Maryland Kök Hücre Vakfı tarafından desteklenmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kılcal cam tüp | Wiretrol I | 5-000-1001 | |
| Mikropipet çekici | Kopf Instruments | Model 730 | |
| Mikroforge | World Precision Instruments, Inc. | Model 48000 | |
| Mineral yağ | MSDS | M7700 | |
| Yüksek vakum gresi | Dow Corning | 05054-AB | |
| Anestezi: %2,5 Avertin | 2,2,2-tribrom–etanol + tert-amil alkol, 1:1 a/h | ||
| Isıtıcı ped | Mastex | Model 900 | |
| Stereotaktik cihaz | Kopf Instruments | Model Kopf-900 | |
| Cerrahi bistüri ucu # 15 | Medi-Cut | ||
| Mikro matkap | Ideal Micro Drill | 67-1000 | |
| Hassas pens | Fine Science Tools | ||
| 1-μL Mikropipet | Rainin | ||
| Parafilm M. | |||
| Cerrahi mikroskop | Carl Zeiss, Inc. | Contraves sistemli Vasiorkop | |
| Mikroenjektör | Narishige International | Model MO-10 |
Kaynaklar
- Menn, B. Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain. J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).
- Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
