임베디드 세포와 어떤 표면을 포함하는 모듈 불리는 원통형 콜라겐 젤을 사용하여 마이크로 조직의 생성은 내피 세포로 코팅됩니다.
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이 논문에서
요약
초록
이 프로토콜은 모듈이라는 마이크로 조직의 유형의 제조에 대해 설명합니다. 모듈 접근 방식은 유니폼, 확장성과 vascularized 조직을 생성합니다. 모듈은 콜라겐뿐만 아니라 다른 gelable 또는 crosslinkable 재료 만들 수 있습니다. 그들은 제조시 직경 길이 약 2mm와 0.7 mm 있지만 임베디드 세포 또는 경우 모듈이 내피 세포로 코팅 아르와 크기로 축소. 개별 모듈은 임베디드 세포가 산소와 다른 영양소의 확산 제한 내에 있지만 모듈 perfusable 아르 더 큰 조직을 형성하기 위해 함께 포장 수있는 정도로 작은 수 있습니다. 그들이 복잡한 조직을 형성하기 위해 함께 모여되기 전에 다른 셀 형식에 포함된 또는 모듈에 코팅된 수 있기 때문에 이러한 조직 건설에 모듈입니다. 모듈을 만들기 위해 세 가지 주요 단계가 있습니다 : (1) 콜라겐을 중화하고 그 안에 세포를 포함, 튜브 (2) 겔화 콜라겐과 내피 세포와 모듈과 (3) 코팅 모듈을 절단.
프로토콜
관 1) 준비
- 폴리에틸렌 튜브 2 ~ 3 미터 길이 (0.76 mm ID를 X 1.22 mm OD)를 자르고.
- 튜브의 한쪽 끝을로 20 G1 바늘에 실을 꿰다.
- 변환기 자체 밀봉 주머니 (7 1 / 2 "X 13")에 코일 튜빙 장소. 튜빙의 두 끝을은 가방의 unsealed 끝에 위치 및 가스 살균 테이프와 장소에서 녹화한다.
- 인감 가방 및 가스 소독.
콜라겐 2) 중화
참고 : 콜라겐 1 ML는 폴리에틸렌 튜빙의 약 2 미터 채워집니다.
- 15 ML 원뿔 관에 튜브를 원하는 길이에 필요한 콜라겐의 필요한 양을 놓고 얼음 계속.
- 128 UL 추가 10X α - 멤 당 ML 튜브와 반복 솔루션을 pipetting으로 혼합하는 콜라겐니다. 참고 : (1) 솔루션은 산성의 콜라겐에 α - 멤 같은 노란색이 혼합된 것입니다 설정해야하며 (2) 혼합시 거품을 최소화하려고합니다.
- 콜라겐은 7.4의 산도를 가지고 때까지 0.8 M 나트륨 중탄산염을 추가하여 콜라겐을 중화. 산도의 추가 나트륨 중탄산염에 대한 일반적인 추정을위한 노란색 콜라겐 솔루션은 밝은 핑크색 ....
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토론
우리는 서로 다른 세포 유형 1-11와 임베디드 모듈을 사용하여 여러 가지 마이크로 조직을 가공했습니다. 우리는 성공적으로 기본 cardiomyocytes, 아일 레츠, 지방 줄기 세포 및 mesenchymal stromal 세포뿐만 아니라, HepG2, NIH 3T3 및 복제 구 간 세포를 포함한 여러 세포 라인을 내장했습니다. 우리는 쥐 대동맥 내피 세포, 인간 제대 정맥 내피 세포 및 인간의 microvascular 내피 세포를 포함한 내피 세포의 여러 종류의 모듈을 코팅합니다. 모듈은 또한 콜라겐과 poloxamine 고분자 또는 약물 eluting microspheres를 (그림 4)이있는의 혼합물로 제작되었습니다. 시험 관내 assays 여러가 immunofluorescence 서양 얼룩, angiogenesis, 알라마 파란색 증식 및 라이브 / 죽은 assays (그림 5)를 포함한 모듈과 호환되도록 표시되었습니다. 그들은 또한 microfluidic 챔버 (그.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
기금은 보건 국립 연구소 (EB 001013), 자연 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회 및 건강 연구 캐나다 연구소에 의해 제공되었다. 우리는 그녀의 전문 박사 AP 맥기건 감사와 모듈의 개발에 도움이됩니다.....
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Intramedic tubing PE60 | BD Biosciences | 427416 | 모듈의 직경을 변경하기 위해 서로 다른 직경의 튜빙을 사용할 수 있음 |
| 인산완충식염수 (PBS) | GIBCO, by Life Technologies | 20012-027 | |
| Trypsin-EDTA | GIBCO, by Life Technologies | 25200-072 | |
| Purcol 산성화 콜라겐, 3 mg/mL | Cedarlane Labs | 5005-B | |
| 탄산수소나트륨 | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| 20G 바늘 | BD Biosciences | 305175 | 바늘의 직경은 튜빙의 직경과 유사해야 함 |
| 3 mL 주사기 | BD Biosciences | 309585 | |
| 15 mL 튜브 | BD Biosciences | 352096 | |
| 50 mL 튜브 | BD Biosciences | 352070 | |
| Convertors Self-Seal 파우치 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | |
| 10 ml Wide Tip 혈청학적 피펫 | BD Biosciences | 357504 | |
| 10 ml 혈청학적 피펫 | BD Biosciences | 357551 | |
| 5 ml 혈청학적 피펫 | BD Biosciences | 357543 |
참고문헌
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....
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재인쇄 및 허가
