יצירה של מיקרו רקמות באמצעות ג'ל קולגן גלילי, המכונה מודולים, המכילות תאים אשר מוטבעים משטח מצופה בתאי האנדותל.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
ייצור של מיקרו-רקמות באמצעות מודולים של קולגן ג'ל התאים המכילים
במאמר זה
סיכום
תקציר
פרוטוקול זה מתאר את ייצור של סוג של מיקרו הרקמות נקרא מודולים. הגישה מודול מחולל אחיד, רקמות מדרגי vascularized. המודולים יכולים להיות עשויים קולגן כמו גם חומרים gelable או crosslinkable אחרים. הם כ -2 מ"מ אורך ו 0.7 מ"מ קוטר על ייצור אבל לכווץ בגודל עם תאים מוטבע או כאשר המודולים הם מצופים בתאי האנדותל. מודולים בנפרד הם קטנים מספיק שתאי המוטבע בתוך מגבלת דיפוזיה של חמצן וחומרים מזינים אחרים, אבל מודולים יכול להיות ארוזים יחד כדי ליצור רקמות גדול כי הם perfusable. רקמות אלה מודולרי בבנייה כי תאים מסוגים שונים יכול להיות מוטבע או מצופה על מודולים לפני שהם ארוזים יחד כדי ליצור רקמות מורכבות. ישנם שלושה שלבים עיקריים שהופך את המודולים: (1) לנטרל את הקולגן הטבעה תאים זה, (2) gelling קולגן בצינור חיתוך מודולים ו (3) ציפוי מודולים עם לתאי אנדותל.
פרוטוקול
1) הכנת Tubing
- חותכים 2-3 מ 'אורך של צינורות פוליאתילן (0.76 מזהה מ"מ x 1.22 מ"מ OD).
- נושא מחט 20 G1 לתוך קצה אחד של הצינור.
- בצינור קויל מקום בנרתיק הממירים עצמית חותם (7 1 / 2 "x 13"). שני הקצוות של הצינור צריך להיות ממוקם בסוף unsealed של התיק והדביקה במקום עם הקלטת עיקור גז.
- תיק חותם וגז לעקר.
2) נטרול של קולגן
<....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
יש לנו מספר מפוברק שונים מיקרו רקמות באמצעות מודולים מוטבע עם סוגי תאים שונים 1-11. יש לנו מוטבע בהצלחה cardiomyocytes העיקרי, איים, בתאי גזע השומן ותאי סטרומה mesenchymal כמו גם כמה שורות תאים כולל HepG2, NIH 3T3 ו 9 שיבוט תאים בכבד. יש לנו מצופה מודולים עם מספר סוגים של תאים אנדותל כולל אבי העורקים התאים עכברוש אנדותל, אדם וריד הטבור לתאי האנדותל האנושיים לתאי אנדותל כלי הדם. מודולים יש גם הפיק בתערובת של קולגן פולימר poloxamine או משחררי תרופה המכילה microspheres (אי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
תודות
המימון ניתן על ידי המכון הלאומי לבריאות (EB 001,013), מדעי הטבע וההנדסה מועצת המחקר של קנדה קנדה המכונים לחקר בריאות. אנו מודים לד"ר AP מקגיגן עבור המומחיות שלה לסייע בפיתוח של מודולים.....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צינורית Intramedic PE60 | BD Biosciences | 427416 | ניתן להשתמש בקוטר צינורית שונה כדי לשנות את קוטר המודולים |
| מלח פוספט רב-ערכי (PBS) | GIBCO, by Life Technologies | 20012-027 | |
| Trypsin-EDTA | GIBCO, by Life Technologies | 25200-072 | |
| קולגן מחמיץ Purcol, בריכוז 3 mg/mL | Cedarlane Labs | 5005-B | |
| סודיום ביקרבונט | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| מחט 20G | BD Biosciences | 305175 | קוטר המחט צריך להיות דומה לקוטר הצינורית |
| מזרק 3 mL | BD Biosciences | 309585 | |
| מבחנה 15 mL | BD Biosciences | 352096 | |
| מבחנה 50 mL | BD Biosciences | 352070 | |
| שקיות איטום עצמי Convertors בגודל 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | |
| פיפט סרולוגי בעל קצה רחב 10 ml | BD Biosciences | 357504 | |
| פיפט סרולוגי 10 ml | BD Biosciences | 357551 | |
| פיפט סרולוגי 5 ml | BD Biosciences | 357543 |
מקורות
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
