وهي مغلفة خلق الدقيقة أنسجة الكولاجين باستخدام المواد الهلامية اسطوانية ، تسمى وحدات ، والتي تحتوي على الخلايا المدمجة والتي السطح مع الخلايا البطانية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصنيع الأنسجة الصغيرة باستخدام وحدات من الخلايا التي تحتوي على الكولاجين جل
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يصف هذا البروتوكول تصنيع نوع من الأنسجة الصغيرة تسمى الوحدات. نهج الوحدة يولد موحدة ، والأنسجة وقابلة للأوعية دموية. يمكن جعل وحدات من الكولاجين وكذلك غيرها من المواد أو gelable crosslinkable. وهم حوالي 2 ملم وطولها 0.7 ملم وقطرها على تلفيق ولكن تقليص الحجم مع الخلايا المدمجة أو عندما تكون مغلفة وحدات مع الخلايا البطانية. وحدات فردية وصغيرة بما يكفي أن الخلايا المضمنة في حدود انتشار الأوكسجين والمواد المغذية الأخرى ولكن يمكن أن تكون معبأة معا لتكوين وحدات أكبر الأنسجة التي perfusable. هذه الأنسجة هي وحدات في البناء لأنه لا يمكن أن تكون جزءا لا يتجزأ من أنواع مختلفة من الخلايا أو المغلفة على الوحدات قبل أن يتم تعبئتها معا لتكوين أنسجة معقدة. هناك ثلاث خطوات رئيسية لجعل وحدات : (1) تحييد خلايا الكولاجين وتضمينها في ذلك ، (2) التبلور الكولاجين في أنبوب والقطع وحدات و (3) وحدات الطلاء مع الخلايا البطانية.
البروتوكول
1) إعداد الأنابيب
- قطع 2-3 أطوال متر من أنابيب البولي ايثيلين (0.76 ملم x معرف 1،22 مم OD).
- الصفحات إبرة G1 20 في واحدة من نهاية الأنبوب.
- لفائف الأنابيب ووضعها في كيس ختم المحولات الذاتية (7 1 / 2 "× 13"). ينبغي وضع طرفي الأنبوب في نهاية تفض من الحقيبة ، وسجلت في مكان مع الشريط التعقيم الغاز.
- كيس ختم والغاز تعقيم.
2) تحي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ونحن ملفقة عدة مختلفة الدقيقة الأنسجة باستخدام الوحدات المدمجة مع أنواع مختلفة من الخلايا 11/01. لقد نجحنا في تضمين العضلية الأولية ، والجزر ، والخلايا الجذعية الدهنية وخلايا انسجة الوسيطة وكذلك خطوط الخلية عدة بما في ذلك HepG2 ، NIH 3T3 واستنساخ خلايا الكبد 9. لقد كنا المغلفة الوحدات مع أنواع عدة من الخلايا البطانية بما في ذلك الخلايا البطانية الأورطي الفئران البشرية والخلايا البطانية الوريد السري والخلايا البطانية الإنسان الاوعية الدموية الدقيقة. كما تم الوحدات المنتج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم توفير التمويل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (EB 001013) ، والعلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث وكندا ، والكندي معاهد أبحاث الصحة. نشكر الدكتور AP McGuigan لخبرتها في مجال التنمية والمساعدة من وحدات.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أنابيب Intramedic PE60 | BD Biosciences | 427416 | يمكن استخدام أنابيب بأقطار مختلفة لتغيير قطر الوحدات |
| محلول ملحي منظم بالفوسفات (PBS) | GIBCO, by Life Technologies | 20012-027 | |
| تربسين-EDTA | GIBCO, by Life Technologies | 25200-072 | |
| كولاجين Purcol المحمض، 3 mg/mL | Cedarlane Labs | 5005-B | |
| بيكربونات الصوديوم | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| إبرة 20G | BD Biosciences | 305175 | يجب أن يكون قطر الإبرة مشابهاً لقطر الأنابيب |
| حقنة 3 mL | BD Biosciences | 309585 | |
| أنبوب 15 mL | BD Biosciences | 352096 | |
| أنبوب 50 mL | BD Biosciences | 352070 | |
| أكياس تعقيم ذاتية الإغلاق Convertors بمقاس 7 1/2” × 13” | Cardinal Health | 92713 | |
| ماصة سيرولوجية ذات طرف عريض 10 ml | BD Biosciences | 357504 | |
| ماصة سيرولوجية 10 ml | BD Biosciences | 357551 | |
| ماصة سيرولوجية 5 ml | BD Biosciences | 357543 |
المراجع
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
