والعزلة في المختبر تفعيل انواع معينة ايليجانس الحيوانات المنوية

ملخص

بروتوكول للعزل وتفعيل أرومة النطفة من الذكور C. ايليجانس الموصوفة هنا. قطع نهاية الخلفي من أرومة النطفة النشرات الذكور. ويمكن تنشيط أرومة النطفة قبل إضافة البروتيني.

الملخص

الذكور والمخنثين هما الاستغلال الجنسي وجدت بشكل طبيعي في الديدان الخيطية جيم ايليجانس. ويتم إنتاج الحيوانات المنوية amoeboid من قبل كل من الذكور والمخنثين. في مرحلة مبكرة من تكون الأعراس ، والخلايا التناسلية من المخنثين تفرق في عدد محدود من الحيوانات المنوية -- حوالي 300 -- ويتم تخزينها في "حقيبة" صغيرة تدعى spermatheca. في وقت لاحق ، المخنثين انتاج البويضات باستمرار ^1. في المقابل ، من الذكور حصرا إنتاج الحيوانات المنوية طوال مرحلة البلوغ. انتاج الحيوانات المنوية من الذكور بكثير بحيث تمثل 50 ٪> من مجموع خلايا في البالغين ² دودة نموذجي. لذلك ، عزل الحيوانات المنوية من الذكور هو أسهل من ذلك من المخنثين من.

تتولد بشكل طبيعي إلا نسبة صغيرة من الذكور بسبب انفصال غير عفوية من كروموسوم X ^3. معبر المخنثين مع الذكور أو أكثر سهولة ، وإدخال طفرات تثير له (نسبة عالية من الذكور) النمط الظاهري هي بعض الاستراتيجيات التي من خلالها يمكن للمرء أن تثري السكان الذكور ^3.

ويمكن تمييزها بسهولة من الذكور المخنثين من خلال ملاحظة ⁴ مورفولوجيا الذيل. وأشار خنثى الذيل ، في حين أن يتم تقريب الذيل مع هياكل الذكور التزاوج.

قطع الذيل النشرات عدد كبير من أرومة النطفة المخزنة داخل الجهاز التناسلي للذكور. يتم إجراء تشريح تحت المجهر ستيريو باستخدام الإبر قياس 27. منذ ليست مرتبطة ماديا أرومة النطفة مع أي الخلايا الأخرى ، والضغط الهيدروليكي يطرد المحتويات الداخلية للجسم الذكر ، بما في ذلك أرومة النطفة ^2.

يتم تشريح الذكور مباشرة على قطرة صغيرة من "متوسطة الحيوانات المنوية. أرومة النطفة حساسة للتغيير في درجة الحموضة. وبالتالي ، يتم استخدام HEPES ، وهو مركب مع قدرة التخزين المؤقت جيدة في وسائل الإعلام الحيوانات المنوية. الجلوكوز والأملاح الأخرى الموجودة في الحيوانات المنوية وسائل الاعلام المساعدة في الحفاظ على الضغط الاسموزي للحفاظ على سلامة الحيوانات المنوية.

ويطلق على مرحلة ما بعد الانتصافي تمايز أرومة النطفة المنوية في السائل المنوي تكون النطاف أو التنشيط. يهز ⁵ ، ⁶ ونيلسون وأظهرت في وقت سابق ان يمكن أن يتسبب أرومة النطفة في جولة على التمايز إلى الحيوانات المنوية وذلك بإضافة مركبات مختلفة بما في ذلك تفعيل E. Pronase هنا نظهر تكون النطاف في المختبر من C. أرومة النطفة ايليجانس باستخدام Pronase E.

تكون النطاف الناجح هو الشرط المسبق للخصوبة وبالتالي تكون النطاف في المسوخ المعيبة هي عقيمة. وقد أظهرت العديد من المسوخ حتى الآن ليكون معيبا على وجه التحديد في عملية تكون النطاف ^7. وجدت خلال شذوذ في تفعيل المختبر من جمعية مهندسي البترول رواية (الحيوانات المنوية المعيبة) المسوخ من شأنه أن يساعدنا اكتشاف اللاعبين إضافية المشاركة في هذا الحدث.

البروتوكول

1) إثراء السكان الذكور

1. اعتمادا على الحاجة تجريبية ، يمكن الحصول على أعداد كبيرة من الذكور من خلال توظيف واحدة من الاستراتيجيات التالية :
   1. ويمكن الحصول على عدد كبير من السكان من الذكور نوع البرية عن طريق عبور 5 ذكور نوع البرية وخنثى 1 على الحديقة الصغيرة OP50 المصنف في المركز من لوحة NGM. وتقريبا 50 ٪ من الذكور يكون خلفا لتوليد نوع البرية.
   2. له - 5 (e1490) أو له 8 (e1489) المخنثين رمي عدد....

المناقشة

بالإضافة إلى تحليل المسوخ جمعية مهندسي البترول ، وهذا البروتوكول لها تطبيقات هامة أخرى ، مثل تحليل مورفولوجيا الحيوانات المنوية مع الشيخوخة. ويمكن استخدام الحيوانات المنوية وأرومة النطفة معزولة باستخدام هذا البروتوكول في التجارب النهائية الاخرى مثل immunostaining من نوع البرية والحيوانات المنوية متحولة ^{8 ، 9} ، حركية الحيوانات المنوية على شرائح ¹⁰ ، والقياسات الفسيولوجية ^{9 ، 11 ،} أو التلقيح الاصطناعي حتى ^12.

....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
حقنة توبيركولين	BD Biosciences	309623	الحقنة: 1 ml، الإبرة: 27G X ½ in
قلم تحديد الأنسجة (Pap pen)	Zymed Laboratories, Inc.	00-8888
شرائح مجهرية VWR VistaVision HistoBond	VWR international	16004-406	الأبعاد: 75X25X1mm
غطاء زجاجي	VWR international	48366045
بروتياز	Sigma-Aldrich	P-6911