Method Article

تسجيلات كاملة من خلية دماغ ذبابة الفاكهة الكبار

DOI:

10.3791/248

⸱

July 29th, 2007

 , 
1Department of Development and Cell Biology, Department of Anatomy and Neurobiology, University of California, Irvine (UCI)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا الفيديو يوضح الإجراء لعزل العقول كلها من ذبابة الفاكهة الكبار في التحضير لتسجيل واحدة من الخلايا العصبية باستخدام معيار تكنولوجيا الخلية بأكملها. وهو يتضمن صورا للخلايا العصبية وصفت GFP شوهدت أثناء التسجيل.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا الفيديو ، ونحن لشرح إجراءات عزل العقول كلها من ذبابة الفاكهة الكبار في التحضير لتسجيل من الخلايا العصبية واحدة. نبدأ بوصف حل تشريح والاستيلاء على الإناث البالغات المستخدمة في دراستنا. ويتضح هذا الإجراء لإزالة الدماغ كله سليمة ، بما في ذلك كل من الفصوص البصرية. ويرد أيضا تشريح القصبة الهوائية الفوقية. الدماغ معزولة ليس فقط صغير ولكن يحتاج إلى عناية خاصة في التعامل في هذه المرحلة لمنع تلف الخلايا العصبية ، وكثير منها بالقرب من السطح الخارجي للنسيج. نظهر كيف يتم استخدام حامل الخاصة التي قمنا بتطويرها لتحقيق الاستقرار في الدماغ في غرفة تسجيل. تشكيل لالكهربية هو معيار يستخدم للحصول على تسجيل واحد من الخلايا العصبية أو أزواج من الخلايا العصبية. صورة الفلورسنت ، وينظر من خلال المجهر التسجيل ، من خط القيادة GAL4 GFP التعبير (GH146) يوضح كيف يتم تحديد الخلايا العصبية الإسقاط (PNS) في الدماغ حية. صورة رفيع Nomarski الطاقة يظهر عرض للعصبون واحد هو استهداف لتسجيل الخلية بأكملها. عندما تتم إزالة بنجاح دون ضرر في الدماغ ، والغالبية العظمى من الخلايا العصبية نشطة بشكل عفوي ، إطلاق إمكانات العمل و / أو العارضة مدخلات متشابك عفوية. هذا في إعداد الموقع ، والتي يمكن الجمع بين كل خلية من الخلايا العصبية تسجيل المحددة في الدماغ كله مع التلاعب الجيني والدوائي ، هو نموذج مفيدة لاستكشاف الفيزيولوجيا الخلوية واللدونة في الجهاز العصبي المركزي للبالغين.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أولا تشريح أدمغة البالغين من الطيران

  1. وضع قطرة صغيرة (~ 100 ميكرولتر) للتشريح في حل وسط طبق بيتري 35 مم.
  2. الصيد البالغات باستخدام الشافطة. تحت المجهر تشريح ، واستخدام إبر المحاقن اثنين إلى قطع رأس ذبابة.
  3. رئيس المركز في قطرة صغيرة من المياه المالحة تشريح (مع غراء المضافة) في طبق بتري.
  4. رئيس المركز مع مع خرطوم التي تواجه قاع الطبق.
  5. عقد إهاب المركب ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المعزولة إعداد الدماغ كله نوضح في هذا الفيديو يسمح تقييم الآليات الخلوية الكامنة وراء استثارة ونقل متشابك في الخلايا العصبية التي تم تحديدها ، بما في ذلك تلك الموجودة في مسارات معالجة حاسة الشم في الدماغ ذبابة الفاكهة الكبار (ودود يا قو ، 2006). هذا النهج هو مكمل لدراسة نشاط الخلايا العصبية في الدماغ من ذبابة الفاكهة سليمة الكبار (ويلسون وآخرون 2004 جميع) ، في معظم التسجيلات بنفس الطريقة من الخلايا العصبية في المخ لدى الثدييات شريحة مكملة لتسجيلات مستيقظا في الثدييات التصرف. هناك اثنين من المزايا الرئ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة لمنح NS27501 DKOD. وقدمت دعما إضافيا لهذا العمل من قبل برنامج المنح HHMI أستاذ لDKOD.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
# 5 أدوات العلوم الدقيقة لأداة Focepsرقم 11251-10كن حذرا ، ولا تتلف الأطراف الدقيقة للملقط
كاشفغراءورثينجتون للكيمياء الحيوية312620 U / ml يتم تنشيطه بواسطة 1 ملي مولار L-cysteine
مجهرتشريح SMZ-2B نموذج: C-PSNikon Instrumentsمجهزة بأضواء ألياف بصرية معقوفة موضوعة بزاوية
منخفضة إبرة & حقنة PrecisionGlide &# 174 ؛ ?, Becton Dickinson Co305175 & 309602مجهر عمودي رخيص ودائم
Axioskop2 FS بالإضافة إلىCarl Zeiss، Inc.مجهزة بمرحلة ثابتة ، هدف غمر الماء 40X ، بصريات Nomarski ، ومصباح الفلورسنت
مكبر للصوت200 Bالأجهزة الجزيئية
محول Digidata D-A 1322Aالأجهزة
الجزيئية

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gu, H., O Dowd, D. K., K, D. Cholinergic synaptic transmission in Adult Drosophila Kenyon cells in situ. Journal of Neuroscience. 26, 265-272 (2006).
  2. Wilson, R. I., Turner, G. C., Laurent, G. Transformation of olfactory representations in the Drosophila antennal....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Drosophila BrainWhole Cell RecordingBrain DissectionElectrophysiology SetupFluorescence ImagingGFP LabelingPatch ClampNeuron IdentificationDual Cell RecordingCentral Complex

Related Articles