الأزقة اختبار متتالية من القلق في الفئران والجرذان

ملخص

التدابير زائد متاهة القلق مثل السلوك في القوارض. هناك نوعان من المقابلة المغلقة واثنين بأذرع مفتوحة العكس؛ القوارض حريصة تجنب بأذرع مفتوحة. المنطقة الوسطى ليست مفتوحة تماما ولا مغلقة، لذلك الوقت الذي يقضيه هنا هو غامض ويصعب تفسيرها. هنا يوصف تعديل بروتوكول زائد متاهة القضاء على هذا المجال.

الملخص

وقد اشتق زائد متاهة من العمل في وقت مبكر من مونتغمري. وأشار إلى أن الفئران التي تميل لتجنب بأذرع مفتوحة من متاهة، وفضلت تلك المغلقة. هاندلي، Mithani والملف

المقدمة

وقد اشتق مرتفعة زائد متاهة من العمل في وقت مبكر من مونتغمري. ²⁷ ولاحظ أن الفئران التي تميل لتجنب بأذرع مفتوحة من متاهة، وفضلت تلك المغلقة. هاندلي وMithani، وملف وآخرون. ^22،29 إجراء الدراسات الأولى على تصميم زائد المتاهة التي نستخدمها اليوم، ونشرت في عام 1987 المعلن تصميم للاستخدام مع الفئران ^25. وهو الآن فحص القياسية لعلاج مزيل القلق ^23، ونشرت العديد من البروتوكولات ^36،24 http://www.jove.com/video/1088 ؛ http://currentprotocols.com/protocol/ph0538 .

يتكون مرتفعة زائد متاهة من اثنين مقابل الأسلحة مغلقة العكس مفتوحة واثنين المتقاطعة في المنطقة الوسطى، في شكل + في الخطة. نسبة الوقت المخصص لل، وإدخالات نسبة إلى وبأذرع مفتوحة هي مؤشرالقلق مثل السلوك، وهذه المؤشرات أقل، وأكثر حرصا على الماوس. بدلا من ذلك، ويصنف هذا الفأر أن يقضي معظم وقته في أحضان المغلقة القلق.

وقد أظهرت تحليل عامل أنه في حين أن مؤشرات النشاط ذراع مفتوحة الحمل بشكل كبير على عامل معين كما القلق مثل السلوك، وتعكس مقالات الذراع مغلقة إلى حد كبير النشاط الحركي، الحدود بين العوامل ليست نهائية؛ أيضا عوامل أخرى مثل الاستكشاف، وتقييم المخاطر و صنع القرار تشمل الملف الشخصى السلوك على زائد متاهة، ^12،32. الوقت في المنطقة الوسطى هو أكثر إشكالية لتفسير، وإن كان قد تصنف الوقت الذي يقضيه هنا ك ³² "صنع القرار". على الرغم من أن الفئران يقضون معظم وقتهم في أحضان المغلقة، والقليل من الوقت نسبيا على بأذرع مفتوحة، في العديد من الدراسات وينفق الكثير من الوقت في المنطقة الوسطى حيث الانضمام إلى الأسلحة. على الرغم من أن هذا قد يمثل عملية صنع القرار ^32، بل هو غامض في الشركة المصرية للاتصالاتRMS من القلق مثل السلوك، على الرغم من أن قد يكون متوقعا الفئران حريصة للغاية لتجنب المنطقة الوسطى فضلا عن بأذرع مفتوحة. كانت محاولة مبكرة للقضاء على هذه المنطقة المركزية غامضة لبناء متاهة دائرية مع اثنين من الأرباع مغلقة بالتناوب مع اثنين من فتح تلك ^33. في هذا "الصفر المتاهة" حيوان هو لا لبس فيه في جلسة مفتوحة (anxiogenic) أو (nonanxiogenic) المنطقة المغلقة. ومع ذلك، على الرغم من أن تستخدم من قبل العديد من الجماعات، فإنه لم يكن كما اعتمدت على نطاق واسع زائد المتاهة. في مختبرنا وجدنا أنه في حين أن زائد متاهة (والأزقة المتعاقبة) أظهرت تأثيرات مهدئة في الفئران lesioned الحصين، لم ينظر إلى هذه المتاهة على صفر شيدت بالضبط مثلها في ذلك مثل الراعي وآخرون. ¹³

ولذلك فقد وضعت الأزقة جهاز المتعاقبة مع الهدف الأساسي للقضاء على المنطقة الوسطى من زائد المتاهة. ثانوي، أدرجت عناصر اختبارات أخرى من القلق مثل السلوك. قبل بدء تشغيلالحيوان في الزقاق المغلقة 1، وقدم عنصرا ظهور، مماثلة لتلك التي في ستون "المدخنة" اختبار ^34. يتغير لون الأزقة من الأسود (زقاق 1) من خلال الرمادي (زقاق 2) إلى اللون الأبيض (الأزقة 3 و 4). هذا ينبع من الملاحظات أن الفئران تفضل المناطق الداكنة، كما حدث مثلا في مربع اختبار ضوء الظلام ^11. جدران الأزقة المتعاقبة أيضا الانخفاض ببطء في الارتفاع، خلافا لما حدث في المتاهة زائد حيث يوجد الانتقال المفاجئ بين جدران عالية وليس الجدران. عرض الأزقة يقلل تدريجيا إلى زيادة تدريجية في التعرض من الفأرة إلى مكان مرتفع من المتاهة، بالتنسيق مع انخفاض تدريجي في ارتفاع الجدار. وأدرجت كل هذه العوامل في محاولة لزيادة حساسية الاختبار وتمتد على نطاق أوسع من السلوك مثل القلق من زائد متاهة لا. كانت الأزقة جهاز المتعاقبة محاولة لقوس مجموعة واسعة من خطوط الأساس السلوك مثل القلق، في نفس وا ذ أن الشروط الأساسية الأربعة لاختبار التفاعل الاجتماعي على النحو الذي قام في الأصل من قبل الملف ¹⁷ رخصة كشف عن تعديلات خفية من السلوك مثل القلق. ملف، في دراسة عن تأثيرات النيكوتين، لم ير سوى الاختلافات في اثنين وسيطة الشروط السلوك مثل القلق، وليس أعلى أو أدنى ^20.

فضلا عن زائد متاهة، اختبار آخر يستخدم على نطاق واسع من القلق مثل السلوك هو مربع ضوء الظلام ^11. النتائج من مربع ضوء الظلام وزائد متاهة لا تتطابق دائما مع كل ^{35 دولة} اخرى. ويعتبر الآن أن السلوك مثل القلق ليس ظاهرة وحدوية ^19. ولذلك يجوز للاختبار الأزقة المتعاقبة تعطي نتائج مختلفة بشكل جيد لتلك التي حصلنا عليها باستخدام مربع ضوء الظلام، وحتى تصور من زائد المتاهة، لأنه يختلف بمهارة من هذا الأخير، ومع ذلك، يتوقع نتائج بين السابق والأخير لتكون مشابهة على نطاق واسع.

"jove_content"> ولقد ثبت أن التجارب المتكررة على زائد متاهة يغير نوع من القلق لوحظ. ^8،21 قد يكون من أن تعريض الحيوان إلى زائد متاهة تليها الأزقة المتعاقبة يلغي تغيير في نوع من القلق مثل السلوك قياس حالة تكرار اختبار المتاهة زائد. كان ينظر مثالا على ذلك عندما استخدمت زائد متاهة الأزقة والمتعاقبة لاختبار الفئران اللحاء-lesioned والسيطرة الإنسي الفص الجبهي بطريقة يوازن زمنيا. وأظهرت الفئران lesioned أقل بكثير السلوك مثل القلق في كلا النوعين من الأجهزة، بغض النظر عن ما إذا كان الاختبار وقع مع الأزقة المتعاقبة أو زائد متاهة الأول ^15. ومن الممكن أيضا أن استخدام متسلسلة من زائد متاهة الأزقة ومتلاحقة قد حفاظ على حساسية للأدوية مزيل القلق ينظر عندما يتم تكرار اختبار المتاهة زائد ¹⁸

ويمكن أيضا أن يتم اختبار الفئران على نسخة أكبر من الأزقة المتعاقبة. الإجراء هو ر بالضبطانه نفس بالنسبة للفئران.

كما في حالة اختبار للhyponeophagia، تجربة العام مسبقة من الحيوانات، وبصرف النظر عن المتاهة مرتفعة للقلق مثل اختبار السلوك في حد ذاته، قد يؤثر على النتيجة. ^1،16

البروتوكول

1. طريقة

1.1 جهاز

يتكون الأزقة جهاز المتعاقبة من أربعة المتعاقبة الأزقة مرتبطة خطيا من زيادة مزعومة حرف anxiogenic ومصنوع من الخشب المطلي (انظر الشكل 1، وعلى سبيل المقارنة، الشكل 2 من المتاهة زائد). وترد التفاصيل في الجدول 1:

زقاق	طول	عرض	ارتفاع الجدار	اللون
1	25.0	8.5	25.0	أسود
2	25.0	8.5	5.0	رمادي
3	25.0	3.5	0.8	أبيض
4	25.0	1.2	0.2	أبيض

الجدول 1. تفاصيل البناء لأزقة جهاز المتعاقبة. جميع أبعاد هي في الطول.

ورفع الجهاز ما يقرب من 50 سم من قبل لقط الكلمة الموسعة الخلفي من زقاق 1 إلى مقاعد البدلاء المختبر، والجرف أو غيرها من أشكال الدعم. نهاية مفتوحة من زقاق 1 يجب أن تكون 10 سم على الأقل بعيدا عن الدعم لمنع الفئران في محاولة لتسلق إلى ذلك. توفير الحشو كافية وافرة تحت الأزقة في حالة ماوس يقع قبالة.

وكان الأساس المنطقي لمرتفعات الجدار مختلفة: تلك من زقاق 1 تحتاج إلى أن تكون عالية لتحقيق أقصى قدر من خصائصه غير anxiogenic. أيضا جدران عالية خلق بيئة أكثر قتامة طالما أن مصدر الضوء مختبر ليست النفقات العامة على الفور. تم الحكم على جدران الزقاق 2 من الخبرة لتظهر أقل أمانا من 1 إلى زقاق الفئران، ولكن للا تزال توفر قدرا من الحماية. الأزقة 3 و 4 فقط كان ما يكفي من الارتفاع لتحقيق أقصى قدر من القلق ولكن لا يزالتوفر قبضة إذا كان الماوس في خطر السقوط. في الممارسة شلالات نادرة، وليس أكثر تواترا من على زائد المتاهة.

وينبغي التعامل مع الجهاز بعناية باسم زقاق ضيق 4 بشكل خاص عرضة للضرر. إذا تثبيتها بإحكام، وينبغي أن الجهاز لا يهتز كلما تحركت الماوس فوقها. للتقليل من هذه المشاكل المحتملة، وجهاز يمكن أن يعطى تعزيز إضافي "العمود الفقري" الذي يمتد طوله تحت الأرض. ويمكن أيضا أن يتم A الأزقة جهاز المتعاقبة للفئران. وترد التفاصيل في الجدول 2:

زقاق	طول	عرض	ارتفاع الجدار	اللون
1	45.0	تسعة	29.0	أسود
2	45.0	تسعة	2.5	رمادي
3	45.0	6.7	0.5	أبيض
4	45.0	3.5	0.3	أبيض

الجدول 2. تفاصيل البناء لأزقة جهاز المتعاقبة للفئران. جميع أبعاد هي في الطول.

1.2 الإجراءات

* إحضار الفئران إلى الغرفة التجريبية 5-20 دقيقة قبل الاختبار للتأكد من تماشيها إلى الغرفة وعند مستوى معتدل من الإثارة.

* كما هو الحال مع جميع التجارب حيث يتم اختبار الحيوانات مرة واحدة عن السلوك التلقائي على جهاز الرواية، فمن الممارسة السليمة للالأزقة إلى أن تعطى أولا رائحة الماوس؛ مكان الفئران غير التجريبية على الجهاز لبضع دقائق، ثم تنظيف الجهاز كما أثناء التجربة الرئيسية. والهدف هو ضمان وجود رائحة الماوس خلفية طفيف ولكن موحدة، على أساس أنه من imposإيصال خدمات الإيداع لإزالة تماما رائحة حيوان (ناهيك عن إثبات أن ذلك لم يتحقق).

* ضع الماوس في نهاية مغلقة من زقاق 1 في مواجهة الحائط. بدء توقيت 1) لطول العام للامتحان + الكمون لدخول الأسلحة، و2) الوقت الذي يقضيه في زقاق 1. عندما يضع الماوس عن 4 أقدام إلى زقاق المقبل يعتبر أن دخلت عليه. سجل إجمالي الوقت الذي يقضيه في كل زقاق (كل أربعة أقدام) وعدد الإدخالات (على حد سواء إلى الأمام والخلف). تسجيل عدد من البراز بولي وعما إذا كان أي التبول قد حدث.

* مدة الاختبار: 5 دقائق. (وهذا هو الوقت الطبيعي، وإذا كنت تعرف أو تشتبه أن الحيوانات تختبره لن تكون حريصة جدا، وتقصير مدة الاختبار إلى 3 دقائق قد يكون من المفيد ملاحظة وقت ما تستخدمونه).

* مجتمعة مكافحة حدث / توقيت لا تقدر بثمن لهذا العمل فضلا عن توقيت زائد المتاهة. لدينا واحدة محمول يعمل بالبطارية مع أربعة أزرار، كل الحمار ociated مع عداد حدث وجهاز توقيت (1/10 ثانية)، الذي بني في قسم علم النفس. زر 1 الضغط يسجل حدثا (دخول زقاق 1) ويبدأ جهاز توقيت. الافراج عن زر توقف مؤقت. 2 زر الضغط يسجل إدخال زقاق 2 ويبدأ زقاق 2 الموقت، وما إلى ذلك، لا بد من طرح إدخال واحد من العدد الكلي للمقالات مسجلة على زقاق 1 كما بدأ أول دخول من قبل المجرب، وليس الماوس.

* لتلخيص؛ لكل سجل زقاق: الكمون للدخول إليها (وبصرف النظر عن زقاق 1 طبعا)، وعدد من مقالات في ذلك والوقت الاجمالي الذي قضي هناك.

* إذا ماوس يقع قبالة، وقف عقارب الساعة واستبدالها على زقاق من التي وقع فيها، تواجه زقاق 1.

* تتم إزالة كافة البول والبراز بين الحيوانات والجهاز تنظيفها بقطعة مبللة، تليها الأنسجة الجافة. من المهم لتنظيف وتعقيم المعدات بين كل فأر اختبار.

محتوى "> * وبالإضافة إلى ذلك، دائما ارتداء قفازات عند التعامل مع القوارض.

النتائج

وأظهرت الفئران مع كاملة، الآفات السامة للخلايا قرن آمون بطني أو ظهري آثار مزيل القلق المعتدلة أو الجزئية على زائد متاهة، في حين أظهرت بطني، ولكن ليس الظهرية، الفئران lesioned آثار مزيل القلق في أزقة المتعاقبة ^6،26. ومع ذلك، في مختبر آخر، كهربائيا آفات الحصين الظهرية لم يكن لديهم آثار مزيل القلق ^35، وهذا ليس واردا كما تم الحصول عليها الدراسة السابقة آثار مزيل القلق جزئي فقط مع الآفات السامة للخلايا الظهرية، وهذا هو الحصين بطني التي يعتقد أنها تلعب دورا رئيسيا في القلق مثل السلوك ^4،7.

خفضت الآفات الحاجز الإنسي أيضا القلق مثل السلوك في الفئران في الأزقة المتعاقبة ^5. في المقابل، فإن المتاهة صفر لم يكشف أي آثار مزيل القلق من اكتمال الآفات السامة للخلايا قرن آمون ^13. الفئران C57BL/6JolaHsd قضى وقتا أطول على معظم anxiogenic من الأزقة المتعاقبة (زقاق 4) من الفئران 129S2/SvHsd ^9.في المقابل، لم يكن ينظر إلى فرق واضح السلوك مثل القلق بشأن زائد متاهة، حيث قضى الفئران 129 قتا أطول في المنطقة الوسطى، نتيجة ينظر أيضا في سلالة أخرى 129، 129/SvEvTac ^2. في عمل غير منشورة أجريت على الفئران مع آفات كاملة، الظهرية أو البطنية من الحصين، كان هناك اتجاه عام لمراقبة نتائج مزيل القلق مثل الآفات كاملة. ومع ذلك، كانت هذه في مكان قريب كما وضعت في اختبارات hyponeophagia، حيث كان تأثير مزيل القلق من الآفات كاملة أو بطني قوية وموثوق بها. على سبيل المثال، أنفقت الفئران lesioned كاملة وقتا أقل في أحضان المغلقة للزائد المتاهة، ولكن ليس أكثر في العراء. وقد تم اختبار الأزقة متتالية مرتين، فقط على محاكمة ثانية كانت هناك آثار مزيل القلق كبير من الآفات كاملة. كل الأزقة المتعاقبة وزائد متاهة جعل الطلب على عمليات التوجيه، وبالتالي فإن الحيوانات lesioned قد تكون آخذة في مزيد من الوقت ل"الحصول على أثرها"، وبالتالي فإن الوقت المتاح لإثبات مزيل القلقيتم تقليل الآثار.

عندما تم اختبار الفئران مع الآفات من قشرة الفص الجبهي الإنسي على زائد متاهة الأزقة ومتلاحقة الأجهزة مع النظام من التجارب وازنت، لم يكن هناك تأثير الذي تم اختباره الأول، ولكن كانت الآثار واضحة مزيل القلق موجود في كل الاختبارات مقارنة مع الضوابط ¹⁵ (انظر الشكلين 3 و 4). جعل الفئران lesioned أكثر بكثير الإدخالات في كل زقاق من أزقة المتعاقبة مقارنة مع الضوابط، وبأذرع مفتوحة من المتاهة زائد، على الرغم من المثير للاهتمام كانت مقالات في أحضان مغلقة من هذا الأخير ليس أعلى من الضوابط. في الحقل فتح كانت الفئران lesioned بشكل ملحوظ أكثر نشاطا من الضوابط، وبشكل هامشي جدا في أقفاص النشاط ضوئية.

وقد تبين أيضا اختبار الأزقة المتعاقبة لتكون حساسة لآثار كلورديازيبوكسيد المخدرات مزيل القلق. في غير منشورة العمل 12 ملغ / كغ ipchlتم إظهار odiazepoxide (CDZP) أن تكون نشطة في المعاهد الوطنية للصحة الفئران الذكور، كما يستخدمه المعلن في الوصف الأصلي للزائد متاهة الفئران ^ل25. الفئران المعالجة CDZP-قضى وقتا أقل من الضوابط في زقاق 1 (158 ± 12.1 مقابل 212 ± 14.8 ثانية، P = 0.0108، وبذل المزيد من مقالات في الأزقة 2-4 (انظر الجدول 3).

زقاق	السيطرة	CDZP	P
2	7.2 ± 1.2	18.4 ± 2.0	0.0001
3	1.0 (0-3،5)	5.0 (2،5 حتي 12،3)	0.0277
4	0.0 (0،0-1،0)	2.0 (0،0-5،0)	0.0604

الجدول 3. مقالات في الأزقة 2-4 من الأزقة جهاز المتعاقبة من قبل الفئران التي عولجت مع 12 ملغ. / كجم IP من CDZP أو ضوابط القيم هي الوساطات و(المدى الربيعي) أو يعني ± SEM وفقا لما إذا كانت البيانات غير حدودي أو حدودي؛ مان ويتني U اختبار أو تي اختبار على التوالي. N = 11/group.

الشكل 1. الماوس الأزقة المتعاقبة الجهاز. وهي مصنوعة من الخشب المطلي ويشد إلى مقاعد البدلاء.

الشكل 2. الماوس زائد المتاهة. وهي مصنوعة من الخشب الأسود مع رسمت الجدران البرسبيكس شفافة على الأسلحة المغلقة.

الشكل (3). تأثير مزيل القلق من الإنسي الآفات قشرة الفص الجبهي (م) على التعاون زائد المتاهةmpared لضوابط (C). * = P <0.05 C مباراة م. نشرت أصلا في إشارة البيانات 15.

الشكل 4. تأثير مزيل القلق من الإنسي الآفات قشرة الفص الجبهي (م) على أزقة المتعاقبة مقارنة مع الضوابط (C). * = P <0.05 C مباراة م. نشرت أصلا في إشارة البيانات 15.

المناقشة

وفي الختام، واختبار الأزقة المتعاقبة تنتج نتائج مماثلة عموما إلى زائد متاهة عند إجراء آفات الحصين معقدة أو وسطي قشرة الفص الجبهي، ولكن هناك حاجة إلى مزيد من العمل لتقييم آثار الآفات في مناطق أخرى من الدماغ يعتقد أن لها علاقة القلق مثل السلوك. في بعض الأحيان، على نتائج زائد متاهة تختلف بشكل ملحوظ عن تلك الموجودة في الأزقة المتعاقبة؛ مثال على هذا هو عملنا على Kir6.2 الفئران KO ^14. عندما تم اختبارها على كل الأجهزة، أنه سمح لنا لإثبات أن الفئران KO لم تظهر تغييرا أحادي الاتجاه العام في السلوك مثل القلق، نظرا لأنها تنفق المزيد من الوقت من الفئران من النوع البري على فتح الأسلحة زائد المتاهة (لإظهار أقل القلق مثل السلوك)، ولكن المزيد من الوقت في زقاق 1 من الأزقة المتعاقبة (لإظهار قدر أكبر من القلق مثل السلوك). وبالتالي، يمكن الجمع بين استخدام زائد متاهة الأزقة والمتعاقبة القضاء على نتائج سلبية أو إيجابية كاذبة كاذبة، منذ الاختبارين، على الرغم منمماثلة، ليست متطابقة وظيفيا.

كما في المتاهة زائد، وفرط النشاط لا يؤدي إلى زيادة غير انتقائية في عدد من الأزقة التي تم إدخالها. وقد أظهرت الدراسات أن تنظيم السلوك في الفئران يختلف بشكل مستقل عن النشاط ^28. الإنسي الفئران lesioned الحاجز، والتي عرضت أن تكون مفرط ملحوظ في اختبار منفصل في أقفاص photobeam رصد النشاط أظهر فقط إدخالات أكبر بكثير في الأزقة 2 و 3؛. كانت الإدخالات في الأزقة 1 و 4 لا يختلف لضوابط ⁵ وبالتالي فإن الحاجز أقل قلقا الفئران lesioned تم جيئة وذهابا بين المنطقتين anxiogenic معتدلة من الأزقة المتعاقبة، والتي تبين ما تم تصميم جهاز للكشف، أي موقفها بشأن طائفة من القلق. لو كانت حتى أقل قلقا، سيكون قد شهدت زيادة في المعابر بين الأزقة 3 و 4.

الأدلة الأخرى التي فرط النشاط لا يؤدي إلى إيجابية كاذبة في اختبار الأزقة المتعاقبة هو أن الفئران مع آفات الحصين الظهرية هي مفرط ولكن لا تظهر آثار مزيل القلق في أزقة المتعاقبة ^7. في اختبار الصلة مع أجهزة الخطية، واختبار زقاق بين البيض والسود، وتظهر GluRA KO إناث الفئران أكثر بدلا السلوك مثل القلق من الضوابط في حين أن الذكور تشبه إلى عناصر التحكم، ولكن كلا الجنسين هي مفرط ملحوظ ^3. كانت Kir6.2 الفئران KO أكثر نشاطا في أقفاص وطنهم من الفئران نوع البرية ولكن أظهرت ليه القلق في الأزقة المتعاقبة ^14. والجدير بالذكر أن قفزت 8 الفئران KO أو سقطت قبالة زائد متاهة ولكن أيا من الأزقة المتعاقبة.

واحد الحد من الأزقة اختبار المتعاقبة تستخدم في الوقت الحاضر هو أنه نظرا للون متفاوتة من الأرض، وأنظمة الفيديو تتبع سيكون من الصعب للاستخدام. ومع ذلك، يمكن على الأرجح أن الكلمة رسمت لون موحد ولون واحد فقط من العوامل في الجهاز الذي يولد القلق.

NT "> اختبار الأزقة المتعاقبة من غير المرجح، مع ذلك، لا تعاني من مشاكل تقلب المرتبطة اختبارات مماثلة على ethologically مثل زائد متاهة ^10،23، ولكن اختبار مجموعة من الحيوانات على حد سواء المهام يمكن أن تساعد على توضيح لغير حاسمة اختبار المتاهة زائد ^30،31،37؛ اتباع نهج متعدد الاختبار قد تكون له مزايا عند اختبار السلوك مثل القلق.