Summary
في هذا الفيديو ، ونحن تصف طريقة لتصوير الخلايا الحية لتقسيم الخلايا الاصلية غير متماثلة الحسية والجهاز سليمة في خلايا البشرة
Abstract
منذ اكتشاف بروتين الفلورية الخضراء (GFP) ، كان هناك تغير ثوري في استخدام التصوير الخلية الحية كأداة لفهم الآليات البيولوجية الأساسية. وقد ضرب التقدم واضحا بشكل خاص في ذبابة الفاكهة ، التي واسعة من الأدوات المسوخ وخطوط المعدلة وراثيا تقدم نموذجا مناسبا لدراسة تطويريا - الحفظ الآليات البيولوجية التنموية والخلية. ونحن مهتمون في فهم الآليات التي تحكم مواصفات مصير الخلية في نظام أخلاقي العصبي الطرفي (المحيطي) في ذبابة الفاكهة. الشعر الخشن الذي يغطي الرأس والصدر والبطن والساقين وأجنحة تطير البالغين mechanosensory الأجهزة الفردية ، وكان قد درس كنظام نموذجا لفهم آليات نوتش التي تعتمد على قرارات مصير الخلية. ويتم توزيع الجهاز الحسي السلائف (سوب) خلايا microchaetes (أو شعيرات صغيرة) ، في جميع أنحاء ظهارة من القفص الصدري العذراء ، ويتم تحديده خلال الساعات ال 12 الأولى بعد ظهور pupariation. بعد مواصفات ، SOP تبدأ الخلايا على الانقسام ، الذي يحدد مصير عزل الخلايا خدران إلى الخلية أثناء الانقسام ابنة واحدة. خدر يعمل بمثابة مثبط خلية مستقلة تابعة لنوتش مسار الإشارات.
هنا ، وتبين لنا طريقة لمتابعة ديناميكية البروتين في الخلية وSOP ذرية في غضون الصدر والعذراء سليمة باستخدام مزيج من الأنسجة الخاصة Gal4 السائقين وGFP الموسومة 1،2 البروتينات الانصهار ، وهذا الأسلوب له ميزة على الأنسجة الثابتة أو مثقف explants لأنه يسمح لنا متابعة تطور جهازا بأكمله من مواصفات السلائف العصبية للنمو وتمايز محطة للجهاز. يمكننا بالتالي ترتبط مباشرة تغييرات في سلوك الخلية إلى تغييرات في التفريق المحطة. وعلاوة على ذلك ، يمكننا الجمع بين تقنية التصوير العيش مع تحليل الفسيفساء مع علامة الخلية repressible (MARCM) نظام لتقييم ديناميات بروتينات المفتاحية في إجراءات العمل الموحدة في ظل ظروف متحولة الإنقسامية أو wildtype. باستخدام هذه التقنية ، وقد كشفت لنا الرواية وغيرها من الأفكار في تنظيم انقسام الخلايا غير المتماثلة ومكافحة تفعيل الشق يشير في الخلايا سوب (الأمثلة تشمل إشارات 1-6،7 ، 8).
Protocol
Discussion
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |
References
- Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell. Development. 126, 3573-3584 (1999).
- Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Two types of asymmetric divisions in the Drosophila sensory organ precursor cell lineage. Nat Cell Biol. 3, 58-67 (2001).
- Bellaiche, Y., Gho, M., Kaltschmidt, J. A., Brand, A. H., Schweisguth, F. Frizzled regulates localization of cell-fate determinants and mitotic spindle rotation during asymmetric cell division. Nat Cell Biol. 3, 50-57 (2001).
- Emery, G., Knoblich, J. A.
- Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Bazooka is required for localization of determinants and controlling proliferation in the sensory organ precursor cell lineage in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 14469-14474 (2001).
- Roegiers, F. Frequent unanticipated alleles of lethal giant larvae in Drosophila second chromosome stocks. Genetics. 182, 407-410 (2009).
- Tong, X. Numb independently antagonizes Sanpodo membrane targeting and Notch signaling in Drosophila sensory organ precursor cells. Mol Biol Cell. 21, 802-810 (2010).
- Jafar-Nejad, H. Sec15, a Component of the Exocyst, Promotes Notch Signaling during the Asymmetric Division of Drosophila Sensory Organ Precursors. Dev Cell. 9, 351-363 (2005).
- Karbowniczek, M. The evolutionarily conserved TSC/Rheb pathway activates Notch in tuberous sclerosis complex and Drosophila external sensory organ development. J Clin Invest. 120, 93-102 (2010).
- Coumailleau, F., Furthauer, M., Knoblich, J. A., Gonzalez-Gaitan, M. Directional Delta and Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division. Nature. 458, 1051-1055 (2009).
- Emery, G. Asymmetric rab11 endosomes regulate delta recycling and specify cell fate in the Drosophila nervous system. Cell. 122, 763-773 (2005).
- Justice, N., Roegiers, F., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Lethal giant larvae acts together with numb in notch inhibition and cell fate specification in the Drosophila adult sensory organ precursor lineage. Curr Biol. 13, 778-783 (2003).
