Live-Gram-negative und gram-positive Bakterien können auf Gelatine-beschichteten Glimmer immobilisiert werden und abgebildet in Flüssigkeit mit Atomic Force Microscopy (AFM).
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Methodenartikel
Bakterielle Immobilisierung für Imaging von Atomic Force Microscopy
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
AFM ist ein hochauflösender (nm-Skala) Imaging-Tool, das mechanisch tastet eine Oberfläche. Es hat die Fähigkeit, Bilder von Zellen und Biomolekülen, in einer flüssigen Umgebung, ohne die Notwendigkeit, chemisch behandeln die Probe. Um dieses Ziel zu erreichen, muss die Probe ausreichend, um die Montagefläche haften, um die Entfernung von Kräften von der Scan-AFM Cantileverspitze ausgeübt zu verhindern. In vielen Fällen hängt die erfolgreiche Bildgebung bei der Immobilisierung der Probe auf der Montagefläche. Optimalerweise sollten Immobilisierung werden minimal-invasive, um die Probe, so dass Stoffwechselvorgänge und funktionalen Eigenschaften nicht beeinträchtigt werden. Durch die Beschichtung frisch gespaltenem Glimmer Oberflächen mit Schweinen (Schweine-) Gelatine, können negativ geladene Bakterien auf der Oberfläche immobilisiert werden und abgebildet in Flüssigkeit, die durch AFM. Immobilisierung von Bakterienzellen auf Gelatine-beschichteten Glimmer ist sehr wahrscheinlich aufgrund von elektrostatischen Wechselwirkungen zwischen der negativ geladenen Bakterien und den positiv geladenen Gelatine. Mehrere Faktoren können mit bakteriellen Immobilisierung, einschließlich der chemischen Bestandteile der Flüssigkeit, in der die Bakterien ausgesetzt, die Inkubationszeit der Bakterien auf die Gelatine beschichtete Glimmer, Oberflächeneigenschaften des Bakterienstammes und dem Medium, in dem die Bakterien sind abgebildet stören. Insgesamt ist die Verwendung von Gelatine-beschichtete Glimmer gefunden allgemein anwendbar zu sein für die Bildgebung mikrobieller Zellen.
Protokoll
1. Mica Zubereitung:
- Schneiden Sie den Glimmer (Electron Microscopy Sciences) mit einer Schere auf die Größe notwendig, die AFM-Mikroskop (ca. 22 × 30 mm) passen.
- Cleave der Glimmer auf beiden Seiten, in der Regel mit Klebeband an die äußere Schicht zu entfernen, bis nur noch glatte ungebrochene Schichten bleiben.
2. Herstellung von Gelatine-Lösung:
- Add 100 ml destilliertem Wasser in ein Labor Flasche.
- Erhitzen Sie die Flasche in der Mikrowelle bis das Wasser zu sieden beginnt. (Wenn eine Mikrowelle nicht zur Verfügung steht, kann das Wasser in einem Becherglas auf einer Heizplatte erhitzt w....
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Diskussion
Verschiedene Faktoren können die mikrobielle Zelle Montage-und Imaging von AFM. Die Gelatine, die zur Beschichtung eingesetzt wird der Glimmer ist wichtig. Gewerbliche Gelatine wird aus einer Reihe von Wirbeltieren einschließlich Fischen, Kühen und Schweinen isoliert. Sowohl die Herkunft und das Verarbeitungsverfahren bestimmen die Gelatine die Eignung für die bakterielle Immobilisierung. Zahlreiche Quellen und Arten von Gelatine wurden auf ihre Wirksamkeit in Immobilisierung Bakterien untersucht [1]. Die beiden effekti.......
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Offenlegungen
Keine Interessenskonflikte erklärt.
Danksagungen
Diese Forschung wird vom Amt für Biologische und Umweltforschung, US Department of Energy und durch Zuschüsse aus Virginia Commonwealth Health Research Board gesponsert. Oak Ridge National Laboratory wird von UT-Battelle, LLC, für den US-Department of Energy unter Vertrag Nr. DE-AC05-00OR22725 verwaltet.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Name | Firma | Katalog-Nummer | |
| Gelatine | Sigma, St. Louis, MO | G6144, G2625 oder G2500 | |
| PicoPlus Atomic Force Microscope | Agilent Technologies, Tempe, AZ | ||
| AFM Cantilever | Veeco, Santa Barbara, CA | MLCT-AUHW |
Referenzen
- Bernal, R., Pullarkat, P. A. Mechanical properties of axons. Phys Rev Lett. 99, 018301-018301 (2007).
- Bray, D. Axonal growth in response to experimentally applied mechanical tension. Dev Biol. 102, 379-389 (1984).
- Chetta, J., Kye, C.
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Nachdrucke und Genehmigungen
