La facilità di accessibilità di un embrione ha permesso per gli esperimenti di mappare i destini delle cellule utilizzando diversi approcci, tra cui pulcino di quaglia chimere ed etichettatura colorante focale. In questo articolo mostriamo un metodo di preparazione uovo che è stato ottimizzato per i lunghi tempi di sopravvivenza.
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Articolo metodologico
Le uova di pollo finestre di Studi sullo sviluppo
In questo articolo
Sommario
Abstract
Lo studio di sviluppo è stato molto semplificato dall'uso del embrione di pollo come modello sperimentale. La facilità di accessibilità di un embrione ha permesso per gli esperimenti di mappare i destini delle cellule utilizzando diversi approcci, tra cui pulcino di quaglia chimere ed etichettatura colorante focale. Inoltre, consente di perturbazioni molecolare di diversi tipi, tra cui il posizionamento di proteine rivestite perle e l'introduzione di DNA plasmidico mediante elettroporazione in ovo. Questi esperimenti hanno fornito dati importanti per lo sviluppo del sistema nervoso centrale e periferico. Per molti di questi studi, è necessario aprire il guscio d'uovo e richiudere senza perturbare la crescita dell'embrione. L'embrione può essere esaminata a successivi stadi di sviluppo con la riapertura del guscio d'uovo. Mentre ci sono diversi metodi eccellente per l'apertura di uova di gallina, in questo articolo si dimostra un metodo che è stato ottimizzato per i lunghi tempi di sopravvivenza. In questo metodo, l'uovo si basa su un lato e una piccola finestra è tagliata nella shell. Dopo la procedura sperimentale, la shell viene utilizzato per coprire l'uovo per la durata del suo sviluppo. Nastro in plastica trasparente sovrastante il guscio protegge l'embrione e aiuta a mantenere l'idratazione durante il resto del periodo di incubazione. Questo metodo è stato utilizzato a partire due giorni di incubazione e ha permesso la sopravvivenza attraverso matura età embrionale.
Protocollo
1. Rimuovere le uova da incubatore
- Mantenere a 37 ° C con umidità relativa di sopra del 60%.
- Rimuovere le uova; girare le uova 90 ° in modo che la base di grandi dimensioni si trova orizzontale.
2. Tampone uova di sterilizzare
- Saturare una pila di garza non sterile con 70% di etanolo.
- Utilizzare 2-3 pezzi per tampone fino a 5 uova. Scartare quando la garza è sporca.
3. Preparazione albume sito rimozione
- Tagliare e inserire un 1 pezzo "x 1" di nastro in plastica 3M appena lasciato la base per proteggere la zona dove l'albumina saranno tratti.
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Discussione
Questo metodo permette di lunghi tempi di sopravvivenza dopo manipolazioni sperimentali. Per esempio, dye-etichettatura studi hanno permesso la sopravvivenza di E10 o poi in uno studio di rilevamento destino (1). Inoltre, è stato utilizzato per gli studi in elettroporazione ovo che forniscono l'alterazione dei livelli di espressione genica e sviluppo necessari per procedere alle fasi successive di sviluppo (2-6). Questa tecnica finestre può essere utilizzato in combinazione con qualsiasi procedura che richiede la sopravvivenza dopo le m.......
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti | |
|---|---|---|---|---|
| Incubatrice rotante | Profi | Mantenere a 37° gradi con umidità relativa superiore al 60% | ||
| EtOH al 70 % | ||||
| Garza | ||||
| Nastro plastico 3M | ||||
| Siringa da 10 cc | 1/singolo uovo | |||
| Aghi da 18G | Ago da 1½ pollice, 1/siringa | |||
| Forbici da dissezione | Lame dritte affilate da 4" | |||
| Uova fecondate |
Riferimenti
- Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).
- Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).
- Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).
- Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).
- Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).
- Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).
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