الإنتاج والكشف عن أنواع الاكسجين التفاعلية (ريوس) في السرطان

ملخص

هنا نقترح طرق بسيطة لاختبار وتقييم وجود أنواع الاكسجين التفاعلية في الخلايا.

الملخص

أنواع الاكسجين التفاعلية تشمل عددا من الجزيئات التي الحمض النووي الريبي والضرر وأكسدة البروتينات والدهون (peroxydation الدهن). هذه الجزيئات المتفاعلة تحتوي على الأوكسجين وتشمل H ₂ O ₂ (بيروكسيد الهيدروجين) ، لا (أكسيد النيتريك) ، O ₂ ^-- (أنيون أكسيد) ، peroxynitrite (ONOO ^--) ، وحامض hydrochlorous (HOCL) والهيدروكسيل (OH ^--) .

ويتم إنتاج الأنواع المؤكسدة ليس فقط في ظل ظروف مرضية (السرطان ، وضخه الدماغية / ، الأمراض العصبية والقلب والأوعية الدموية ، والأمراض المعدية ، والأمراض الالتهابية ¹ ، ² أمراض المناعة الذاتية ، الخ...) ولكن أيضا في حالات فسيولوجية (غير مرضية) مثل الأيض الخلوي ^{3 (4).} في الواقع ، ROS تلعب أدوارا مهمة في العديد من مسارات الإشارات الخلوية (الانتشار ، وتنشيط الخلايا ^{5 ، 6 ، 7} الهجرة وما إلى ذلك). ROS يمكن أن تكون ضارة (ويشار إلى أنه بعد ذلك"الاكسدة وnitrosative") عندما ينتج بكميات عالية في حجرات داخل الخلايا والخلايا تستجيب عموما ريوس upregulating بواسطة المواد المضادة للاكسدة مثل ديسموتاز الفائق (الاحمق) والكاتلاز (CAT) ، البيروكسيداز الجلوتاثيون (GPX) والجلوتاثيون (GSH) الذي يحمي لهم عن طريق تحويل الجذور الحرة إلى جزيئات غير ضارة خطرة (أي المياه). كما تم الفيتامينات C و E كما هو موضح الزبالين ريوس (مضادات الأكسدة).

الجذور الحرة هي مفيدة في كميات منخفضة ^3. البلاعم والعدلات بوساطة الاستجابات المناعية تنطوي على إنتاج وإطلاق NO ، الذي يثبط الفيروسات والجراثيم وانتشار الورم ^8. لا يتفاعل أيضا مع ريوس أخرى ، وبالتالي ، لديها أيضا دور باعتبارها detoxifier (ROS زبال). أخيرا لا يعمل على السفن لتنظيم تدفق الدم وهو أمر مهم للتكيف العضلات على ممارسة طويلة ^{9 و 10.} وقد أظهرت عدة منشورات أيضا أن تشارك في ROS SENS الأنسولينitivity ^{11 و 12.}

طرق عديدة لتقييم ريوس الإنتاج المتاحة. في هذه المقالة نقترح عدة فحوصات بسيطة وسريعة ، وبأسعار معقولة ، وقد تم التحقق من صحة هذه المقايسات والعديد من المنشورات التي تستخدم بشكل روتيني للكشف عن آثارها ريوس أو في خلايا الثدييات. في حين أن بعض هذه المقايسات كشف ريوس متعددة ، والبعض الآخر يكشف سوى ريوس واحد.

البروتوكول

1. الكشف عن استخدام كربوكسي ROS - H ₂ DCFDA

كربوكسي - H ₂ DCFDA غير قابل للالفلورسنت ولكن في وجود ريوس ، عندما يتأكسد هذا كاشف ، يصبح الفلورية الخضراء.

1. مباشرة قبل استخدامها ، وإعداد محلول المخزون جديدة من DCFDA كربوكسي ₂ - H في dimethylsulfoxide العقيمة (DMSO) أو الإيثانول بنسبة 100 ٪. تجنب متعددة الذوبان / تجميد دورات صبغ الخاص.
2. غسل الخلايا مع HEPES مخزنة محلول ملحي (HBSS) أو الفوسفات مخز....

المناقشة

حالات مرضية عديدة مثل الأمراض الالتهابية والسرطانات ونقص التروية / ضخه ، وكذلك العلاجات مثل العلاج الكيميائي أو الإشعاع (أي سيسبلاتين) لحث ريوس فيض الإنتاج. وهكذا ، كشف وقياس مستويات ريوس المهم في كثير من الدراسات والأساسية ما قبل السريرية والسريرية. ومع ذلك ، ونصف سكان العالم يعيشون ريوس قصيرة جدا ، ويمكن أن تكون معقدة للكشف. هنا ، فإننا نقترح الاختبارات البسيطة التي يتم استخدامها بشكل روتيني وتحظى بقبول واسع للكشف عن إنتاج الجذور الحرة في خلايا الثدييات.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
اسم الكاشف	شركة	فهرس العدد	تعليق (اختياري)
5 -- (و- 6) ، كربوكسي - 2 ، 7' - dichlorofluorescein ثنائي الأسيتات (كربوكسي DCFDA)	المسابر الجزيئية	C369	مراقبة
كربوكسي - H 2 DCFDA	المسابر الجزيئية	C400
سلفانيلاميد	سيغما	S9251 - 100G
N - 1 - napthylethylenediamine هيدروكلوريد	سيغما	N9125 - 10G
نتريت القياسية	سيغما	237213 - 100G
GSH / GSSG - GLO الفحص	Promega	V6612	لتحديد أكسدة ، وانخفاض أو أكسدة / تخفيض الجلوتاثيون