후각 망울의 성인에서 태어난 뉴런은 optogenetically Channelrhodopsin2 - 표현 이식 미니어처와 함께 주동이의 철새 스트림과 만성 photostimulation에서 lentiviral 주사를 LED를 사용하여 조절할 수 있습니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
지역 interneurons는 지속적으로 1-3 성인 설치류의 후각 망울에서 생성됩니다. 이 과정에서 측면 뇌실의 벽에서 신경 줄기 세포는 후각 망울에 도달하고 통합할 수있는 주동이의 철새 스트림 (RMS)을 따라 몇 밀리미터에 대한 마이 그 레이션 neuroblasts을 일으키다, 성인 neurogenesis했다. 다른 단계와 후각 회로 전부터으로 성인에서 태어난 뉴런 통합의 영향을 연구하기 위해서는 선택적으로 라벨과 뉴런의 특정 인구의 활동을 조작하는 것이 필요합니다. optogenetic 기술의 최근 발전은 정확하게 주위의 뉴런은 4,5 영향을주지 않고 뉴런의 특정 일대를 활성화하기 위해 조명을 사용하는 기회를 제공합니다. 여기, 우리들은 후각 망울에 도달하기 전에 RMS의 neuroblasts의 temporally 제한 일대에서 virally 표현 Channelrhodopsin2 절차의 시리즈 (ChR2) YFP를 제시하고 NE 성인 탄생이 될urons. 또한, 우리는 ChR2 - 표현 뉴런의 생체내 자극에 만성위한 LED 미니 이식해서 보정하는 방법을 보여줍니다.
프로토콜
1. Stereotaxic 주사
- 이러한 실험에 사용되는 바이러스는 Channelrhodopsine2 - YFP (노란색 형광 단백질)을 표현할 수있는 HIV 바이러스에 따라 복제 - 결함 lentiviral 벡터는 퓨전 synapsin업자 6 기반 구축. 플라스미드는 넉넉한 K. Deisseroth의 연구 그룹 (에서 제공한 http://www.stanford.edu/group/dlab/optogenetics/index.html ). Lentiviruses 설립 프로토콜 7에 따라 실험실에서 상용 소스에서 얻은 또는 생산 수 있습니다. 평균 벡터 titers은 10 10 도입 단위 / ML의 순서에 있었다. 바이러스성 aliquots는 -80 ° C에서 저장하고 피펫로드하기 전에 해동해야합니다. 복수 동결 / 해동 사이클은 피해야한다. 직접 드라이 아이스에 결코 노출 바이러스 솔루션입니다.
- 표준 피펫 풀러 (셔터 P에 borosilicate 유리 모세관을 사용하여 유리 pipettes 준비-97 피펫 풀러). 당기 설정이 제대로 길고 까다로운 피펫을 양보하도록 조정해....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
Optogenetic 도구는 최근 후각 시스템에서 성인 태어난 뉴런의 연결을 포함하는 선택적 인구, 이상 우리의 통제를 증가하고있다. 여기 성인 태어난 뉴런의 특정 인구 ChR2 - YFP을 표현하는 lentiviral 벡터의 stereotaxic 주사를 수행하는 방법에 대해 설명합니다. 조심스럽게 기간 후 주사를 모니터링함으로써, 우리는 상대적으로 균일한 나이가 성인에서 태어난 뉴런의 일대의 활동을 분석하고 조작하실 수 있습니다.
때문에 그들의 낮은 확산 보급, 높은 전달 효율과 RMS의 neuroblasts을 위해 상대적으로 좋은 tropism의 lentiviral 벡터는 같은 retroviruses 또는 adeno - 관련 바이러스 (AAV)와 같은 다른 바이러스 벡터에 비해 선호되어야합니다. 그들이 선택적으로 같은 줄기 세포 또는 progenitors로 나누어 세포를 감염하기 때문에, 레트로 바이러스 벡터는 subventricular 영역에 주입 및 신생아 뉴런의 작은.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 작품은의 "ERA - NET 뉴런 '의 프레임에있는 생명 보험 회사"Novalis - Taitbout "가르슈 DES Neurosciences 드 파리 (ENP), 회사 직원 Nationale 드 라 공들인"ANR - 09 - NEUR - 004 "에 의해 지원되었다 유럽위원회에 의해 FP7 프로그램, "재단 부어 라 공들인 Medicale"Letten 재단과 파스퇴르 재단.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 자료 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| 케타민을 | Merial | Imalgène 1000 | |
| Xylazine | 바이엘 건강 | Rompum 0.2 % | |
| 피펫 풀러 | 셔터 | P - 97 | |
| 유리 모세 혈관 (3.5 ") | Drummond 과학 | 3 - 000-203 - G / X | |
| Nanoject II Microinjector | Drummond 과학 | 3-000-204 | |
| 고속 드릴 외과 | 파인 과학 도구 | 18000-17 | |
| 마이크로 드릴 철강 털은 0.7mm 팁 직경 | 파인 과학 도구 | 19008-07 | |
| LED 파란색 CMS 4.6 W | OSRAM | LBW5SN | |
| 여성 전기 커넥터 (2.54 mm) | 피셔 Elektronik | BL5.36Z | |
| LED를위한 전류 컨트롤러 (최대 : 1A) | A1W Electronik | HKO - KL50 - 1000 | |
| 펄스 발생기 | AMPI | 마스터 - 8 | |
| 광 파워 미터 | 토르 실험실 | PM100 | |
| Cyanoacrylate 접착제 | Loctite | 454 | |
| Polycarboxylate 시멘트 (첫 번째 레이어 시멘트) | Septodont | Selfast (# 0068Q) | |
| 메타 크릴 레이트 시멘트 (두 번째 레이어 시멘트) | GC InternationalCorp. | Unifast 트라드 - 리퀴드 (# 339292) Unifast 트라드 - 파우더 (# 339114) | |
| Carprofen | 화이자 | Rimadyl |
참고문헌
- Lledo, P. M. Adult neurogenesis and functional plasticity in neuronal circuits. Nat. Rev. Neurosci. 7, 179-193 (2006).
- Alonso, M. Turning astrocytes from the rostral migratory stream into neurons: a role for the olfactory sensory organ.....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
