Взрослый происхождения нейроны обонятельной луковицы можно управлять с помощью optogenetically Channelrhodopsin2 экспрессией лентивирусов инъекций в ростральной миграционных потоков и хронических фотостимуляции с имплантированным миниатюрный светодиод.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Селективный Вирусный трансдукция взрослых происхождения обонятельных нейронов при хроническом В естественных условиях Optogenetic Стимуляция
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Местное интернейронов постоянно регенерируются в обонятельной луковице взрослого грызунов 1-3. В ходе этого процесса, называемого взрослого нейрогенеза, нервные стволовые клетки в стенках бокового желудочка приводит к нейробластов, которые мигрируют на несколько миллиметров по ростральной миграционных потоков (RMS), чтобы достичь и включить в обонятельной луковице. Для изучения различных этапов и влияния взрослых родился нейронов интеграция в существующий обонятельных схем, необходимо выборочно этикетки и манипулировать деятельности этой специфической популяции нейронов. Недавнее развитие optogenetic технологий дает возможность использовать свет, чтобы активировать именно этой конкретной когорты нейронов, не затрагивая окружающих нейронов 4,5. Здесь, мы представляем ряд процедур, чтобы выразить вирусно Channelrhodopsin2 (ChR2)-в YFP временно запрещен когорте нейробластов в RMS, не дожив до обонятельной луковицы и стать взрослым родился пеurons. Кроме того, мы покажем, как имплантат и калибровки миниатюрный светодиод в естественных условиях хронической стимуляции ChR2-экспрессирующих нейронов.
Протокол
1. Стереотаксической инъекции
- Вирус, используемый в этих опытах репликации с дефицитом лентивирусов вектора на основе вируса ВИЧ, чтобы выразить Channelrhodopsine2-YFP (желтый флуоресцентный белок) слияние построить обусловлен промоутер synapsin 6. Плазмида была любезно предоставлена К. Дейссерот "с исследовательской группой ( http://www.stanford.edu/group/dlab/optogenetics/index.html ). Лентивирусов могут быть получены из коммерческих источников или произведенных в лаборатории в соответствии с установленными протоколами 7. Средний титр вектора были в порядке <....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Optogenetic инструментов в последнее время увеличили контроль над селективные нейронных популяций, в том числе взрослых родился нейроны обонятельной системы. Здесь мы опишем, как выполнять стереотаксической инъекции лентивирусов вектор выражения ChR2-YFP в конкретной популяции взрослых родился нейронов. Тщательный мониторинг период после инъекции, мы имеем возможность анализировать и управлять деятельностью когорте взрослых родился нейронов с относительной однородной возраста.
Из-за их низко.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа была поддержана компания по страхованию жизни "Новалис-Тетбу", Школе нейронаук Парижской (ЕПС), Национальное агентство по La Recherche "ANR-09-NEUR-004" в рамках "ERA-NET нейрона" из FP7 программы Европейской комиссии ", Фонд залить La Recherche Medicale", Letten фонда и Фонда Пастера.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Материал | Компания | Каталог Нет. | |
| Кетамин | Merial | Imalgène 1000 | |
| Ксилазин | Bayer здравоохранения | Rompum 0,2% | |
| Внесите Puller | Саттер | Р-97 | |
| Стеклянных капилляров (3,5 ") | Драммонд Научные | 3-000-203-G / X | |
| Nanoject II Microinjector | Драммонд Научные | 3-000-204 | |
| Высокая скорость хирургическое сверло | Инструменты изобразительных наук | 18000-17 | |
| Micro Drill Сталь Заусенцы диаметр кончика 0,7 мм | Инструменты изобразительных наук | 19008-07 | |
| Светодиодные CMS синий 4,6 Вт | OSRAM | LBW5SN | |
| Женский электрический разъем (2,54 мм) | Fischer Elektronik | BL5.36Z | |
| Регулятор тока для светодиодных (макс: 1A) | A1w ELECTRONIK | HKO-KL50-1000 | |
| Генератор импульсов | Ampi | Мастер-8 | |
| Оптический измеритель мощности | Тор Labs | PM100 | |
| Цианакрилатный клей | Loctite | 454 | |
| Поликарбоксилатные цемент (цемент первый слой) | Septodont | Selfast (# 0068Q) | |
| Метакрилат цемента (второй слой цемента) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad - Liquid (# 339292) Unifast Trad - порошок (# 339114) | |
| Carprofen | Pfizer | Римадил |
Ссылки
- Lledo, P. M. Adult neurogenesis and functional plasticity in neuronal circuits. Nat. Rev. Neurosci. 7, 179-193 (2006).
- Alonso, M. Turning astrocytes from the rostral migratory stream into neurons: a role for the olfactory sensory organ.....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
