يوصف مستحضر عالي النقاء من الخلايا الجذعية الماوس الرئة. ويولى اهتمام محدد لعزل الخلايا الجذعية التقليدية فرعية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الخلايا الجذعية الرئة (DC) تلعب دورا أساسيا في مجال الاستشعار عن غزو الجراثيم ، فضلا عن 1،2 في السيطرة على ردود مولد للتحمل 3 في الجهاز التنفسي. وقد وصفت ما لا يقل عن ثلاث مجموعات فرعية من الخلايا الجذعية الرئيسية الرئة في الفئران : DC التقليدية (CDC) 4 ، بلازماوية DC (PDC) (5) وإنتاج الإنترفيرون العاصمة القاتل (IKDC) 6،7. مجموعة فرعية منها هي فرعية العاصمة الأبرز في الرئة 8.
العلامة المشتركة المعروفة لتحديد مجموعات فرعية هي العاصمة CD11c ، وهو النوع الأول إنتغرين عبر الغشاء (β2) الذي أعرب أيضا عن حيدات ، الضامة ، العدلات وبعض الخلايا باء 9. في بعض الأنسجة ، وذلك باستخدام CD11c كعلامة لتحديد الماوس العاصمة غير صالحة ، كما هو الحال في الطحال ، حيث ان معظم الخلايا + CD11c تمثل مجموعة فرعية منها التي تعبر عن مستويات عالية من التوافق النسيجي الرئيسي الثاني فئة المعقدة (MHC - II). ومع ذلك ، فإن سرطان الرئة هو أكثر الأنسجة المتجانسة حيث تكونالجانب فرعية العاصمة ، وهناك نسبة عالية من السكان الخلايا المتميزة التي تعبر عن مستويات عالية من CD11c نوبة انخفاض مستويات MHC - II. استنادا إلى توصيف ومعظمها على التعبير عن F4/80 ، علامة بلعم الطحال ، وقد تم تحديد مرحبا CD11c الرئة لو MHC - II سكان الخلية كما الضامة الرئوي (10) وأكثر في الآونة الأخيرة ، تمهيدا العاصمة المحتملة 11.
على النقيض من PDC الماوس ، اقتصر على دراسة الدور المحدد للمركز السيطرة على الأمراض في استجابة مناعية الرئوي نظرا لعدم وجود علامة معينة يمكن أن تساعد في عزل هذه الخلايا. لذا ، في هذا العمل ، ونحن تصف الإجراء لعزل عالي النقاء الماوس الرئة CDC. عزل مجموعات فرعية العاصمة الرئوي يمثل أداة مفيدة جدا للحصول على نظرة ثاقبة وظيفة هذه الخلايا في الاستجابة لمسببات الأمراض التنفسية فضلا عن العوامل البيئية التي يمكن أن تؤدي إلى استجابة المضيف المناعية في الرئة.
البروتوكول
1. نضح الرئة وحيدة الخلية تعليق
- الموت ببطء والفأر مع حقنة مخدر داخل الصفاق من خليط الكيتامين / زيلازين (في ملغم / الماوس الكيتامين 1.8 ، زيلازين 0.19) ، واستنزاف عن طريق الوريد الفخذي
- كشف التجويف الصدري عن طريق قطع وسحب بلطف يعود الجلد الخارجي للالبريتوني. المضي قدما لفتح الحجاب الحاجز عن طريق قطع القفص الصدري لفضح كل من القلب والرئتين.
- يروي بلطف الرئتين باستخدام حقنة 5 مل مملوءة EDTA - HBSS (1MM EDTA في HBSS - المغنيسيوم الكالسيوم الحرة /)....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
عزل العاصمة الماوس الرئوية هي تقنية هامة لدراسة طائفة واسعة من المحفزات في الجهاز التنفسي. عملية الحصول على هذه الخلايا وتشمل الخطوات الحاسمة التي تمنع فقدان الخلايا وكذلك بقاء الخلية والنقاء. سوف Perfusing الرئة قبل جمع مساعدة للقضاء على أي خلايا المحيطية وكذلك الحد من التلوث الكريات الحمراء. استخدام آلية يمكن تفارق advanteogus عندما يتم التعامل مع عدد كبير من الرئتين ، وإلا يمكنك اختيار بديل للبروتوكول ، واضعة في اعتبارها أنه ينبغي القيام به تشتت النسيج بعد الهضم كولاجيناز بلطف .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر لمارلين ديتريش في مرفق التدفق الخلوي LSU الأساسية لمساعدتها على فرز الخلايا وموترام بيتر لمساعدته مع microphotographs. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل معهد الطيران المصاحبة للبحوث الطبية ، وبرنامج بحوث LSU جائزة للمنافسة ، ومنح المعاهد الوطنية للصحة / NIAID P20 RR020159 وR03AI081171.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| اسم الكاشف | شركة | فهرس العدد | تعليق (اختياري) |
| ACK lysing العازلة | Invitrogen | D6 - 0005DG | |
| مكافحة فأر CD11c (HL3) | Pharmingen دينار بحريني | 5580979 | PE - Cy7 مترافق |
| مكافحة فأر IA / IE (269) | BD - Pharmingen | 553623 | مترافق FITC |
| Collangenase نوع 1A | سيغما | 9891 - 500MG | |
| خلية مصافى | فالكون دينار بحريني | 352340 ، 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| أنا الدناز | سيغما | D5025 - 150KU | |
| هانك محلول الملح المتوازن | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes العازلة الحل | Invitrogen | 15630 | |
| أطباق بتري 60 مم | فالكون دينار بحريني | 351016 | |
| GentleMACS ™ C أنابيب | Miltenyi | 130-093-237 | |
| طيف MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS برو ™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS الأغنية | دينار بحريني |
المراجع
- Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. Sensing pathogens and tuning immune responses. Science. 293, 253-256 (2001).
- Banchereau, J. Immunobiology of dendritic cells. Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).
- Manicassamy, S., Pulendran, B.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
