Method Article

Воспроизводимые мыши седалищного нерва и Давка Последующие оценки регенерации полного анализа горы мышц

DOI:

10.3791/3606

⸱

February 22nd, 2012

 , 
1Center for Neural Repair and Rehabilitation, Temple University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом докладе мы описываем способ раздавить мышь седалищного нерва. Этот метод использует доступны гемостаза щипцы и легко воспроизводимым и производит полный седалищный нерв давка. Кроме того, мы опишем способ подготовить мышцы все крепления подходят для анализа регенерации нерва после седалищный нерв давка.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Регенерация в периферической нервной системы (ПНС) широко изучается как для его отношение к болезни человека и понять, надежная регенеративный ответ монтируется нейронов ПНС что, возможно, освещение неудач ЦНС регенерации 1. Седалищный нерв давке (axonotmesis) является одним из наиболее распространенных моделей повреждения периферического нерва у грызунов 2. Дробление прерывания все аксоны, но Шванн клетки базальной пластинки сохраняются, так что восстановление оптимального 3,4. Это позволяет исследователю изучать именно способность растущих аксонов взаимодействовать как с клетки Шванн и базальной пластинки 4. Крысы в ​​целом были предпочтительным животных моделей для экспериментальных давке нерва. Они широко доступны и их пораженном седалищного нерва дает разумное приближение человека поражения нерва 5,4. Несмотря на меньший размер, чем нерва крысы, мыши нерв имеет много схожих качеств. Самое главное, хотя, меморандумы о взаимопониманииэлектронной модели становятся все более ценными из-за широкой доступности трансгенных линий теперь позволяет для детального расчленения отдельных молекул важны для регенерации нерва 6, 7. До исследователи использовали несколько методов для получения давке нерва или травмы, включая простой угловой пинцет, охлажденные щипцы, пинцеты гемостаза, сосудистые зажимы, и следователь-зажимы предназначены 8,9,10,11,12. Исследователи также использовали различные методы маркировки в месте повреждения, включая шовный материал, частицы углерода и люминесцентные бусины 13,14,1. Мы описываем наш метод получения полного воспроизводимо седалищного нерва с поклонников точных и постоянных маркировки краш-сайт с помощью тонкой гемостаза щипцы и последующих углерода краш-сайт маркировки. В рамках нашего описания седалищного нерва процедура давки мы также включили относительно простой метод мышечного все смонтировать мы используем, чтобы в дальнейшем количественно регенерации.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Животное субъектов

1.1. Лечение

  1. Все животные процедуры должны выполняться с одобрения местных животных Учреждения по уходу и Комитет по этике и в соответствии с использованием и Комитета и Национального института здоровья принципы, меры, принимаемые для минимизации боли и дискомфорта.
  2. Наши мыши содержались при температуре контролируемых условиях на 12-часовой световой обратный и темно цикла, в то время кормили мышей чау и воды вволю.
  3. Для изучения регенерации взрослых, мышей должна быть не менее 6-недельного возраста, когда седалищный нерв давки не производится. Это возраст за время, обрезка polyneural нервно....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы представили метод получения полного надежно седалищный нерв давка с точной маркировки давке сайта. Как упоминалось ранее, седалищный нерв давка общую модель повреждения периферического нерва у мышей и крыс. Хотя каждый метод имеет давка свои преимущества и недостатки, мы нашли этот метод требует полного давка, что было легко, отмеченные как минимум специального оборудования (например, специальные зажимы, и т.д.).

Давка методы

Наиболее распространенным инструменто.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нам нечего раскрывать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана грантами NIH K08NS065157 (для TAF) Кроме того, Пенн центра опорно-двигательного аппарата, премии Количество P30AR050950 из Национального института артрита, костно-мышечной и кожных заболеваний поддержала эту работу (TAF и Стивен С. Шерер). Наконец, Shriners Детская научно-исследовательский центр Начальное финансирование (TAF) поддержал эту работу. Мы хотели бы поблагодарить д-р Ен Джина Сына сначала демонстрируют все горе процедуры и Эми А. Кима за помощь в создании эскизов на рисунке 1.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Наименование (описание / кол-во) Поставщик Номер по каталогу
Мини Clipper с № 0000 Лезвие Roboz RC-5903
Наир для удаления волос (9 гр.) Церковь и Дуайт завод, ОАО N / A
Бетадин хирургических скраб (1 галлон) Fisher Scientific 19066452
Офтальмологическая мазь (1 унция). Fisher Scientific 19082795

Хирургические инструменты:

Наименование (описание / кол-во) Поставщик Номер по каталогу
FST 250 Горячий шарик стерилизатор Изобразительных средств наук 18000-45
Iris Ножницы (11 см) Инструменты Всемирной Precision 500216
Поттс-Смит Пинцет (прямой, 18 см, 1x2 зубы) Изобразительных средств наук 11024-18
Макферсон-Vannas Ножницы (5 лезвий мм) Инструменты Всемирной Precision 14124-G
Дюмон # 5 щипцы - Dumoxel Стандартный совет Изобразительных средств наук 11252-30
Дюмон # 5/45 Пинцет - Dumoxel Стандартный совет Изобразительных средств наук 11251-35
Ultra Fine Hemostats (прямые, гладкие поверхности внутри) Изобразительных средств наук 13020-12
Угольный порошок (500 г) Fisher Scientific C272-500
Размер 6-0 Швы с C-1 иглы (стерильный, шелк, черный, плетеные,Невсасываемые, 18 "Length; коробка из 36) Roboz SUT-1073-11
Reflex клип объекта применения (для 9 мм клипов) Инструменты Всемирной Precision 500345
9-мм нержавеющей стали Reflex клипы (100/box) Инструменты Всемирной Precision 500346

Animal Care:

Наименование (описание / кол-во) Поставщик Номер по каталогу
0,9% раствор хлорида натрия инъекций (без консервантов, 20 мл) Hospira 0409-4888-20
Полное Homeothermic системы одеяло с гибкий зонд (средний, 115 В переменного тока, 60 Гц) Гарвардский аппарата 507222F

Хирургическое Platforм и ретракторы:

(Куплены в местном хозяйственном магазине)

Имя (описание /) Количество
Платформа из нержавеющей стали (молотый; ~ 12 "x12" x1 / 8 ") 1
Кнопка магниты (Пример: Eclipse E825) 3
Болты из нержавеющей стали (3: "Да, Диаметр Определяется магнитов Button) 3
Гайки из нержавеющей стали (размер подходит для болтов) 9
Резинки (Light напряжения) 3
Насекомые выводов (с обеих сторон Бент к форме крючки) 3

Полу-Thins:

Наименование (описание / кол-во) Поставщик </ STRONG> Номер по каталогу
Параформальдегид (1 кг) Sigma-Aldrich P6148-1 кг
Диаммоний фосфат натрия безводный (500 г, для приготовления фосфатный буфер) Fisher Scientific S375-500
Одноосновного фосфата натрия безводный (1 кг, используются для подготовки фосфатный буфер) Fisher Scientific AC38987-0010
Глутаральдегид (50%, 10 х 10 мл) Тед Пелла, Inc 18431
Осмия (4% водный, 10 х 10 мл) Тед Пелла, Inc 18465
Окиси пропилена (450 мл) Тед Пелла, Inc 18601
Код для вставки 812 (комплект для жестких блоков / высокой контрастностью изображения) Электронная микроскопия наук 14120
Toluidiпе Blue (25 г) Тед Пелла, Inc 19451

Всего горы мышц Подготовка и иммуногистохимического:

Наименование (описание / кол-во) Поставщик Номер по каталогу
Параформальдегид (1 кг) Sigma-Aldrich P6148-1 кг
Диаммоний фосфат натрия безводный (500 г, для приготовления фосфатный буфер) Fisher Scientific S375-500
Одноосновного фосфата натрия безводный (1 кг, используются для подготовки фосфатный буфер) Fisher Scientific AC38987-0010
10% BSA Разбавитель / Блокирование решения (200 мл)

Киркегор & Perry Laboratories, Inc 50-61-00
Тритон Х-100 (100 мл) Dot Научно инкорпорейтед 9002-93-1
Глицин, 98% (1 кг) Fisher Scientific AC12007-0010
Ткань-Tek Cryo-OCT соединений (на примере 12, 4 унции бутылки) Fisher Scientific 14-373-65
Sylgard DOW 170 (2 фунта Kit) Fisher Scientific NC9492579
Нержавеющая сталь насекомых пальцы, размер 1 (100/pkg) Изобразительных средств наук 26001-40
Tetramethylrhodamine-A-бунгаротоксина (0,5 мг) Sigma-Aldrich T0195-.5MG
Мышь моноклональных антител против SMI-312 (0,1 мл) Covance SMI-312R
Мышь моноклональных антител против SV2 (0,1 мл) Развития исследований Hybridoma банка (DSHB) SV2
Кролик Polyклонального антитела против GAP-43 Novus биологические NB300-143
Flourescein сопряженных антимышиного IgG, Fcγ Подкласс 1 Удельный Джексон ImmunoResearch 11 5-095-205
DyLight 649 Сопряженные Donkey Anti-IgG кролика Джексон ImmunoResearch 711-495-152
4 ',6-диамидино-2-фенилиндола (DAPI, dilactate, 10 мг) Invitrogen D3571
Vectashield Монтаж среднего (10 мл) Vector Laboratories H-1000
SuperFrost Plus микроскопа (белый, Размеры: 75 х 25 мм, в упаковке 144) Fisher Scientific 12-550-15
Fisherfinest Премиум покровные стекла (размер: 40 х 22 мм, в упаковке 1 гр.) Fisher Scientific 12-548-5C

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pan, Y. A., Misgeld, T., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. Effects of neurotoxic and neuroprotective agents on peripheral nerve regeneration assayed by time-lapse imaging in vivo. J. Neurosci. 23, 11479-11488 (2003).
  2. Magill, C., Tong, A., Kawamura, D., Hayashi, A., Hunter, D.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Sciatic Nerve CrushMouse Nerve RegenerationHemostatic ForcepsCarbon Site MarkingMuscle Whole MountNeuromuscular Junction AnalysisPeripheral Nerve InjuryAxonal Regeneration AssessmentNerve Exposure TechniqueSurgical Retractor Placement

Related Articles