تفاصيل هذا العمل في إعداد الليفين 3D الاطر لزراعة الخلايا الجذعية والتمييز plutipotent. ويمكن استخدام مثل هذه السقالات لفحص آثار المركبات البيولوجية المختلفة على سلوك الخلايا الجذعية كذلك بصيغته المعدلة لاحتواء نظم لتقديم الأدوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إعداد الفايبرين 3D السقالات لتطبيقات الجذعية زراعة الخلايا
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تم العثور على خلايا جذعية في طبيعيا microenvironments 3D في الجسم الحي، والتي غالبا ما يشار الى جذع الخلية المتخصصة 1. زراعة الخلايا الجذعية داخل السقالات مادة بيولوجية 3D يوفر وسيلة لتحاكي بدقة هذه microenvironments، وتوفير ميزة على الطرق التقليدية لثقافة 2D باستخدام البوليسترين، فضلا عن طريقة لاستبدال الأنسجة الهندسة 2. في حين تم استخدام 2D polystrene زراعة الأنسجة لغالبية تجارب زراعة الخلايا، ويمكن 3D السقالات مادة بيولوجية عن كثب تكرار microenvironments وجدت في الجسم الحي من خلال تمكين إنشاء أكثر دقة للقطبية الخلية في البيئة والتي تمتلك الخصائص البيوكيميائية والميكانيكية مماثلة إلى الأنسجة اللينة. (3) ومجموعة متنوعة من مشتقة بشكل طبيعي وجرى التحقيق الاصطناعية السقالات مادة بيولوجية كما بيئات 3D لدعم نمو الخلايا الجذعية. بينما يمكن توليفها السقالات الاصطناعية لديها أكبر Rأنج من الخواص الميكانيكية والكيميائية وغالبا ما يكون أكبر استنساخ، وتتكون غالبا الحيوية الطبيعية من البروتينات والسكريات الموجودة في مصفوفة extracelluar ونتيجة لذلك تحتوي على مواقع الربط للالتصاق الخلايا ودعم ثقافة الخلية بسهولة. وقد تم الليفين السقالات، التي تنتجها البلمره والفيبرينوجين بروتين تم الحصول عليها من البلازما، والتحقيق فيها على نطاق واسع لمجموعة متنوعة من تطبيقات هندسة الأنسجة على حد سواء في التجارب المختبرية والحية 4. ويمكن تعديل هذه السقالات باستخدام مجموعة متنوعة من وسائل لدمج أنظمة إطلاق للرقابة لتوفير العوامل العلاجية 5. وقد أظهرت الأعمال السابقة التي يمكن أن تستخدم مثل هذه السقالات للخلايا الجذعية الجنينية ثقافة بنجاح، ويمكن استخدامها لهذا النظام القائم على ثقافة سقالة لفحص الآثار المترتبة على عوامل النمو المختلفة على تمايز الخلايا الجذعية داخل المصنف 6،7.
هذه تفاصيل بروتوكول عملية polymerizinز الليفين السقالات من الحلول الفيزيولوجية باستخدام النشاط الأنزيمي من ثرومبين. تستغرق العملية 2 أيام لاستكمال، بما في ذلك خطوة لغسيل الكلى بين عشية وضحاها من أجل حل الفيزيولوجية لإزالة citrates التي تمنع البلمرة. هذه الأساليب مفصلة تعتمد على تركيز الفيبرينوجين مصممة على أن تكون الأمثل لالجنينية الجذعية المحفزة التي يسببها وثقافة الخلية. حققت الجماعات الأخرى مزيد من السقالات الليفين لمجموعة واسعة من أنواع الخلايا والتطبيقات - مما يدل على براعة هذا النهج 8-12.
البروتوكول
ملاحظات قبل البدء في البروتوكول: الفبرينوجين هو بروتين الدم المشتقة ويجب أن تكتمل المناسبة وبالتالي التدريب على السلامة قبل المناولة. هذا البروتوكول يتطلب 2 أيام لاستكمال ذلك الوقت الثقافات الجذعية المطلوبة بشكل مناسب للتأكد من أنهم على استعداد للبذار. من ناحية حساب مقدار الفيزيولوجية لوزن خارج، وثلاثة أطباق بتري 35 ملم من تريس مخزنة المالحة (TBS، ودرجة الحموضة 7.4) التي تحتوي على 110-130 ملغ من الفيبرينوجين حل في 3 مل من TBS ستكون كافية لانتاج 1 24 لوحة تحتوي على 400 جيد السقالات الليفين ميكرولتر في كل بئر.
1. يوم واحد: جعل الحلول الفيزيولوجية ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذا البروتوكول المفصلة أعلاه يوفر طريقة لتوليد 3D السقالات الليفين للالجذعية المحفزة ثقافة الخلية، وتحديدا لالجنينية الماوس والناجم عن الخلايا الجذعية المحفزة. هذه مادة بيولوجية 3D نظام يستند إلى ثقافة أكثر دقة يقلد محراب الخلايا الجذعية الموجودة في الجسم الحي، ونتيجة لذلك، يمكن استخدامه لفحص الاشارات البيولوجية لتحديد آثارها على تمايز الخلايا الجذعية 6. وقد أظهرت ملاحظاتنا أن هذه السقالات عندما المصنف مع الخلايا الجذعية المشتقة الهيئات مضغي الشكل تبقى لمدة 2 ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
فإن الكتاب يود أن يقر NSERC ديسكفري جرانت 402462 "السقالات الأنسجة المهندسة لمراقبة السلوك الناجم عن الخلايا الجذعية المحفزة".
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
المعدات المطلوبة:
ميزان تحليلي
درجة الحموضة متر
الأنسجة حاضنة الثقافة (37 درجة مئوية، ونسبة 5٪ CO 2)
إثارة لوحة
طيفي
معقم غطاء محرك السيارة زراعة الأنسجة
تريس مخزنة المالحة (الرقم الهيدروجيني 7.4) (4 L تحتاج زائد بما فيه الكفاية لتذويب الفيزيولوجية)
50 ملي مول كلوريد الكالسيوم حل
مخروطي أنابيب معقمة (15 أو 50 مل)
35 ملم أطباق بتري
أنابيب غسيل الكلى (7،000 ميغاواط قطع)
غسيل الكلى لقطات
5.0 ميكرون مرشحات محقنة
ملفوفة بشكل فردي عقيم حقنة 0.22 ميكرون مرشحات
محقنة
24 زراعة الأنسجة بشكل جيد لوحات
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تعليقات |
| الفيبرينوجين (الإنسان) | Calbiocتنحنح | 341578 | |
| ثرومبين (الإنسان) | سيغما | T7009 |
المراجع
- Keung, A. J., Healy, K. E., Kumar, S., Schaffer, D. V. Biophysics and dynamics of natural and engineered stem cell microenvironments. Wiley Interdiscip. Rev. Syst. Biol. Med. 2, 49-64 (2010).
- Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert, S. E. Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues and cell delivery.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
