조혈을위한 3D 문화 시스템은 인간 코드 혈액과 leukemic 골수 세포를 사용하여 설명합니다. 방법은 세포외 기질 단백질로 코팅 다공성 합성 폴리 우레탄 발판의 사용을 기반으로합니다. 이 발판은 세포의 광범위한 수용하는 적응이다.
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이 논문에서
요약
초록
골수 (BM)은 spatially 조직 세포 microenvironments에 의해 규제되는 복잡한 입체 (3D) 조직이 어떤 점에서의 조혈입니다 틈새에게 2-4 되나, 조혈 줄기 세포는 혈액 세포 형성 1을 유지하기 위해 독특한 microenvironment를 필요로합니다. BM 틈새의 조직은 정상 또는 악성 BM 5의 기능 또는 기능 장애에 중요합니다. 따라서 전직 생체내의 흉내를 사용하여 생체내 microenvironment에의 이해 우리 leukemogenesis 6, 분자 세포 및 microenvironmental determinants을 명료하게하다 도움이 될 것이다.
현재 조혈 세포 중 allogenic 또는 이종 개체의 stromal 세포와 공동의 문화 또는 외인성 크린 시토킨 8의 추가 요구 (2D) 2 차원의 조직 문화 flasks / 잘 접시 7에서 체외에서 배양해 있습니다. 이러한 조건 인공 있으며 생체내에 따라 다를 9,10의 분화 및 손실을 초래할 수있는 비정상적으로 높은 시토킨 농도로 세포를 노출 점에서 microenvironment.
여기, 우리는 생체내 3D 성장 환경에서을 시뮬레이션 및 외인성 성장 요인 부재에 multilineage의 조혈을 지원하는 새로운 3D 골수 배양 시스템을 제시한다. 폴리 우레탄 (PU)으로 만들어진이 시스템에 사용되는 높은 다공성 발판은 2D 11에서 기존의 단일층 문화보다 높은 특정 표면 영역에 걸쳐 고밀도 세포 성장을 용이하게합니다. 우리의 연구는이 모델은 인간의 탯줄 혈액 (CB) mononuclear 세포 (MNC) 외인성 크린 시토킨의 부재에서 12 일차 leukemic 세포의 성장을 지원하는 것을 시사하고있다. 이 소설 차원 흉내는 조혈을 연구하고 백혈병에 대한 새로운 치료법을 탐구하는 인간의 실험적인 모델의 개발을위한 실행 가능한 플랫폼을 제공합니다.
프로토콜
1. 공사장 공중 발판의 발판 제조 및 바이오 작용화
- 배양 접시 디스크의 형태로 우레탄 공사장 공중 발판 (기공 크기 1백~2백50밀리미터, 다공성 90~95%)를 조작하려면 다음 폴리머 솔루션 (Dioxan에서 5wt %)를 준비하여 열 유도된 상 분리에게 13 프로세스를 사용하여 동결 이후 용매 승화 (그림 1A).
- ECM 단백질 (그림 1B)와 코팅 이전 0.5 X 0.5 X 0.5 mm의 조각으로 발판 디스크를 자르고.
- 다음 1 분 및 인산으로 전송을 위해 에탄올 (70 %)에서 그들을 immersing하여 사전 서부 유럽 표준시 공사장 공중 발판은 20 분 동안 (PBS) 염분 버퍼. 그렇다면 3,630 XG에 10 분 동안 원심 분리기와 단백질 솔루션을 추가합니다.
- 20 분 대한 1,420 XG에서 단백질 용액에 공사장 공중 발판을 원심 분리기.
- 표면 모공 차단을 해제하고, 발판에 깊이 침투하는 놓는 세포를 허용하기 위해서는 10 분 동안 910 XG에 한 번만 더 공사장 공중 발판 원심 분리기PBS 인치
- 에탄올 2 H (70 %)에 대한 침수와 230 V, 50 Hz에서, 0.14, 자외선 ....
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토론
여기서 제시 전직 생체내 3D 문화 시스템은 우리가 조혈의 3D biomimicry를 확립 수 있도록 그 recapitulates 원래 BM 건축과 외인성 크린 시토킨의 독립 세포 표현형. 3D 모델은 구조와 정상 및 비정상 조혈 세포가 생체내에 발생한 것과 유사한 조건에서 분아 따위에 의해 중식 수 microenvironment를 제공합니다.
고분자 비계 재료의 선택 biomimicry 디자인에 중요한 단계를 나타낸다. biomaterials의 중요 장점은 필요한 건축, 구조적 속성과 필요한 biosignals을 제공하여 생체내 환경을 모방 고분자에 점점 관심을 이끌고있다. 그들의 즉각적인 환경에 민감 살아있는 세포와 직접 접촉에 항상 있기 때문에 고분자는 biomedicine 그들의 응용에 필수적인 최소 요구 사항을 충족해야합니다. 일반적으로 전거래 발판이 정의된 3 차원 구조, 부피 비율 및 재현성 제조 당 높은 표면적을 .......
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공개 사항
우리는 공개 할게 없다.
감사의 글
이 작품은 리처드 토마스 Leukaemia 기금, 레이디 타타 기념관 신탁, Northwick 공원 병원 Leukaemia 연구 신탁 기금 및 건강 연구의 국립 연구소 (NIHR), 영국에 의해 재정 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Dioxan | Invitrogen | D20,186-3 | |
| PBS | GIBCO, by Life Technologies | 14190-094 | |
| IMDM | Invitrogen | 12440-053 | |
| Ficoll-Paque | GE Healthcare | 17-1440-02 | |
| Penicillin/Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 | |
| MTS | Promega Corp. | G3580 | |
| Glutaraldehyde | Fluka | 49624 | |
| Wright-Giemsa | Sigma-Aldrich | WG32 | |
| 소 태아 혈청(Fetal bovine serum) | GIBCO, by Life Technologies | 10108-165 | |
| CD71 | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | sc-32272 | |
| Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11001 | |
| CD45-FITC | BD Biosciences | 74895 | |
| CD71-PE | BD Biosciences | 555537 | |
| CD235a-PE-Cy5 | BD Biosciences | 555570 | |
| Sodium azide | Sigma-Aldrich | S-8032 |
참고문헌
- Orkin, S., Zon, L. Hematopoiesis: an evolving paradigm for stem cell biology. Cell. 132, 631-644 (2008).
- Spradling, A., Drummond-Barbosa, D., Kai, T. Stem cells find their niche. Nature. 414, 98-104 (2001).
- Panoskaltsis, N., Mantalaris, A., Wu, D.
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재인쇄 및 허가
