질소 산화물 (NO)의 내생적인 생산은 생물 학적 기능의 다양한 조절. 그것은 어떠한 기반 시그널링의 장애 또는 dysregulation이 많은 사람이 질병에 연루되어 있는지 점점 더 분명 해지고 있습니다. 메소드는 더 이상 metabolites 인간 질병에 대한 소설 진단 또는 전조 생체 자료를 제공할 수 없습니다 관련된 계량합니다.
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이 논문에서
요약
초록
질소 산화물은 (NO) 생물 학적 시스템 (혈액 순환에 이하 일초) 1로 극히 짧은 살고있다 이원 자유 라디칼이다. 아니오는 포함한 필수 기능을 조절, 우리의 신체에서 생산되는 가장 중요한 신호 분자 중 하나를 고려 없지만 혈압, 면역 반응 및 신경 통신 규제에 국한되지 수 있습니다. 따라서 생물 학적 매트릭스에서의 정확한 탐지 및 부량는 건강과 질병에서 NO의 역할을 이해하기 위해 중요합니다. NO 이러한 짧은 생리적 반 생활을 통해 어떠한 생화학의 반응 제품의 탐지를위한 대안 전략이 개발되었습니다. 여러 생물 학적 구획의 관련 없음의 metabolites의 양을 정함은 생체내에에 관해서는 어떠한 생산, 생체 이용률과 신진 대사에 중요한 정보를 제공합니다. 간단히 같은 혈액이나 혈장과 같은 하나의 구획을 샘플링하는 것은 전체 보의 정확한 평가를 제공하지 않을 수 있습니다특히 조직에서 어떠한 자격을 마구 없습니다. 실험 동물의 선택 조직으로 혈액을 비교하는 기능까지 건강과 질병의 어떠한 생체 진단 및 전조 유틸리티 등 기초 과학 및 임상 의학 간의 격차를 해소하는 데 도움이됩니다. 따라서 관심의 특정 조직에 혈장 또는 혈액 어떠한 상태의 추정은 더 이상 유효한 접근하지 않습니다. 그 결과, 방법 개발 및 생체내의 실험 동물의 여러 구획의 NO 및 NO-관련 제품 / metabolites의 탐지 및 부량을 허용하는 검증받을 것을 계속한다. 과 질산염 (NO 3 -) - 아질산 (NO 2) 최종 산화에 대한 수용성 guanylyl cyclase (SGC)의 활성화에 어떠한 synthases에 의해 생산에서 어떠한 생화학의 설립 패러다임은 생체내에서 NO의 효과의 일부분에 해당됩니다. S-nitrosothi을 형성하는 단백질 thiols, 차 아민 및 금속과 NO 및 NO-파생 metabolites의 상호 작용ols (RSNOs), N-nitrosamines (RNNOs) 및 nitrosyl-헴는 각각 NO의 cGMP 독립적인 효과를 나타내며 어떠한 의한 SGC의 활성화로 생리학 가능성만큼이나 중요하다. 생리학에서 NO의 진정한 이해는 동시에 여러 구획을 샘플링 생체내 실험에서에서 파생됩니다. 질소 산화물 (NO) 방법론은 어떠한 생화학에 대해서도 많은 논쟁과 토론의 복잡하고 종종 혼란 과학 및 초점이다. 우리의 능력을 구체적에 대한 어떠한 경첩과 관련된없는 새로운 메커니즘 및 신호 전달 경로의 해설은 선택과 sensitively 눈치채지 못한 어떠한와 관련된 모든 복잡한 생물 학적 매트릭스의 어떠한 제품과 metabolites을 수량. 여기서는 HPLC에 의한 아질산염과 질산염의 신속하고 민감한 분석 방법뿐만 아니라 NO의 분자 소스뿐만 아니라 전 생체내과를 결정하는 화학 derivitazation와 체외의 오존 기반 chemiluminescence에서 사용하는 생물 학적 시료의 여유 없음의 검출을 제시장기 목욕 myography.
프로토콜
1. 전체 혈액 수집
- 인간이나 NEM / EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)가 들어있는 튜브에 실험 동물의 정맥 혈액을 수집합니다.
- 즉시 7분 대한 rcf는 (상대 원심력) 혈장 및 적혈구 세포 펠렛을 준비하는 14,300에서 benchtop 원심에 혈액을 다운 스핀.
- 고성능 액체 크로마 토그래피 (HPLC)와 chemiluminescence 검출 (CLD) 분석을 위해 플라즈마 샘플을 준비합니다.
HPLC : 플라즈마, 석출물 플라즈마 단백질까지 10 분간 13,200 rpm으로 소용돌이와 원심 분리기에서 차가운 메탄올의 1시 1분 볼륨을 추가합니다. HPLC 분석을위한 뜨는 수집합니다.
CLD : 나누어지는 구체적으로 분석 nitrosothiols에 sulfanilamide 및 mercuric 염화와 샘플 및 preincubate. - HPLC 및 CLD 분석에 붉은 세포 펠렛을 준비합니다.
HPLC : 10 밀리미터 NEM, 2.5 밀리미터 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)과 ferricyanide 10 밀리미터를 포함 hypotonic 용해 용액에 추가 1시 4분 붉은 세포 펠릿. 와동은 철저하고 1시 1분 메탄올, 와동과 centrif 추가침전물 단백질까지....
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토론
방법은 여러 생물 학적 구획의 관련 없음의 metabolites의 부량 위해 여기에서 설명한 내피에 의한 NO의 기능 측정과 상호 수있는 건강과 질병의 어떠한 생물의 지문 채취를 허용합니다. 이러한 방법은 높은 처리량을 위해 적응을위한 잠재력을 지닌 간단한 샘플 준비가 필요합니다. 이러한 분자의 상대적인 수량은 질환의 실험적 모델과 인간의 환자에서조차 직렬 샘플 수가 NO의 생산과 신진 대사 운명을 이해하는 데 도움이됩니다. 인위적으로 시료 준비하는 동안 이러한 제품의 일부를 생산 어떠한 기반 생체 많은 분석 방법을 감지하지에 많은 함정이 있습니다. 생물 학적 샘플에서 아질산염에주의 회계 인해 시스테인 thiols 6 nitrosothiols 7 artifactual 형성과의 반응에 중요합니다. 무산소 조건에서 아질산의 특정 검출을위한 CLD 기반 방법론은의로 연결다른 생물 학적 구획 8 특정 아질산 환원 효소 효소의 활동으로 인해 일관성있는 결과입니다. 여기에서 설명.......
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공개 사항
관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.
감사의 글
저자 홍 지앙 박사에게 감사를 표합니다 그리고 Deepa Parathasarthy, 시속, 기술 지원 BDS.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| N-ethylmaleimide | 써모 과학 | 23,030 | |
| EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) | 시그마 - 올드 리치 | E7889 | |
| Ferricyanide 칼륨 | Fluka | 60,299 | |
| HPLC | Eicom 사 | 이노-20 | |
| Autosampler | Alcott | ||
| DMT Myograph | 광고 인 스트 루먼트 | ||
| PowerLab | 광고 인 스트 루먼트 | ||
| Chemiluminescent | EcoPhysics | CLD 88Y | |
| 원심 분리기 | Eppendorf | 5415D | |
| 아세틸콜린 | 시그마 - 올드 리치 | A6625 | |
| R-(-) Phenylephrine | 시그마 - 올드 리치 | P6126 |
참고문헌
- Kelm, M. Nitric oxide metabolism and breakdown. Biochimica et Biophysica Acta. 1411, 273-289 (1999).
- Furchgott, R. F., Zawadzki, J. V. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetycholine. Nature. 288....
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재인쇄 및 허가
