الدراسة الحالية يصف نهجا موجها التمايز في حفز البنكرياس من تمايز الخلايا الجذعية الجنينية البشرية. أهمية كبيرة هو أن العثور على نضوج الخلايا البطانية يتوسط شارك في ثقافة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية المستمدة الأسلاف البنكرياس الى خلايا الانسولين تعبير.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
البطانية نضوج خلية يتوسط المشارك ثقافة الإنسان الخلايا الجذعية الجنينية إلى خلايا البنكرياس المنتجة للأنسولين في نهج التفاضل إخراج
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الخلايا الجذعية الجنينية (ESC) واثنين من الخصائص الرئيسية: أنها يمكن أن تكون لأجل غير مسمى نشر في المختبر في حالة غير متمايزة، وأنها ذات قوة تناسلية متعددة، ومن ثم تكون له القدرة على التمايز إلى أنساب متعددة. هذه الخصائص تجعل المجالس الاقتصادية والاجتماعية جذابة للغاية لعلاج الخلايا والتطبيقات القائمة على العلاج التجديدي 1. ولكن لكامل إمكاناتها لتتحقق هذه الخلايا لا بد من التفريق في الظواهر ناضجة وظيفية، والتي هي مهمة شاقة. وثمة نهج واعدة في إحداث تمايز الخلايا هو محاولة لتقليد وعن كثب مسار توالد الأعضاء في إعداد المختبر في. ومن المعروف تنمية البنكرياس تحدث في مراحل معينة 2، بدءا من الأديم الباطن، والتي يمكن أن تتطور إلى أجهزة عدة، بما في ذلك الكبد والبنكرياس. لا يمكن أن يتحقق عن طريق الاستقراء الأديم الباطن من تعديل المسار العقدي من خلال إضافة Activin A 3 بالاقتران مع عوامل نمو عدة 4-7 في المختبر عن طريق إضافة سايكلوبامين 8. وتوسطت نضوج البنكرياس بنسبة الأحداث الموازية عدة بما في ذلك تثبيط الإشارات الشق؛ تجميع أسلاف البنكرياس إلى 3-dimentional مجموعات؛ تحريض الأوعية الدموية، على سبيل المثال لا الحصر. حتى الآن الأكثر نجاحا في المختبر من نضوج الخلايا المشتقة ESC سلف البنكرياس قد تحققت من خلال تثبيط الشق يشير بواسطة مكملات DAPT 9. على الرغم من نجاح، وهذا يؤدي إلى انخفاض العائد من النمط الظاهري ناضجة مع انخفاض وظيفة. وهناك مجال أقل درس هو تأثير الخلية البطانية يشير في نضوج البنكرياس، والذي يتزايد تقدير باعتباره عاملا مهما في المساهمة في الجسم الحي، البنكرياس نضوج جزيرة 10،11.
الدراسة الحالية يستكشف تأثير مثل هذه endothelخلية يشير الاتحاد العالمي للتعليم في نضوج ESC المستمدة من خلايا البنكرياس السلف في انتاج الانسولين جزيرة تشبه الخلايا. نحن الإبلاغ عن متعدد المراحل بروتوكول التمايز الموجهة حيث يتم لأول مرة المجالس الاقتصادية والاجتماعية التي يسببها الإنسان نحو الأديم الباطن بواسطة Activin وجنبا إلى جنب مع تثبيط مسار PI3K. ويتم تحقيق مواصفات البنكرياس من خلايا الأديم الباطن عن طريق تثبيط الإشارات من قبل القنفذ الصوتي سايكلوبامين جنبا إلى جنب مع الحث ريتينويد من قبل إضافة حمض الريتينويك. هو فعل المرحلة النهائية من النضج بواسطة إشارات الخلية البطانية التي حققتها تكوين ثقافة مشتركة. في حين تم اختبار العديد من الخلايا البطانية في الثقافة المشتركة، هنا نقدم البيانات المتوفرة لدينا مع خلايا الفئران الاوعية الدموية الدقيقة في القلب البطانية (RHMVEC)، في المقام الأول لسهولة تحليلها.
البروتوكول
1. خلية الصيانة
- واستمرت hESC H1 (معهد ويسيل) على الآبار hESC المؤهلين المغلفة matrigel mTeSR1 مع وسائل الاعلام، مع وسائل الاعلام تتغير كل يوم. وقد تم طلاء الآبار بواسطة حل matrigel المخففة، التي أعدت عن طريق إضافة 300 ميكرولتر من matrigel hESC في 25 مل من DMEM: F12. تم إضافة 1 مل من هذا الحل matrigel إلى كل بئر من لوحة بئر الست، أو 400 ميكروليتر وأضاف أن كل بئر من لوحة 12 جيدا ويسمح للمعطف لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. وpassaged ميكانيكيا الخلايا في نسبة انقسام 01:04 عن طريق كشط المستعمرات بمجرد أن تم التوصل إليها بين 1 و 1.5mm في الق....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
خلال تطوير البنكرياس، وخلايا البنكرياس التفريق على مقربة مع الخلايا البطانية من الشريان الأورطي، وعلاوة على ذلك، البنكرياس الجزر هي أوعية دموية كثيفة لتعزيز التبادل السريع للالسكر في الدم والهرمونات جزيرة. نظرا لهذه الحقائق، فإنه ليس من المستغرب أن الخلايا البطانية تلعب دورا هاما في عملية توالد الأعضاء البنكرياس. في حين يتزايد أهمية الخلايا البطانية خلال تطوير البنكرياس يجري تقديره، وأقل التحقيق في دوره في تمايز في المختبر من خلايا جنينية. في تقريرنا السابق أنشأنا الدور ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدينا ما يكشف.
شكر وتقدير
نحن نعترف بدعم من المعاهد الوطنية للصحة جائزة مبتكر جديد DP2 116520 وORAU رالف كلية جديد بوي جائزة تحسين.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | فهرس العدد | تركيزات |
| mTeSR1 (مع ملحق) | وقف تقنيات خلية | 5850 | |
| matrigel hESC المؤهلين | العلوم البيولوجية دينار بحريني | 354277 | |
| DMEM: F12 | إينفيتروجن | 11330-032 | |
| MCDB-131 | إينفيتروجن | 10372019 | |
| MCDB-131 (كامل) | مركزنا للتكنولوجيا | MCDB-131 | |
| B27 الملحق | إينفيتروجن | 17504044 | |
| Activin A | R & D | 338-AC | 100ng/ml |
| Wortmannin | إينفيتروجن | W3144 | 1μM |
| KAAD-Cyclopamie | سيغما الدريخ | C4116 | 0.2μM |
| كل ترانس حمض الريتينويك | سيغما الدريخ | R2625 | 2μM |
| DAPT | سيغما الدريخ | D5942 | 30μM |
| نيكوتيناميد | سيغما الدريخ | N0636 | 10 ملي |
| الصوديوم زيلونيت | سيغما الدريخ | S5261 | 30 نانومتر |
| الانسولين | سيغما الدريخ | I1882 | 25 ميكروغرام / مل |
| ترانسفيرين | سيغما الدريخ | T8158 | 50 ميكروغرام / مل |
| EGF | R & D | 236-EG | 10ng/ml |
| EndoGro | مركزنا للتكنولوجيا | ENDOGRO | 10mg |
| الهيبارين | سيغما الدريخ | H3149 | 90μg/ml |
| هيدروكورتيزون | سيغما الدريخ | H0888 | 1μg/ml |
| NucleoSpin الحمض النووي الريبي الثاني | Macherey ناجل | 740955 | |
| ImProm النسخ العكسي الثاني النظام | Promega | A3800 | |
| الرائعة الثاني SYBR الأخضر QPCR سيد مزيج | Straragene | 600548 | |
| Sox17 الماعز مفتش بولكلونل | سانتا كروز | SC-17355 | 1/500 |
| PDX1 الماعز بولكلونل مفتش | سانتا كروز | SC-14662 | 1/500 |
| C-الببتيد الأرنب بولكلونل | خلية اشارة | 4593 | 1/500 |
| اليكسا فلور 488 حمار المضادة للأرنب مفتش | إينفيتروجن | A-21206 | 1/1000 |
| اليكسا فلور 647 حمار المضادة للماعز مفتش | إينفيتروجن | A-21447 | 1/1000 |
الجدول 2. الكواشف وأطقم.
المراجع
- De Vos, J., Assou, S., Tondeur, S., Dijon, M., Hamamah, S. Les cellules souches embryonnaires humaines : de la transgression de l'embryon humain á la médecine régénératrice de demain. Gynécologie Obstétrique & Fertilité. 37, 620-626 (2009).
- Murtaugh, L. C., Melton, D. A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
