Summary
본 논문은 최대 12-24 시간에 조건 같은 열 자극 쥐 온 몸이 고열에 대한 프로토콜을 설명합니다.
Abstract
고열은 정상 위의 핵심 체온의 증가를 정의하는 데 사용하는 일반적인 용어입니다. 그것은 종종 발열 동안 관찰 증가의 핵심 체온을 설명하는 데 사용됩니다. 도움이되는 등 고열의 사용은 암 생물학 분야의 종양 회귀를위한 유망 절차로 부각되었습니다. 이러한 목적을 위해, 가장 중요한 요구 사항은 신뢰성과 균일 한 가열 프로토콜을하는 것입니다. 우리는 쥐 고열 (몸 전체)에 대한 프로토콜을 개발했습니다. 이 프로토콜에서는, 동물은 15 분의 휴식 기간 뒤에 90 분에 고열의 사이클에 노출되어있다. 이 기간 동안 마우스는 음식과 물에 쉽게 액세스 할 수 있습니다. 처음 몇 고열에 노출 사이클 동안 쥐 높은 체온 상승은 동물을 immobilizing에 의해 차단되어 있습니다. 또한, 정상적인 생리는 탈수의 영향을 최소화하기 위해 처음 몇주기에 실시됩니다. 이 프로토콜은 최대 12-24 시간에 쥐 조건과 같은 열 시뮬레이션 할 수 있습니다. 우리는이프로토콜을 설명하기 8-12주 이전 BALB / CJ 여자 마우스를 사용했습니다.
Protocol
1. 동물 윤리
마우스에있는 긴 기간 고열을 수행하기 전에 프로 시저가 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었음을 확인합니다. 본 논문에서 논의하고 함께 동영상에 나오는 모든 절차는 면역학의 국립 연구소의 기관 동물 윤리위원회에 의해 승인되었습니다.
2. 이해 고열
온 몸이 고열 (WBH)는 39.5로 유지 보육에 배치됩니다 prewarmed 케이지 ° C.에 동물을 배치하여 배달됩니다 프로토콜의 표준화 동안, 온도 센서는 수술 생쥐에 이식되었으며, 체온이 다른 실험 조건에서 모니터링되었다. 이것은 온수 환경에서 동물을 배치시의 기온이 점차 37로 증가 관찰되었다 ° C까지 42 ° C 100 분 (그림 1)의 기간을. 일내부 몸의 온도가 외부 환경 온도보다 더 높은 총을 맞은으로 온도에서 "스파이크"를 발생하는 전자가 흥미입니다.
몸의 온도가 40 ° C를 초과하면, 동물은 스트레스와 코 주변 으러과 같은 탈수의 징후를 표시됩니다. 40 이상 체온을 증가 ° C는 으러와 돌이킬 수없는 스트레스 또는 열 응력에 의한 동물의 죽음으로 이어질 것입니다. 따라서 고열 기간 동안의 온도 상승을 방지하는 것이 중요합니다.
고온 스파이크의이 현상은 고열에 노출시 동물의 물리적 과다와 연결되어 있습니다. 비슷한 온도 상승도 다른 그룹에 의해 관찰 된 환경이 10보다 높은 온도를 갖는에게 소개하는시 동물의 물리적 과다와 관련된되었습니다.
우리의 프로토콜에서는, 마우스는 고열에 노출시 고정되어 있습니다. 으로그림 2에 도시 된 바와 같이, 동물의 고정은 온도 상승을 방지합니다.
우리는이 프로토콜을 입증 8-12주 이전 BALB / CJ 쥐를 사용했습니다. 프로토콜은 특정 유형의 / 마우스 변형으로 제한되지 않습니다.
3. 실험 준비
3.1 보육
그들은 좋은 온도 제어를했기 때문에이 실험은 일반적인 CO 2 인큐베이터에서 수행 할 수 있습니다. CO 2 가스 공급을 차단하고, CO 2 인큐베이터 물 잡고 트레이를 제거합니다. 인큐베이터의 일부 모델에서는이 CO 2 컨트롤러를 해제 할 수 있습니다. 마우스 케이지가 편리하게 내부에 배치 할 수 있도록하는 보육의 선반을 마련합니다. 39.5 ° C.에서 보육의 온도를 설정
3.2 연습장
일반적으로 고열 실험은 한 번에 4 마우스에 수행됩니다. 두 케이지가 필요합니다;에전자는 인큐베이터 내부에 배치되고 다른 하나는 실온에서 외부 배치됩니다. 침구의 패치 케이지 내부에 비 균일 온도에서 결과 시간이 서부 유럽 표준시 될 때 케이지의 침대는 피할 수 있습니다. 외부 케이지는 음식 펠릿와 물 병이 있어야합니다.
3.3 마우스의 고정 관
고열 마우스의 처음 4 사이클의 과정에서 천공 튜브에 고정되어 있습니다. 이러한 고정 튜브는 모든 신체 및 튜브 네 가지가 필요합니다 이상 피어싱 3mm 구멍 50 ML '원심 분리기'튜브로 만들어 할 수 있습니다. 50ml 관은 편리하게 팔주보다 오래된 BALB / CJ 쥐를 고정 할 수 있습니다. 적절한 크기의 튜브는 생쥐의 일부 비정상적으로 다른 변형 또는 아주 어린 50 주 이상 오래된 쥐 필요할 수 있습니다.
장소 고정 튜브 및 보육 내부 케이지는 39.5 ° C.에서 유지 있도록 최소한 2 시간 동안 기다려 케이지와mmobilization 튜브는 인큐베이터의 온도를 달성.
4. 고열의 첫 번째 사이클
마우스는 고열에 노출시 탈수가 발생할 수 있습니다. 따라서 실험을 시작하기 전에, 모든 마우스에 0.5 ML 일반 생리 intraperitoneally을 관리 할 수 있습니다. 1 ML의 주사기와 26 G 바늘을 사용합니다.
신속 장소, 각 고정 튜브에서 한 동물을 보육에 배치 새장을 지참하여 보육의 케이지를 다시 배치합니다. 시간을 기록합니다. 이 인큐베이터에서 같은 장소마다의 창구를 유지하는 것이 필수적입니다.
90 분 후, 보육에서 케이지를 꺼내. 고정 튜브에서 동물을 떼고 음식과 물에 쉽게 접근 상온에서 케이지에 배치합니다. 보육에 다시 빈 고정 튜브를 놓습니다.
15 분 후, 고열의 두 번째 사이클은 0을 전달함으로써 시작됩니다.모든 마우스 5 ML 염분 intraperitoneally.
그리고 나서 50 ML 구멍 고정 튜브에 고정 및 보육에 배치됩니다.
5. 후속 고열 사이클
처음 4 사이클의 경우는 고열에 노출시와 첫 두 사이클에 대한 쥐를 고정하는 것이 필수적이며, 생리 주입은 고열 기간을 시작하기 전에 주어집니다.
나머지 뒤에 고열의 이러한 사이클이 완료되고 나면, 쥐 순응하고 고열에 노출시 활동적인이되지 않습니다. 쥐가 쉽게 휴식 시간 동안 음식과 물을 가져가 생리의 intraperitoneal 주사가 필요하지 않을 수 있습니다.
6. 모든 사이클이 완료 후, 마지막 단계는 동물을 검사하는 것입니다
고열주기 동안 죽음도 없습니다. 모든 동물은 처음에 매우 조심스럽게 지켜되어야한다몇 사이클. 신속하게 코 주위에 으러 찾아보세요. 이 현상은 탈수의 서명입니다. 이러한 증상이있는 마우스는 즉시 실온에서 0.5 ML 정상적인 생리 IP와 휴식을 제공해야한다. 고정 마우스의 대부분은 추가 치료가 필요하지 않으며 성공적으로 스트레스에게 고열을 부담합니다.
필요한 사이클을 완료 한 후, 동물은 나약하고 탈진 보일 수 있지만 신속하게 몇 시간 이내에 회복됩니다.
그림 1. 케이지는 39.5 ° C.에서 보육에 배치 된 마우스의 핵심 체온의 변화 90 분 후 케이지는 인큐베이터에서 제거되었습니다 25에 배치 ° C. 빨간 동그라미가 높은 온도 상승을 나타냅니다.
그림 2. 핵심 몸 temperatu의 변화고열주기 동안 고정 쥐를 다시. 동물을 immobilizing 후, 높은 온도의 상승은 우리가 39.5 ° C.에 배치되었을 때 관찰되지 않았다
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Discussion
까지 거슬러 5000 BC으로 이집트 의사들은 열을 종양을 치료. 그리스인들은 어떤 의학적 치료에서의 열 값을 인식했습니다. 모세 언급 온천 (창세기 36:24)의 법의 가장 오래된 텍스트는 therapeutically 체온을 상승합니다.
이전 기술은 고열 1 유도를위한 열 또는 온수 욕조의 유도를위한 pyrogenic 미생물 추출물의 사용 중 하나를 고용. 그러나 이러한 접근 방법 중 어느 것도 쉽게 모니터링하거나 제어 할 수 있습니다. 우리 프로토콜 쥐 통제와 재현 방식으로 고열에 노출되어있다.
이 절차에서는이 고열의 첫 두 사이클 동안 마우스에서 시계를 유지하는 것이 중요합니다. 자신의 털은 코 주위에 관찰 습식 과도한 으러을 발견 경우, 그들은 즉시 휴식을 부여하고 실온에서 탈수를 방지하기 위해 정상적인 생리 intraperiotoneally를 제공해야합니다.
복구 후 십t ">는 이러한 동물은 다시 고열에 노출 될 수있다. 그것은 고열 3-4 사이클 후에는 대부분의 쥐가 활동적인이되지 않는 적극적인 나머지 기간 동안 물과 음식을 섭취 것을보고 흥미 롭습니다.암 치료에 인위적으로 유도 고열을 사용하는 몇 가지 임상 프로토콜은 최근 4,9,11에서 개발되었습니다. 고열의 사용에 대한 몇 가지 보고서는 종양 회귀 3,5-8,12과 관련하여 갈 수 있습니다. 최근 논문에서, 지아 외. 짧은 기간 (30 분) 온 몸이 고열 5 동물을 노출하기위한 전자 히터를 사용하고 있습니다. 긴 기간 (몇 시간 지속) 온 몸이 고열는 더 어려운 절차입니다. 우리는 오랜 기간의 고열에 노출을위한 매우 간단하고 저렴한 프로토콜을 설명하고 있습니다. 이 암 치료를위한 종합적인 전략을 수립 할 수있는 매우 유망한 도구입니다. 단순성과 유틸리티 O에 대한 더 많은 인식과 함께F의 고열 절차는, 그것은 연구자 및 임상 2 사이에 인기가 될 수 있습니다.
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Disclosures
우리는 공개 할 아무 것도 없습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thermistor | RS components | 528-8558 | |
| CO2 Incubator | Heraeus | B5060 EK-CO2 | |
| Mice cages | Citizen industries ltd. | Type B 365X207X190 cm | |
| Animal feed | Provimi India | ||
| Water bottle for cage | Local supplier | Glass bottle | |
| Soldering iron | Solderon, India | ||
| 50 ml Centrifuge tubes | BD Biosciences | 352070 | |
| Timer | Local supplier | ||
| 1 ml Syringe with 26G needle | BD Biosciences | 309602 | |
| Saline | Local supplier |
References
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