Использование искусственного среднего мокроты для тестирования антибиотиков эффективность против Синегнойной палочки В условиях более актуальными для кистозного фиброза легких

Summary

Текущий диагностических антимикробной чувствительности зависит от планктона роста изолятов в богатых питательными веществами, аэробных условиях. Здесь мы используем альтернативные искусственной среде мокроты для изучения антимикробной чувствительности синегнойной палочки биопленки при аэробных и микроаэрофильных условиях более представительным кистозный фиброз легких.

Abstract

Растет обеспокоенность по поводу актуальности тестов на чувствительность к противомикробным препаратам in vitro при применении к изолятам P. aeruginosa от пациентов с муковисцидозом (МВ). Существующие методы основаны на выращивании одного или нескольких изолятов аэробным и планктоническим способом. Заранее определенные пороговые значения используются для определения того, являются ли бактерии чувствительными или устойчивыми к какому-либо конкретному антибиотику¹. Тем не менее, во время хронических легочных инфекций при муковисцидозе популяции P. aeruginosa существуют в биопленках, и есть доказательства того, что окружающая среда в значительной степени микрофильна2. Резкая разница в условиях между бактериями в легких и бактериями во время диагностических тестов поставила под сомнение надежность и даже актуальность этих тестов.

Искусственная среда мокроты (ASM) - это питательная среда, содержащая компоненты мокроты пациента с муковисцидозом, включая аминокислоты, муцин и свободную ДНК. Рост P. aeruginosa в АНМ имитирует рост при КФ-инфекциях, с формированием самоагрегирующих биопленочных структур и дивергенцией популяций^4,5,6. Целью данного исследования явилась разработка микротитрового планшетного анализа для изучения антимикробной чувствительности P. aeruginosa на основе роста в АСМ, который применим как к микроаэрофильным, так и к аэробным условиям.

Анализ ASM был разработан в формате микротитровой пластины. Биопленкам P. aeruginosa позволяли развиваться в течение 3 дней до инкубации с антимикробными препаратами в различных концентрациях в течение 24 часов. После разрушения биопленки жизнеспособность клеток измеряли путем окрашивания резазурином. Этот анализ был использован для определения минимальной ингибирующей концентрации (SMIC) тобрамицина в сидячих клетках для 15 различных изолятов P. aeruginosa в аэробных и микроаэрофильных условиях, и значения SMIC сравнивали с значениями, полученными при стандартном выращивании бульона. Несмотря на то, что были получены некоторые доказательства увеличения значений МПК у изолятов, выращенных в ASM, по сравнению с их планктонными аналогами, наибольшие различия были обнаружены с бактериями, протестированными в микроаэрофильных условиях, которые показали значительно повышенную устойчивость до >128 раз к тобрамицину в системе ASM по сравнению с анализами, проведенными в аэробных условиях.

Отсутствие связи между текущими методами тестирования чувствительности и клиническим исходом поставило под сомнение валидность современных методов³. Несколько моделей in vitro ранее использовались для изучения биопленок P. aeruginosa ^{7, 8}. Тем не менее, эти методы основаны на поверхностно прикрепленных биопленках, в то время как биопленки ASM напоминают те, которые наблюдаются в легких CF⁹. Кроме того, было показано, что пониженная концентрация кислорода в слизи изменяет поведение P. aeruginosa² и влияет на чувствительность к антибиотикам¹⁰. Таким образом, использование ASM в микроаэрофильных условиях может обеспечить более реалистичную среду для изучения чувствительности к противомикробным препаратам.

Protocol

1. Подготовка искусственной среде мокроты (ASM)

1. Добавить 4 г ДНК из спермы рыб в 250 мл стерильной воды очень медленно в течение нескольких часов. ДНК занимает несколько часов до полного растворения и может быть перемешивают в течение ночи при комнатной температуре.
2. Добавить 5 г муцина из свиного желудка (тип II) медленно в 250 мл стерильной воды до муцина полностью не растворится. Решение может быть перемешивают в течение ночи при 4 ° C.
3. Растворить 0,25 г каждая существенные и несущественные L-аминокислот, за исключением L-тирозина и L-цистеин, в 100 мл стерильной воды. Растворить 0,25 г L-цистеина в 25 мл 0,5 М гидроксида калия (М _т 56,11 г / моль) и 0,25 г L-тирозин в 25 мл стерильной воды.
4. Растворите 5,9 мг диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA), 5 г NaCl и 2,2 г хлорида калия в 100 мл стерильной воды.
5. Объединить ДНК, муцин, L-аминокислот, DTPA, NaCl и KCl в 1 литровую бутылку.
6. Добавьте 5 мл яичного желтка электроннойmulsion и заполнения около 850 мл стерильной воды.
7. Отрегулируйте рН до 6,9 с 1 M трис (рН 8,5, M _т 121,14) и довести объем до 1 литра стерильной водой.
8. Стерилизовать АНМ по фильтрации с использованием Vacuubrand ME 2 диафрагмы вакуумного насоса и фильтра Millipore Steritop единиц с порами и шеи размером 0,22 мкм и 45 мм соответственно. Каждый блок Steritop фильтр может использоваться повторно сразу в три раза, однако, фильтры нужно промывать два раза стерильной водой перед повторным использованием. Процесс фильтрации происходит медленно и могут быть выполнены в течение 2 дней. Другие версии ASM были разработаны, в которых используется добавление антибиотиков вместо фильтрации ¹¹ Однако, из-за возможных взаимодействий с другими препаратами, мы не рекомендуем этот метод для конкретного приложения.
9. Без фильтра и фильтруется АНМ должны храниться при температуре 4 ° С в темноте. Использование свежей АНМ рекомендуется однако, это может быть в этих условиях в течение не более одного месяца.

   2. Определение планктонных сидячие Сотовые минимальный метаболический ингибирующая концентрация (PSMIC)

   1. Для определения минимальной концентрации метаболических тормозные (PSMIC) значения за 15 planktonically выросли П. палочки изолятов, микроразведений метода должно быть выполнено, как описано в руководстве Британского общества по антимикробной химиотерапии BSAC ^12. Антибиотик выбора, в этом случае сульфатов тобрамицин, серийно разводили в Лурия-Бертани (LB) среды в 96-и иммунологических планшет, чтобы обеспечить надлежащий диапазон концентрации антибиотиков.
   2. Развести ночь культур P. палочки в LB к OD ₆₀₀ 0,05 (± 0,01) и добавить 100 мкл в лунки 96-луночного иммунологических планшет, содержащий 100 мкл серийно разбавляют антибиотик. В этом случае конечной концентрации тобрамицина сульфата составляет от 512 - 0,5 мкг / мл. Восемь серии из Антибiotic концентрация должна быть выполнена.
   3. Отрицательные скважин управления для каждого изолировать должны быть созданы, в котором не антибиотик добавляется. Кроме того, восемь скважин должен содержать только LB для использования в качестве пустой во время ниже по течению анализа (раздел 2.6).
   4. Инкубируйте 96-луночного микропланшет в течение 1 - 2 дня при температуре 37 ° C без встряхивания в аэробных или микроаэрофильных (5% O _2, 10% CO _2, и 85% N ₂₎ условиям. Микроаэрофильных условиях получены с использованием CampyGen газовой генерации пакетов в больших анаэробных банки.
   5. После инкубации бактерий определяется путем измерения оптической плотности бактериальной культуры в каждой лунке при длине волны 600 нм с использованием Fluostar Омега микропланшетов читателя и анализа MARS данных программного обеспечения.
   6. Поглощение из обработанных антибиотиками планктонных культур _{(антибиотик обработанные клетки планктона)} и поглощения от негативного контроля _{(отрицательный контроль)} должны быть исправлены путем вычитанияионов фоне абсорбции, полученной из скважин содержащих LB только _{(пустой).} Процент ингибирования жизнеспособность в дальнейшем рассчитывается как (в среднем _{антибиотик обработанные клетки планктонных} / означает _{отрицательный контроль)} х 100%. PSMIC ₉₀ определяется как концентрации антибиотика вызывает 90% ингибирование планктонных бактерий.
   7. Для определения жизнеспособности бактериальных после лечения антибиотиком выбора, 10 мкл 0,02% (объем / объем) resazurin (разводят в дистиллированной воде) добавляли в каждую лунку и планшеты инкубируют в аэробных условиях в течение 1 - 2 ч при 37 ° C, при встряхивании при 150 оборотах в минуту. Жизнеспособных клеток позволит снизить синего красителя resazurin в розовый флуоресцентный форме resorufin.
   8. После инкубации с resazurin, следить за флуоресценцию каждой скважине при возбуждении длиной волны 540 нм и длиной волны излучения 590 нм в Fluostar Омега микропланшетов читателя. Эти данные должны быть проанализированы, как описано бытьнизкая.

   3. Определение концентрации биопленки сидячие минимальных ингибирующих Cell (BSMIC)

   1. Ночь культуры P. палочки (в данном случае, 15 изолятов P. палочки используются) следует развести в LB к OD ₆₀₀ 0,05 (± 0,01), то дальнейшее разбавленной 1:100 в свежем ASM (общий объем 1,8 мл).
   2. Разведенный культур (1,8 мл) следует добавить в каждую лунку 24-луночного культуры тканей лечение пластины. Три скважины должно содержать АНМ только для использования в качестве пустой во время ниже по течению анализа (раздел 3.9).
   3. Безопасность 24-луночных планшетах с лабораторными парафильмом и инкубировать в течение 3 дней в аэробных или микроаэрофильных условиях при 37 ° C, при встряхивании при 75 оборотах в минуту. Микроаэрофильных условия должны быть получены с помощью CampyGen газовой генерации пакетов в больших анаэробных банки.
   4. Развести антибиотик выбора в этом случае сульфатов тобрамицин, чтобы обеспечить соответствующий диапазон концентрации в преснойASM. В этом случае конечной концентрации колебались от 512 - 1 мкг / мл. Добавить каждой концентрации антибиотика, в объеме 200 мкл, в лунки 24-луночных планшетах. Четыре серии из концентрации антибиотика должны быть выполнены. Биопленки не подвергается антибиотик выбора были использованы в качестве отрицательного контроля.
   5. Безопасность 24-луночных планшетах с лабораторными парафильмом и инкубировать в аэробных или микроаэрофильных условия для еще 24 ч при температуре 37 ° C, при встряхивании при 75 оборотах в минуту.
   6. После инкубации в присутствии антибиотика выбора, нарушить бактериальную биопленку с использованием 100 мкл 100 мг / мл целлюлозы (разбавленный в 0,05 М буфера цитрата [9,6 г / л Citrate.H ₂ 0 в воде и рН до 4,6 с NaOH] ) и инкубировать 24-луночных планшетах в аэробных условиях при 37 ° C, при встряхивании на 150 оборотов в минуту в течение 1 часа. При необходимости, биопленки могут быть дополнительно нарушается ручной пипетирования на данном этапе.
   7. Для определения метаболической активностибактериальных клеток освобождается от нарушена биопленки, 100 мкл 0,02% (объем / объем) resazurin (разводят в дистиллированной воде) должны быть добавлены в каждую лунку 24-луночных планшетах и ​​инкубировали в течение 1 - 2 ч при 37 ° C , при встряхивании при 150 оборотах в минуту.
   8. После инкубации с resazurin, измерять флуоресценцию каждой лунки использованием длины волны возбуждения 540 нм и длиной волны излучения 590 нм в Fluostar Омега микропланшетов читателя и анализа MARS данных программного обеспечения.
   9. Флуоресценции от обработанный антибиотиком биопленки _{(F, обработанный антибиотиком, биопленки)} и флуоресценции от негативного контроля (F _{отрицательного контроля)} должна быть исправлена ​​путем вычитания фоновой флуоресценции получены из скважин содержащих только ASM (F _{пустым).} Процент ингибирования жизнеспособность в дальнейшем рассчитывается как (в среднем _{лечение антибиотиками} F _{биопленки} / F означает _{отрицательный контроль)} х 100%. BSMIC ₉₀ определяется как antibioтик концентрация, вызывающая 90% подавление метаболической активности.

   4. Представитель Результаты

   ASM образование биопленки можно в небольших (2 мл) объемы и биопленки полностью сформирован в течение 3 дней (рис. 1А). Это может быть продемонстрировано с помощью пипетки строго биопленки, которые должны быть трудно нарушить. Микроколоний сопоставимы с выращивается в больших объемах ⁴ (рис. 1б). На рисунке 2 показаны основные различия между клеток, выращенных planktonically и в биопленки, которая была определена на электронно-микроскопического анализа изображений. Биопленки культур ясно показывают значительное уровня внеклеточного матрикса окружающие клетки и отдельных структур в биопленки трудно определить.

   Некоторые исследования показывают, что биопленки образа жизни могут повлиять на антимикробную чувствительность ^{13, 14.} Наш небольшой масштаб АНМ анализ может быть использован для Определяетrmine BSMIC нескольких антибиотиков для нескольких штаммов одновременно. Рабочий процесс анализа показано на рисунке 3. Влияние антибиотиков на бактериальные жизнеспособность клеток может быть измерена с помощью анализа resazurin. Антибиотики в данном случае тобрамицин, могут быть добавлены к установленному биопленки и инкубировали в течение 24 часов. После этого биопленки нарушается и resazurin добавляется.

   Метаболическую активность клеток может уменьшить resazurin красителя в результате изменения цвета от синего (resazurin) до розового (resorufin) ^15. Рисунок 4а показан пример анализа, в котором П. палочки инкубировали с различными концентрациями тобрамицин до нарушения биопленки и добавления resazurin в планшета. Синий без флуоресцентного цвета указывает нежизнеспособных клеток, в то время как жизнеспособных клеток уменьшить красителя розового флуоресцентного форме, resorufin. МРОТ может быть вычислена путем преобразования флуоресценции в процентахОстальные бактериальной устойчивости. рисунок 4B показывает изменение в% жизнеспособность при увеличении концентрации тобрамицин. 10% жизнеспособность была выбрана в качестве отсечения для расчета МРОТ _90.

   В аэробных условиях, тобрамицин МРОТ ₉₀ значений выше для клеток, выращенных в биопленки, чем планктона культур. В таблице 1 показаны изменения в PSMIC ₉₀ и BSMIC ₉₀ для всех изолятов испытания. Таблица 2 показывает, что в аэробных условиях, резкое увеличение сопротивления тобрамицин (2> 32 кратное увеличение МРОТ) наблюдается для большинства изолятов при выращивании в ASM (биопленки режим) по сравнению с LB (планктонные режим). Кроме того, биопленок, выращенных в условиях микроаэрофильных выставлены увеличился МРОТ от 2 до> 128 раз по сравнению с биопленок, выращенных в аэробных условиях.

   
   Рисунок1. Биопленки из палочки в П. П. АНМ палочки штамма PAO1 является макроскопически видимых скоплений (микроколонии) при выращивании в ASM., образование биопленки в 30 мл АНМ культуры (крупный), после 7 дней роста винтовой крышкой стеклянной колбы Duran. B, формирование биопленок в 2 мл АНМ культур ( мелкие) после 3 дней роста в 24-луночных полистирола.

   
   Рисунок 2. ПЭМ микрофотографии АНМ биопленки А / С ТЕМ микроскопа (х, 27 000) из PAO1 выросли planktonically и АНМ соответственно, B / D ПЭМ микрофотографии (x57, 000) PAO1grown планктонных и АНМ соответственно. Planktonically выращивают бактерии выращивали в течение ночи в LB бульоне. Биопленки культивировали в течение 7 дней в 30 мл АНМ культур. Черные стрелки ссылаться на ячейки в биопленки и звезды относятся к внеклеточного пространства. Масштаб баров = 1мкм.

   
   Рисунок 3. Workflow АНМ биопленки антимикробной чувствительности анализа.

   
   Рисунок 4. Использование resazurin для определения антибиотиков восприимчивости бактериальные клетки инкубировали с различными концентрациями антибиотика, а остальные метаболической активности определяли с помощью resazurin., Синий, не люминесцентные окисленной форме resazurin указывает нежизнеспособных клеток и уменьшается метаболический активные клетки розового флуоресцентного resorufin. B, интенсивность флуоресценции преобразуется в процентах оставшихся бактериальной устойчивости. 10% жизнеспособность была выбрана в качестве отсечения для расчета MSMIC90. Щелкните здесь для просмотра LARгер фигуры.

   Деформации	PSMIC 90 (мкг / мл) 1		BSMIC 90 (мкг / мл) 1
   	Аэробный	Микроаэрофильных 2	Аэробный	Микроаэрофильных 2
   PAO1	4	4	8	> 512
   Ливерпуль эпидемии штамма (LES) изолирует
   LESB58 21	8	64	64	128
   LES400 22	32	128	8	256
   LESB25	16	32	256	512
   LESB55	16	64	64	> 512
   LESB64	16	64	> 512	> 512
   LES431 22	4	8	32	> 512
   LESB49	16	64	64	256
   LES109	32	128	32	> 512
   Non-ЛЕ изолятов
   49461	16	32	16	> 512
   59032	0,5	2	4	> 512
   59073	> 512	> 512	> 512	> 512
   59076	16	32	32	> 512
   27	8	16	4	> 512
   45	16	32	4	> 512

   Таблица 1. Восприимчивость к П. палочки тобрамицин.

   ₁ Для определения PSMICs и BSMICs тобрамицин использовался в 2 раза серийных разведений
   от 512 - 0,5 мкг / мл (n = 8 для каждой концентрации) и 512 - 1 мкг / мл (п = 4 для каждого
   концентрации), соответственно;; PSMICs определяли с помощью стандартных
   микроразведений метода ^1.

   ₂ микроаэрофильных условиях на 5% O _2, 10% CO _2, и 85% N _2.

   Напрягать	PSMIC 90 / BSMIC 90 раз изменения 1
   	PSMIC аэробных → PSMIC микроаэрофильных	BSMIC аэробных → BSMIC микроаэрофильных	PSMIC аэробных → BSMIC аэробных	PSMIC микроаэрофильных → BSMIC микроаэрофильных
   PAO1	0	> 64	2	128
   LES изолирует
   LESB58	8	2	8	2
   LES400	4	32	0,25	2
   LESB25	2	2	16	16
   LESB55	4	> 8	> 8
   LESB64	4	ND	> 32	> 8
   LES431	2	> 16	8	> 64
   LESB49	4	4	4	4
   LES109	4	16	0	> 4
   Non-ЛЕ изолятов
   49461	2	> 32	0	> 16
   59032	4	> 128	8	> 256
   59073	ND	ND	ND	ND
   59076	2	> 16	> 16
   27	2	> 128	0,5	> 32
   45	2	> 128	0,25	> 16

   4 2

   Таблица 2. Fold изменения PSMICs и BSMICs в тобрамицин.

   ₁ Н.Д., не определено, значения жирным шрифтом указывают МРОТ раза изменений> 10.

Discussion

В этом исследовании мы использовали новые модели в пробирке на основе ASM повторить P. палочки биопленки условиях в течение ^4-х легких при МВ. Эта модель была успешно изменено для малых, высокой пропускной способности тестирования антимикробных препаратов.

Важных шагов этого анализа являются:

1. В соответствии подготовке АНМ средств массовой информации и поддержания стерильности. Мы посвятили много времени на оптимизацию, каким образом каждый компонент добавляется чтобы получить воспроизводимые результаты каждый раз. Фильтрация АНМ медленно, но предпочтительнее автоклавирование, которая может привести к повреждению компонентов муцина. Мы не советуем добавлением антибиотиков, как это было предложено другими ^11, поскольку это может наложить значительные селективного давления, привод мутаций, вызывает лизис профага ¹⁶ и существенно изменить выражение несколько бактериальных генов.
2. Анализ должен быть оптимизирован в соответствии с объемом ое ASM используется. Тряска скорости увеличиваются на меньшие объемы и короткие биопленки жизненного цикла наблюдается.

Очевидное применение мелких АНМ модель биопленки является более реалистичным определением биопленки антимикробной восприимчивости (BSMIC _90). Анаэробные и микроаэрофильных ниши находятся в легких при МВ и есть доказательства того, что кислород ограничено глубоко внутри зрелых биопленок ^{2, 17.} Здесь мы показываем, что 10/14 клинических P. палочки изолятов CF больной мокрота демонстрируют значительное (4 - ≥ 128 раз) снижение чувствительности к тобрамицин микроаэрофильных условиях в ASM. Результаты этого исследования показывают, что антибиотики, такие как тобрамицин, могут быть менее эффективными в отношении P. палочки инфекции в легких при МВ, чем указано с помощью традиционных методов тестирования восприимчивости. Эти результаты отражают предыдущие исследования по антимикробной чувствительности биопленки ^10. Малыемасштаб АНМ анализов таким образом, обеспечить простой высокой платформе пропускную способность для создания значимых данных антибиотиков восприимчивость, чтобы лучше информировать терапевтических решений. Анализ ограничен тем же способом, как и обычные антибиотики тестирования чувствительности в том, что одной колонии выбрали для обследования, которые не могут быть репрезентативными для всего населения. Тем не менее, мы считаем, что подход (я) с использованием не-поверхность прилагается рост биопленки и (II), применимые к микроаэрофильных условиях, представляет собой явную альтернативу и потенциал улучшения существующих методов. Мы считаем, что этот анализ является подходящей моделью для изучения П. населения палочки биопленки. Дальнейшие испытания в клинических условиях было удостовериться в том, антибиотик восприимчивости на основе биопленки выращенных P. палочки может привести к различным антибиотикам выбор с потенциально улучшить микробиологические и клинические исходы. Подобные исследования с использованием классических моделей биопленки показал, что BSMIC значения приводятразличные рекомендации по антибиотикотерапии ^5,17.

В дополнение к тестированию на эффективность борьбы с инфекционными агентами, АНМ система представляет собой дешевый, простой и воспроизводимой альтернатива моделей на животных для исследований, таких как те, которые направлены на понимание диверсификации P. палочки населения. Мы наблюдали обширный неоднородность в природных популяциях P. палочки оправился от CF больной мокрота ^{18, 19.} Подобные фенотипической и генотипической диверсификации можно наблюдать во время роста в АНМ ⁴ (и наши неопубликованные данные), что делает его привлекательным в пробирке модель CF условиях легкого. Относительная простота АНМ модель позволяет легко разрабатывать долгосрочные эксперименты адаптации, направленные, например, при мониторинге воздействия антибиотиков или других нагрузок на П. расхождение палочки населения. Кроме того, другие бактериальные патогены могут быть выращены вASM. Например, Fouhy соавт. 2007 году использовать ASM изучить формирование биопленок С. maltophillia ^20.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Название реагента	Компания	Номер по каталогу
ДНК из спермы рыб	Sigma-Aldrich	74782
Муцин от свиного желудка, тип II	Sigma-Aldrich	M2378
L-аланин	Acros Organics	102830250
L-аргинин	Sigma-Aldrich	A5006
L (+)-аспарагина моногидрата	Acros Organics	175271000
L (+)-аспарагиновой кислоты	Acros Organics	105041000
L-цистеин	Сигма-Adrich	168149
L (+)-глутаминовая кислота	Acros Organics	156211000
L-Глютамин	Sigma-Aldrich	G3126
Глицин	Acros Organics	220911000
L-гистидин	Сигма-Adrich	H8000
L-изолейцин	Sigma-Aldrich	I2752
L-лейцин	Sigma-Aldrich	L8000
L (+)-лизин моногидрохлорид	Acros Organics	125222500
L-метионин	Sigma-Aldrich	M9625
L-фенилаланин	Acros Organics	130310250
L-пролина	Sigma-Aldrich	P0380
L-серин	Acros Organics	132660250
L-треонин	Acros Organics	138930250
L (-)-триптофана	Acros Organics	140590250
L-тирозин	Acros Organics	140641000
L-валин	Sigma-Aldrich	V0500
Диэтилентриаминпентауксусной кислоты	Sigma-Aldrich	32318
NaCl	Fisher Scientific	S/3160/60
KCl	BDH	BDH0258
KOH	BDH	BDH0262
Яичный желток эмульсии	Sigma-Aldrich	17148
ME 2 диафрагмы вакуумного насоса	Vacuubrand	696126
Steritop фильтры (размер пор 0,22 мкм, шеи размер: 45 мм)	Millipore	SCGPT10RE
Лурия-Бертани среднего	Сигма	L2897
96-луночных планшет	Sarstedt	82,1581
24-и культуре тканей обработанных плит	Иваки	3820-024
CampyGen пакеты газа поколения	Oxoid	CN0025
Микроаэрофильных камеры	Oxoid	HP0011
Тобрамицин сульфат	Sigma-Aldrich	T1783
Целлюлазы, из Aspergillus Нигер	Sigma-Aldrich	22178
Resazurin	Sigma-Aldrich	199303
Citrate.H 2 0	BDH	BDH0288
Fluostar омега микропланшетов читателя	BMG-Labtech	SPECTROstar Omega