Цифровой прижизненной микроскопии эпифлуоресцентной посткапиллярных венул в cremasteric микроциркуляция является удобным способом для получения понимание лейкоцитов эндотелия взаимодействия В естественных условиях При ишемии-реперфузии (IRI) из поперечно-полосатой мышечной ткани. Мы здесь представить подробный протокол безопасно выполнять технику и обсудить ее применения и ограничения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
В режиме реального времени Digital Imaging лейкоцитов-эндотелиальной взаимодействия при ишемии-реперфузии (ИРИ) в мышцах Кремастер Крысы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Ишемии-реперфузии (ИРИ) был вовлечен в большое множество патологических состояний, таких как инсульт, инфаркт миокарда, кишечной ишемии, а также после трансплантации и сердечно-сосудистой хирургии 1. Реперфузии ранее ишемические ткани, в то время важное значение для предупреждения необратимых повреждение ткани, вызывает чрезмерное воспаление пораженной ткани. Рядом с производством реактивных форм кислорода, активации системы комплемента и повышенной проницаемости капилляров, активации лейкоцитов является одним из принципа актеров в патологический каскад воспалительных повреждений тканей при реперфузии. 2, 3 лейкоцитов активации многоступенчатый процесс, состоящий прокатки, сцепление фирмы и переселение и опосредуется сложным взаимодействием молекул адгезии, в ответ на хемоаттрактантов такие как дополнение факторов, хемокинов, или тромбоцитов, фактор активации 4. <с классом = "jove_content"> В то время как лейкоциты прокатки в посткапиллярных венул преимущественно опосредовано взаимодействием селектины 5 их счетчик лигандов, фирма адгезии лейкоцитов к эндотелию является селектина контролируемые через связывание молекулы межклеточной адгезии (ICAM) и сосудистые сотовых молекул адгезии (VCAM). 6, 7
Золотой стандарт в естественных условиях наблюдения лейкоцитов эндотелия взаимодействия является метод прижизненной микроскопии, впервые описанная в 1968 году 8.
Хотя различные модели IRI (ишемии-реперфузии) были описаны для различных органов, 9-12 мало подходит для прямой визуализации лейкоцитов набор в микроциркуляторного русла на высоком уровне качества изображения 8.
Мы здесь способствовать цифровой прижизненной микроскопии эпифлуоресцентной посткапиллярных венулы в cremasteric микроциркуляциюкрыс 13 как удобный способ для качественного и количественного анализа лейкоцитов набор для IRI-исследований в поперечно-полосатой мышечной ткани и обеспечивает детальное руководство для достижения техники. Мы также иллюстрируют распространенные ошибки и полезные советы, которые должны позволить читателю по-настоящему оценить и безопасно выполнять методом.
В шаг за шагом протокол изобразить, как начать работу с дыханием контролируемой анестезии при достаточном мониторинга держать животное твердо наркозом в течение длительного периода времени. Затем описываются cremasteric подготовка в виде тонкого плоского листа за выдающиеся оптическим разрешением и обеспечивают протокол лейкоцитов изображений в ИРИ, который был хорошо зарекомендовали себя в наших лабораториях.
Протокол
1. Анестезия и мониторинга
- Соответствующие национальные и институциональные этика должна быть на месте до выполнения экспериментов на животных. После одобрения со стороны комитета по этике Anesthetize мужчина Sprague Dawley крыс с массой тела от 120 - 180 г. Доставка 2 - 3% по объему ИФ в окно из плексигласа с помощью ИФ испаритель и поместить крыс внутри.
- Как только соответствующий уровень анестезии достигается (отсутствие реакции на ноги или хвост щепотку) крыс взвешивают и побрился на брюшной шейной области.
- Положите крысу в спинной лежачее положение на грелку, чтобы поддерживать температуру тела на 37 ° С и применяются ИФ на 2% по о....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Лейкоцитов-эндотелиальной взаимодействия, производство активных форм кислорода и активации системы комплемента являются ключевыми особенностями IRI-индуцированной дисфункции ткани. 26 микроциркуляции пораженной ткани рассматривается как неотъемлемый сайт воспалительные заболевания. Помимо бывших естественных экспериментов, таких как поток камера тесты 27, 28 необходимо в обязательном порядке предоставлять устоявшихся моделей прижизненного изображения для дальнейшей оценки в естественны.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нет конфликта интересов объявлены.
Благодарности
Эта работа была поддержана грантом "Deutsche Forschungsgemeinschaft" в СУ Eisenhardt (EI 866/1-1).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Наименование оборудования: | Компания: | Каталог №: | Комментарии: |
| Forene 100% (V / V) | Аббат | B506 | API изофлуран |
| Terylene Шовный | Serag Weissner | OC108000 | |
| Portex изобразительных Диаметр полиэтиленовых труб | Smiths Медицинский | 800/100/100 | 0,28 мм внутреннего диаметра |
| 0,9% физиологического раствора | Fresinus Каби | 808771 | |
| Изменение-наконечником люкс прижигания комплект | Bovie медицинской | Del1 | |
| Abbocath-T 14G | Venisystems | G713- A01 | используется в качестве объектива трубы |
| Servo 900C Вентилятор | Маке | использоваться в качестве животного ventialtor | |
| Логический преобразователь давления | Smiths Медицинский | MX1960 | |
| Sirecust 404 монитор | Сименс | ||
| ABL 700 Настольный анализатор | Радиометр | для измерения артериального газа | |
| Грелки | Effenberger | 8319 | |
| Алюминиевые этап | Alfun | AW7022 | |
| Хирургический микроскоп OPMI 6-SDFC | Carl Zeiss | ||
| Микрохирургические инструменты лаборатории си др. | S & T | 767 | |
| Бимер судно клип | Динер | 64,562 | |
| Применение щипцов | Динер | 64,568 | Клип на судно Бимер |
| Родамина 6G | Sigma-Aldrich | R4127 | |
| Вазелин белый DAB | Уинтроп | 2726853 | |
| Крышка стекла | 32x32 мм | ||
| Прижизненные установки | |||
| Zeis Axio Scope-1 MAT | Карл Zeis | 490036 | эпифлуоресцентной микроскоп |
| 470 нм светодиодные | Карл Zeis | 423052 | Источник света флуоресценции |
| Colibri 2 Системные | Карл Zeis | 423052 | |
| W-план Apochromat 20x / 1,0 DIC | Карл Zeis | 421452 | Цель погружения в воду |
| AxioCam MRM Правка 3 FireWire | Карл Zeis | 426509 | высокое разрешение цифровых камер |
| Axio LE зрения программного обеспечения | Карл Zeis | 410130 | использовать для автономного анализа |
Ссылки
- Cetin, C. Protective effect of fucoidin (a neutrophil rolling inhibitor) on ischemia reperfusion injury: experimental study in rat epigastric island flaps. Ann. Plast. Surg. 47, 540-546 (2001).
- Granger, D. N.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
