ساد هو السبب الرئيسي للعمى في العالم. الطاقة الشمسية الأشعة فوق البنفسجية (الأشعة فوق البنفسجية) هو عامل الخطر الرئيسي للتنمية الساد. تم تطوير نموذج حيواني من الأشعة فوق البنفسجية التي يسببها حتى الساد-B. في هذه المادة ونحن تصف أساليب التحقيق في تشكيل الساد: التعرض ل، الأشعة فوق البنفسجية الكمية RT-PCR والمناعية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ساد هو السبب الرئيسي للعمى في العالم 1. وتعرف منظمة الصحة العالمية الساد كما تغيم عدسة العين مما يعوق نقل الضوء. ساد هو مرض متعدد مضروب المرتبطة والسكري الإشعاع، والتدخين فوق البنفسجية (الأشعة فوق البنفسجية)، والكحول، والإشعاع المؤين، والمنشطات وارتفاع ضغط الدم. هناك أدلة قوية التجريبية 2-4 والوبائية للأشعة فوق البنفسجية يتسبب 5،6 التي الساد. وضعنا نموذج حيواني لالناجم عن الأشعة فوق البنفسجية B في كل من الساد 7 تخدير الحيوانات وغير تخدير 8.
العلاج الوحيد للساد هو عملية جراحية ولكن هذا العلاج ليس في متناول الجميع. وتشير التقديرات إلى أن التأخير لبداية ساد لمدة 10 سنوات يمكن أن تقلل من الحاجة إلى جراحة الساد بنسبة 50٪ 9. لتأخير حدوث المياه الزرقاء في العين، وهناك حاجة لفهم آليات تشكيل الساد والوقاية تجد فعالة STRATegies. بين آليات التنمية الساد، موت الخلايا المبرمج يلعب دورا حاسما في بدء الساد في البشر والحيوانات 10. ولقد انصب اهتمامنا في الآونة الأخيرة موت الخلايا المبرمج في عدسة كآلية للتنمية الساد 8،11،12. من المتوقع أن التوصل إلى فهم أفضل لتأثير الأشعة فوق البنفسجية على مسار موت الخلايا المبرمج سوف توفر إمكانيات اكتشاف أدوية جديدة لمنع إعتام عدسة العين.
في هذه المقالة، ونحن تصف كيفية الساد يمكن أن يتسبب في التعرض تجريبيا من الجسم الحي للأشعة فوق البنفسجية-B. يتم عرض مزيد RT-PCR والمناعية كأدوات لدراسة الآليات الجزيئية للأشعة فوق البنفسجية من الساد الناجم-B.
البروتوكول
1. التعرض للأشعة فوق البنفسجية
- 15 دقيقة قبل التعرض، تخدير الأنثى سبراغ داولي الفئران بمزيج من 90 ملغ / كغ Ketalar (الكيتامين) و 10 ملغ / كغ Rompun (زيلازين) عن طريق الحقن داخل الصفاق.
- وضع الحيوانات في restrainer الفئران وتشديد الأحزمة حتى تجميد الفئران دون التسبب في أزمة الجذع 13.
- غرس Mydriacyl (تروبيكاميد)، 10 ملغ / مل، في كلتا العينين من الفئران للحث على توسيع حدقة العين.
- وضع ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وقدرت مصادر مختلفة من التباين في القياسات مع تحليل التباين ووجد أن ثلاثة قياسات النظر لكل حيوان التباين للقياسات كان بناء على أمر من 15٪ من تلك الحيوانات. وبالتالي، معتبرا كله تحليل العدسة، فإنه من غير الممكن لزيادة الدقة. توضيح الاختبار متعامد على النقيض ذات دلالة إحصائية لرسالة كاسباس-3 الفاصل الزمني بين 120 ساعة مقابل فترات الكمون الكمون أقصر.
في التعرض لتلك الأشعة المجراة يدفع كاسباس-3 التعب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وتصف هذه الورقة دراسة الأساليب التي تمكن الأحداث الجزيئية التي تحدث أثناء الساد الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية-B.
النظر، التي تم اشتقاق معظم المعلومات المتاحة للفي الجسم الحي الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية الساد من التجارب على الفئران سبراغ داولي البيضاء 7، 16، 17، 18، 19، قررنا استخدام البيضاء سبراغ داولي الفئران وفي الدراسة الحالية. وكان عمر الفئران ستة أسابيع من العمر. وقد تم اختيار ج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل معهد كارولينسكا KID التمويل، السويدية الإشعاع هيئة حماية، معهد كارولينسكا مؤسسة أبحاث العيون، بندقية اوتش برتيل Stohnes Stiftelse، وسانت إريك في مستشفى العيون مؤسسة أبحاث، Ögonfonden، Konung غوستاف V: S اوتش Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| اسم كاشف | شركة | كتالوج رقم | التعليقات (اختياري) |
| Ketalar | شركة فايزر | 150086 | 50 ملغ / مل |
| Rompun | باير | 022545 | 20 ملغ / مل |
| مرهم عيني البسيط | Apoteket، السويد | 336164 | 5 غ |
| Mydriacyl | ألكون | 00352 | 10 ملغ / مل |
| حل متوازن الملح | ألكون | 0007950055 | |
| 3.5-UL β المركابتويثانول | |||
| NucleoSpin RNA RNA II مجموع العزلة عدة | Macherey-ناجل شركة محدودة وشركاه، دورين، ألمانيا | 740955،50 | |
| الاشعال DNA محددة P53 | biomers.net شركة محدودة | والعرف | |
| طق بوليميريز الحمض النووي، dNTPack | روش | 04 728 866 001 | |
| الاغاروز | سيجما | A5093 | |
| إيثيديوم بروميد الحل 0.5 ملغ / مل | سيجما | E1385 | |
| نانو إسقاط ND-1000 طيفي | NanoDrop المنتجات | ||
| 1 ش التوليف [كدنا] ستراند عدة لRT-PCR (AMV) | روش تشخيص محدودة | 11 483 188 001 | |
| iCycler MyiQ اللون الحقيقي PCR واحدة الكشف وقت النظام | بيو راد مختبرات | ||
| 96-وحة جيدا | Sarstedt | 72.1979.202 | |
| ماجستير TaqMan التعبير الجيني ميكس | النظم البيولوجية التطبيقية | 4369016 | |
| TaqMan الفحص التعبير الجيني لكاسباس 3 | النظم البيولوجية التطبيقية | Rn00563902_m1 | |
| TaqMan الفحص التعبير الجيني ل18S | النظم البيولوجية التطبيقية | Hs99999901_s1 | |
| MyiQ البرمجيات | بيو راد مختبرات | ||
| المشقوق كاسباس-3 (Asp175) | تكنولوجيا الخلايا مما يشير | 9661 | |
| أرنب المضادة مفتش الحكومة | Abcam | Ab6798 | |
| سكر القصب | سيغما الدريتش | 84097 | |
| Vectashield | ناقلات المختبرات | ||
| مجهر عالمي Axioplan 2 التصوير | كارل زايس | ||
| بارافورمالدهيد | سيغما الدريتش | 441244 | |
| TBE العازلة 10X | Promega | V4251 |
المراجع
- Brian, G., Taylor, H. R. Cataract blindness: challenge for the 21 st century. Bulletin of the World Health Organization. 79, 249-256 (2001).
- Jose, J. G., Pitts, D. G. Wavelength dependency of cataracts in albino mice following chronic exposure.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
